時(shí)間：2023-07-16 08:32:18
導(dǎo)語(yǔ)：在自動(dòng)化免疫分析的撰寫(xiě)旅程中，學(xué)習(xí)并吸收他人佳作的精髓是一條寶貴的路徑，好期刊匯集了九篇優(yōu)秀范文，愿這些內(nèi)容能夠啟發(fā)您的創(chuàng)作靈感，引領(lǐng)您探索更多的創(chuàng)作可能。
4月16日，植物醫(yī)生DR PLANT品牌戰(zhàn)略暨蘭花潤(rùn)顏面膜新品上市活動(dòng)在北京競(jìng)園藝術(shù)中心舉行，植物醫(yī)生董事長(zhǎng)解勇先生、中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所王雨華副所長(zhǎng)、植物醫(yī)生首席科學(xué)家一中國(guó)知名植物學(xué)家裴盛基教授、知名藝人馬天宇以及來(lái)自全國(guó)各地的300位媒體朋友、品牌嘉賓和“植粉”會(huì)員們共同出席了此次活動(dòng)。
作為會(huì)的神秘嘉賓，在《花樣姐姐》中被盛贊為“暖男”的馬天宇出席活動(dòng)并演唱了歌曲《該死的溫柔》。馬天宇自稱(chēng)是植物醫(yī)生DR PLANT品牌的忠實(shí)粉絲，并分享了成為“植粉”的經(jīng)歷。
植物醫(yī)生DR PLANT品牌公司成立于1994年，20年來(lái)一直專(zhuān)注于植物護(hù)膚領(lǐng)域，堅(jiān)持為消費(fèi)者提供最安全有效的植物美肌方案。
在精進(jìn)的探索研究中，植物醫(yī)生DRPLANT發(fā)現(xiàn)，高山植物，因獨(dú)特的地域性，擁有海拔高無(wú)污染、溫差大無(wú)病蟲(chóng)害無(wú)農(nóng)藥殘留、日照長(zhǎng)活性成分更豐富等自然特點(diǎn)，可以更加有效的應(yīng)用于植物護(hù)膚研究中。
2014年，植物醫(yī)生DR PLANT宣布與中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所達(dá)成20年戰(zhàn)略合作，聯(lián)合成立“植物醫(yī)生護(hù)膚研發(fā)中心”，啟動(dòng)國(guó)家級(jí)科研力量，力求為中國(guó)女性打造更為安全、有效的純凈美肌方案。
植物醫(yī)生DR PLANT品牌也成為昆明植物研究所唯一官方合作護(hù)膚品牌。雙方還將聯(lián)合打造中國(guó)首個(gè)“植物王國(guó)博物館”，面積全球第一，“植物醫(yī)生高山護(hù)膚生活館”將設(shè)于其中。而位于麗江玉龍雪山的植物醫(yī)生高山植物園，也將作為植物醫(yī)生DR PLANT后續(xù)高山植物護(hù)膚品的研究基地。
植物醫(yī)生DR PLANT堅(jiān)信，只有最天然、純凈的環(huán)境，才能擁有最純粹的高山植物精華；植物醫(yī)生DR PLANT力求每一滴高山植物原液都未受到過(guò)化學(xué)工業(yè)的污染，為肌膚提供最純凈有效的美肌護(hù)膚方案。
在本次戰(zhàn)略會(huì)上，植物醫(yī)生與中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所合作的首款產(chǎn)品蘭花潤(rùn)顏面膜也驚艷亮相，產(chǎn)品時(shí)刻圍繞“科學(xué)”與“高性?xún)r(jià)比”。
植物醫(yī)生DR PLANT與中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所聯(lián)合成立“植物醫(yī)生研發(fā)中心”，
首次從石斛蘭中提取出Orchid Ext活性成分。這種成分富含皮膚所需的多種礦物質(zhì)，寡糖和類(lèi)黃酮類(lèi)有效成分，有效起到保濕、抗氧化、增強(qiáng)皮膚免疫力和減少細(xì)紋的作用。實(shí)驗(yàn)表明，Orchid Ext清除各類(lèi)自由基的能力較常用的抗氧化劑維他命C更強(qiáng)，且抗氧化效果更加持久穩(wěn)定。
蘭花潤(rùn)顏面膜率先使用全新復(fù)合抗敏因子――齒葉乳香樹(shù)脂提取物和積雪草提取物。積雪草提取物可抑制過(guò)敏性皮膚中的炎癥反應(yīng)，促進(jìn)代謝，舒緩肌膚不適。
乳香樹(shù)提取物含有活性極高的乳香酸，可抑制鲴胞炎癥因子白三烯的合成，具有極強(qiáng)的抗炎功效。兩者結(jié)合可長(zhǎng)效舒緩肌膚、抵抗外界環(huán)境侵害，提高肌膚自體免疫力。
傳統(tǒng)保濕產(chǎn)品多以模擬皮膚表面皮脂膜來(lái)鎖水，卻忽略了先為肌膚補(bǔ)充大量水分。如果皮膚上沒(méi)有很理想的水分含量，鎖水保濕也就無(wú)從談起。全新蘭花潤(rùn)顏面膜專(zhuān)門(mén)在傳統(tǒng)科技基礎(chǔ)上又增加了提升肌膚含水量環(huán)節(jié)，讓面膜適合各類(lèi)缺水肌膚。多層晰透保濕科技，從角質(zhì)層表面到細(xì)胞內(nèi)部，層層吸附水分，給肌膚帶來(lái)長(zhǎng)效保濕潤(rùn)澤。
一、21世紀(jì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展趨勢(shì)
21世紀(jì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)融入學(xué)科更多，內(nèi)涵更豐富，其主要理論和技術(shù)表現(xiàn)在以下方面。
1.分子生物學(xué)技術(shù)。從20世紀(jì)50年代Watson和Crik提出DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)至今50余年，分子生物學(xué)領(lǐng)域取得了巨大的成就。
(1)聚合酶鏈反應(yīng)。PCR技術(shù)具有靈敏度高、特異性好、及時(shí)方便等特點(diǎn)。PCR技術(shù)根據(jù)用途和具體方法的不同，可分很多種類(lèi)，如原位PCR、多重PCR、不對(duì)稱(chēng)PCR、反向PCR、復(fù)合PCR等。
(2)生物芯片。又叫微陣列技術(shù)，包括基因芯片、蛋白芯片、細(xì)胞芯片、組織芯片等，是一種集物理學(xué)、化學(xué)、計(jì)算機(jī)科學(xué)為基礎(chǔ)的檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)技術(shù)。生物芯片不論在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)方面，還是在臨床醫(yī)學(xué)方面，都有較廣的應(yīng)用價(jià)值。
(3)飛行質(zhì)譜。 又叫蛋白質(zhì)指紋圖譜技術(shù)，由蛋白芯片和質(zhì)譜儀組成。SELDI技術(shù)具有快速、準(zhǔn)確和敏感度高等特點(diǎn)。廣泛地用于多種疾病的診斷，尤其是癌癥。我國(guó)SDA批準(zhǔn)引進(jìn)運(yùn)用SELDI技術(shù)。由于該技術(shù)具有優(yōu)良的性能，有著極光明的應(yīng)用前景，將給疾病的診斷，尤其是腫瘤的早期診斷帶來(lái)質(zhì)的飛躍。
2.免疫標(biāo)記技術(shù)。其中用于組織和細(xì)胞中抗原或抗體定位的稱(chēng)免疫組化技術(shù);用于檢測(cè)液體中微量物質(zhì)的稱(chēng)為免疫測(cè)定。又根據(jù)標(biāo)記物的不同，將免疫標(biāo)記技術(shù)分為：熒光免疫測(cè)定，放射免疫測(cè)定，酶免疫測(cè)定，化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定，金免疫測(cè)定。這些技術(shù)已廣泛地應(yīng)用于臨床。
3.自動(dòng)化和信息技術(shù)
(1)自動(dòng)化技術(shù)。由機(jī)械傳送處理系統(tǒng)、自動(dòng)化分析儀和信息處理系統(tǒng)組成實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化系統(tǒng)。根據(jù)自動(dòng)化規(guī)模程度可將LAS分為兩類(lèi)：一類(lèi)是模塊式自動(dòng)化，將一定的自動(dòng)化分析儀組合，完成一定組合項(xiàng)目的檢測(cè)，這也是當(dāng)前世界上LAS應(yīng)用得較多的形式;另一類(lèi)是全實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化，在日本、美國(guó)等發(fā)達(dá)國(guó)家應(yīng)用較多，而在國(guó)內(nèi)，因條件受限，真正實(shí)現(xiàn)TLA的實(shí)驗(yàn)室還沒(méi)有。
(2)信息技術(shù)。信息技術(shù)的應(yīng)用已滲透到我們生活、工作的各個(gè)角落。在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用也相當(dāng)普及。實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)是集計(jì)算機(jī)技術(shù)和現(xiàn)代化管理思想為一體的適用于實(shí)驗(yàn)室管理和控制的一項(xiàng)綜合技術(shù)?？捎糜诨颊邩?biāo)本的識(shí)別、檢驗(yàn)申請(qǐng)、樣本分析、結(jié)果報(bào)告、質(zhì)量控制、行政后勤管理、科研總結(jié)等數(shù)據(jù)管理，可提高臨床實(shí)驗(yàn)室的工作質(zhì)量、管理水平和工作效率。實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化系統(tǒng)更是離不開(kāi)LIS的支撐。
4.生物傳感器。生物傳感器匯集物理學(xué)、化學(xué)、醫(yī)學(xué)學(xué)科技術(shù)，是一類(lèi)可將生物信息，如蛋白質(zhì)、細(xì)胞器、活細(xì)胞、組織、微生物等轉(zhuǎn)換為分析信號(hào)的器件。包括兩個(gè)基本單元，即接收器和換能器。據(jù)其類(lèi)型和原理的不同，可將生物傳感器分為光學(xué)生物傳感器、電化學(xué)生物傳感器、電壓生物傳感器及基因傳感器等。生物傳感器具有制造成本低、測(cè)量設(shè)備簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便、安全、性能穩(wěn)定、壽命長(zhǎng)、適用面廣、范圍寬、特異性好、所需樣品量少、不需要進(jìn)行前處理等特點(diǎn)。在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中，特別是床旁分析，具有很好的應(yīng)用前景。
二、21世紀(jì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的任務(wù)
自然科學(xué)的發(fā)展，促進(jìn)了檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，由此產(chǎn)生了許多新方法、新技術(shù)，豐富了檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的內(nèi)容，拓寬了檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)發(fā)展的空間。這些新方法、新技術(shù)匯集了多學(xué)科理論和技術(shù)，是傳統(tǒng)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，但又不同于傳統(tǒng)檢驗(yàn)技術(shù)。怎樣掌握和應(yīng)用這些新方法、新技術(shù)，為人類(lèi)健康作出貢獻(xiàn)，是檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)必須完成的任務(wù)。
1.增加投資，加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)。好的實(shí)驗(yàn)環(huán)境和實(shí)驗(yàn)設(shè)備，是完成高質(zhì)量檢測(cè)的物質(zhì)基礎(chǔ)和必要手段。沒(méi)有基因擴(kuò)增儀及其配套設(shè)備，就無(wú)法開(kāi)展分子生物學(xué)技術(shù);沒(méi)有流式細(xì)胞儀，就無(wú)法快速準(zhǔn)確地完成免疫細(xì)胞及亞型和分子表型分析等工作;沒(méi)有LAS和LIS系統(tǒng)，就無(wú)法實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室的規(guī)范化、科學(xué)化、現(xiàn)代化管理，就談不上提高工作效率。對(duì)實(shí)驗(yàn)室硬件的投資，是21世紀(jì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)發(fā)展的基礎(chǔ)。
2.培養(yǎng)人才，練好內(nèi)功。人才培養(yǎng)是檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的重要任務(wù)。無(wú)論多先進(jìn)的設(shè)備都是通過(guò)人來(lái)掌握和操作的。只有高素質(zhì)的人才操作高精度的儀器，才能完成高質(zhì)量的檢測(cè)。我國(guó)從20世紀(jì)50年代開(kāi)始，通過(guò)中等專(zhuān)業(yè)學(xué)?；蛲ㄟ^(guò)師帶徒形式培養(yǎng)檢驗(yàn)人員。從事臨床檢驗(yàn)工作的人員不少，但高層次、高素質(zhì)的人才缺乏。這種狀況是適應(yīng)不了21世紀(jì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)發(fā)展形勢(shì)的?？梢酝ㄟ^(guò)“三基”訓(xùn)練、多媒體教學(xué)、走出去、請(qǐng)進(jìn)來(lái)，全方位、多層次的方法培訓(xùn)從業(yè)人員，以提高素質(zhì)。其中培養(yǎng)各專(zhuān)業(yè)學(xué)科帶頭人尤為重要，有利于促進(jìn)全學(xué)科的發(fā)展。
3.加強(qiáng)與臨床的溝通、交流。這是檢驗(yàn)人員必須重視和加強(qiáng)的工作。一方面是實(shí)施全面質(zhì)量管理的需要。檢驗(yàn)人員向護(hù)士介紹各種標(biāo)本的采集及運(yùn)送要求，這是做好分析前質(zhì)量控制的重要舉措;向醫(yī)生通報(bào)、了解檢測(cè)信息及使用效果，這是分析后質(zhì)量控制的主要目的。另一方面是提高實(shí)驗(yàn)室工作效率和質(zhì)量的需要。只有加強(qiáng)與臨床的溝通、交流，才能使醫(yī)護(hù)人員理解、重視檢驗(yàn)醫(yī)學(xué);只有加強(qiáng)與臨床的溝通、交流，才能使檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)新的理論、新的技術(shù)被臨床接受和應(yīng)用。
4.樹(shù)立危機(jī)和競(jìng)爭(zhēng)意識(shí)。21世紀(jì)是知識(shí)爆炸的年代，多學(xué)科的發(fā)展，賦予了檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)更多、更新的理論和技術(shù)。只有不斷學(xué)習(xí)，不斷進(jìn)步，才能與時(shí)俱進(jìn)，不被時(shí)代所淘汰。經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人們健康需求的增多，為檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)帶來(lái)了機(jī)遇，同時(shí)也帶來(lái)了挑戰(zhàn)。人們需要更多的、更迅捷的、質(zhì)量更高的檢驗(yàn)信息。在檢驗(yàn)科眾多和商業(yè)體檢中心正在興起的今天，醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)工作者無(wú)疑面臨激烈的競(jìng)爭(zhēng)，怎樣在競(jìng)爭(zhēng)中求生存和發(fā)展，是我們必須回答的現(xiàn)實(shí)問(wèn)題。
總之，21世紀(jì)由于科學(xué)、經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人們健康的需求，使檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)得到了飛速的發(fā)展，產(chǎn)生了許多新的理論和技術(shù)。檢驗(yàn)工作者應(yīng)認(rèn)清形勢(shì)、把握機(jī)遇，努力學(xué)習(xí)，加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室的科學(xué)化和現(xiàn)代化建設(shè)，樹(shù)立實(shí)施全面質(zhì)量管理體系的理念，樹(shù)立危機(jī)和競(jìng)爭(zhēng)意識(shí)，推動(dòng)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)事業(yè)的發(fā)展。
關(guān)于lDL-C的測(cè)定方法，目前常用的有聚乙烯硫酸鹽化學(xué)沉淀法（pVS法）[1]、肝素檸檬酸納化學(xué)沉淀法（hCS法）[2]和friedewald公式計(jì)算法（f公式法）[3]，另外還有nCEP推薦的參考方法即超速離心─化學(xué)沉淀法（bQ法）和瓊脂糖電泳染色法[5]。上述方法中，選擇性沉淀法需預(yù)先沉淀分離，其中pVS法在tG＞4g/L時(shí)，結(jié)果明顯偏低，hCS法的準(zhǔn)確性依賴(lài)于精確的pH（5.11）,F公式法在tG＞4g／l時(shí)，估算值準(zhǔn)確性差，且需要總膽固醇、tG和hDL-C的準(zhǔn)確測(cè)定值，影響因素較多[6]，而超速離心─化學(xué)沉淀法（bQ法）和瓊脂糖電泳染色法既麻煩又費(fèi)時(shí)，不適合臨床實(shí)驗(yàn)室。近年來(lái)隨著自動(dòng)化分析儀的日益普及，研制開(kāi)發(fā)適用于自動(dòng)化分析的lDL-C直接（direct）測(cè)定法已是當(dāng)務(wù)之急，本文就lDL-C的自動(dòng)化分析方法的研究進(jìn)展作一綜述。
1免疫分離法
1995年mcnamarajR等[7]利用sigma公司提供的由genzyme公司發(fā)明的directLDLTM試劑盒直接測(cè)定血清中的lDL-C，該法是通過(guò)使用包被有高親和力的羊抗人apoAI和apoE多克隆抗體的聚笨乙烯膠乳，用一種特制的具有離心過(guò)濾裝置的雙層試管，當(dāng)一定量的血清和已包被有抗體的聚苯乙烯膠乳懸液被加入到雙層離心試管中，使apoAI和apoE抗體與血清中的cM、vLDL、lDL和hDL發(fā)生作用，然后1500g離心5min,免疫沉淀的cM、vLDL、iDL和hDL被過(guò)濾裝置截留在內(nèi)層小試管內(nèi)，含有l(wèi)DL的濾液被外層試管回收，通過(guò)酶法測(cè)定濾液中膽固醇的濃度，即可得出lDL-C的含量，mcnamaraJR等對(duì)該法的研究結(jié)果表明：分別用本法（y）和超速離心法（x）測(cè)定115例禁食、非禁食脂代謝異常的患者血清標(biāo)本，(TG≤35.85g/L)，兩種方法相關(guān)性良好，y＝0.8x+0.182,r=0.97,n=115。本法批內(nèi)cV為1.2%～3.8%，批間cV為2.0%～5.1%。用本法可以測(cè)定隨機(jī)非禁食標(biāo)本和中高度tG水平標(biāo)本，且準(zhǔn)確度能達(dá)到cDC所要求的lDL-C準(zhǔn)確度≤±5%的標(biāo)準(zhǔn)，表明免疫分離法是一種簡(jiǎn)便準(zhǔn)確的lDL-C直接測(cè)定方法，但該法僅適用于新鮮血清標(biāo)本，冰凍標(biāo)本隨冰凍時(shí)間的延長(zhǎng)而產(chǎn)生逐步增加的負(fù)偏差。1997年，maitraa等[8]對(duì)lDL-C直接測(cè)定法（d-LDL）也進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究，他們對(duì)156名正常人和高tG患者(TG0.65～9.95g/L)，分別用l-LDL、d-LDL和參考方法bQ-LDL超速離心─化學(xué)沉淀法，三種方法進(jìn)行l(wèi)DL-C水平的測(cè)定，其中d-LDL法即免疫分離法（試劑盒由sigma公司提供），l-LDL法是由poly-medco提出的一種選擇性化學(xué)沉淀法。結(jié)果表明：以國(guó)際公認(rèn)金標(biāo)準(zhǔn)bQ-LDL法為參考方法，在tG＜4g/L時(shí)，三種方法間呈現(xiàn)良好的相關(guān)：l-LDL=1.1BQ+0.03，r=0.95，x=1.32mmol/L，y=1.46mmol/L，sy/x=0.14，n=106；dLDL=0.98BQ-0.01，r=0.97，x=1.32mmol/L，y=1.29mmol/L，sy/x=0.1，n=106；在 tG≥4g／l時(shí)，三種方法同樣相關(guān)良好：l-LDL=0.97BQ+0.37，r=0.91，x=1.23mmol/L，y=1.56mmol/L，sy/x=0.18，n=50；l-LDL和dLDL法對(duì)bQ-LDL法的平均偏差分別為12.7%和6.2%(TG＜4g/L）、30.6%和12.5%(TG＞4g/L)。三種方法在測(cè)定禁食和非禁食標(biāo)本時(shí)，結(jié)果無(wú)顯著差別，于1995年jialali等[9]的研究結(jié)果相近。提示：dLDL法比l-LDL法更具有優(yōu)越性,是常規(guī)測(cè)定lDL-C的較好的方法，該法也適用于高脂血癥兒童標(biāo)本的分析[10]。
2比濁法
1983年，burtl等[11]設(shè)計(jì)的固定時(shí)間動(dòng)態(tài)化學(xué)比濁快速測(cè)定法，用肝素、ca2+、eDTA特異性地沉淀lDL而產(chǎn)生濁度，以脂肪酶法去除vLDL干擾。該法主要是測(cè)定lDL總體顆粒而不是lDL-C，但可用已知lDL-C值的參考血清的濁度計(jì)算出標(biāo)本中l(wèi)DL-C的濃度，其結(jié)果同f公式間接計(jì)算法或lRC超速離心法相關(guān)良好。1997年岳秀玲[12]報(bào)道利用免疫比濁法測(cè)定血清中l(wèi)DL-C，其測(cè)定原理是血清中l(wèi)DL抗原與試劑中羊抗人lDL抗體作用，形成抗原抗體復(fù)合物，并產(chǎn)生濁度，該濁度的高低在過(guò)量抗體存在時(shí)，與抗原（lDL）的含量成正比，同時(shí)，由于反應(yīng)液中含有穩(wěn)定劑可使非ag-Ab復(fù)合物（如脂類(lèi)、大分子蛋白多聚物等）消濁，而消除非特異性干擾，用已知lDL-C值的參考血清的濁度計(jì)算出待測(cè)標(biāo)本中l(wèi)DL-C的濃度。結(jié)果表明：本法批內(nèi)cV＝2.6％，批間cV＝5.5％，與pVS選擇性沉淀法比較兩法相關(guān)良好，r=0.86。但本法結(jié)果(X=3.97mmol/L)較pVS法(4.33mmol/L)明顯偏低，p＜0.05。試法簡(jiǎn)便、快速，既適用于手工操作，更適合于全自動(dòng)生化分析儀。但kerscher等[13]指出測(cè)定完整的lDL顆粒還不能像lDL-C那樣做為一個(gè)明確參數(shù)，以lDL顆粒的量估計(jì)lDL-C可能受到lDL顆粒中膽固醇含量個(gè)體差異的影響。
3選擇性測(cè)定法
日本第一化學(xué)藥品株試會(huì)社(Daiichi)推出lDL-C直接測(cè)定試劑盒，該試劑盒為液體雙試劑盒，適用于各類(lèi)自動(dòng)生化分析儀，在無(wú)需標(biāo)本預(yù)處理的情況下，實(shí)現(xiàn)lDL-C自動(dòng)化分析。該法原理[14]是試劑1中的表面活性劑可使樣品中的hDL、vLDL和cM顆粒解離，膽固醇分子被釋放出來(lái)，立即同膽固醇酶試劑反應(yīng)，產(chǎn)生的h2O2在缺乏偶聯(lián)劑時(shí)被消耗而不顯色，此時(shí)lDL顆粒仍是完整的，加入試劑2（含另一種表面活性劑和偶聯(lián)劑），它可使lDL顆粒解離釋放出膽固醇，在膽固醇酶試劑的作用下，產(chǎn)生h2O2，參與trinder反應(yīng)而顯色,色澤的深淺與lDL-C的含量成正比，通過(guò)與相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品（lDL-C的校正物）比較，計(jì)算出樣品中l(wèi)DL-C的含量。本法的分析不精密度＜5％，符合nCEP的要求[4]，因簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，適用于自動(dòng)化分析，是一種很有發(fā)展前途的lDL-C直接測(cè)定法。
小結(jié)：上述三種方法中，免疫分離法盡管稱(chēng)為直接測(cè)定法，但仍需將血清用連接有抗體的聚苯乙烯膠乳免疫分離預(yù)處理過(guò)程，且本試劑價(jià)格昂貴，免疫比濁法，簡(jiǎn)便、快速、成本低，適用于自動(dòng)化生化分析儀。選擇性測(cè)定法簡(jiǎn)便快速、微量準(zhǔn)確，可適用于具有雙試劑加樣功能的各類(lèi)自動(dòng)化分析儀，是比較理想的lDL-C自動(dòng)生化分析方法，但目前尚無(wú)國(guó)產(chǎn)試劑，由于進(jìn)口試劑價(jià)格昂貴，限制了本法在國(guó)內(nèi)的廣泛應(yīng)用。
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【關(guān)鍵詞】血型；卡式微柱凝膠法；自動(dòng)化；網(wǎng)絡(luò)信息化；LIS及HIS【中圖分類(lèi)號(hào)】R552，1 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1005-0515(2010)004-052-03
臨床上進(jìn)行輸血前檢驗(yàn)及血型鑒定的玻片法、試管法其敏感性較差，操作難以實(shí)現(xiàn)規(guī)范化。結(jié)果判斷參有人為因素。并只能檢測(cè)ABO不配合完全抗體而對(duì)不完全抗體往往容易造成漏檢而產(chǎn)生輸血后溶血反應(yīng)。輸血作為一種治療手段應(yīng)用于臨床已有百年歷史。隨著基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究的不斷深入，醫(yī)學(xué)與工程技術(shù)科學(xué)的結(jié)合，特別是近年來(lái)專(zhuān)用于輸血檢測(cè)的大型精密儀器的開(kāi)發(fā)利用及各種高新技術(shù)的滲透，輸血學(xué)已發(fā)展成綜合性為臨床多種疾病提供支持治療的一門(mén)獨(dú)立學(xué)科。
目前在輸血前檢驗(yàn)中常用的有DG Gel(Diagnostic Grifols,S.A，西班牙)DiaMed-ID(Cressier,瑞士10rtho BioVue(Ortho Diagnostic GmBH，Neokargemund,德國(guó))三種微柱凝集系統(tǒng)。根據(jù)資料顯示與DGGel和DiaMed-ID相比，Ortho BioVue的孵育時(shí)間(10min)和離心時(shí)間(5min)較短。Ortho BioVue出結(jié)果時(shí)間為15min，另外兩個(gè)系統(tǒng)為24-25min。相反Ortho BioVue樣品需要血清為40微升另兩個(gè)系統(tǒng)為25微升。這在向新生兒采集樣品時(shí)尤為重要。
1 原理
通過(guò)微小的凝膠顆粒構(gòu)成的濾網(wǎng)，在系統(tǒng)內(nèi)控制離心的條件下，將凝集的紅細(xì)胞和游離的紅細(xì)胞分離開(kāi)來(lái)，從而形成不同反應(yīng)圖譜，由高分辨CCD數(shù)碼相機(jī)拍照，通過(guò)系統(tǒng)的自動(dòng)判讀裝置判斷結(jié)果。
2 檢驗(yàn)
應(yīng)用于常規(guī)的免疫學(xué)檢查：血型鑒定(ABO、RhD、其他紅細(xì)胞抗原)和輸血前檢驗(yàn)(抗體篩選和交叉配血實(shí)驗(yàn)及必要的抗體識(shí)別實(shí)驗(yàn))，它還能做基于凝膠聚集的DAT實(shí)驗(yàn)或其他實(shí)驗(yàn)。在臨床有重-要意義兩種抗體的檢驗(yàn)中(抗E)只有凝膠技術(shù)才能檢出。其陽(yáng)性結(jié)果的強(qiáng)度也比試管技術(shù)好。
因此在紅細(xì)胞抗體的檢測(cè)中具有更高的敏感性。還可應(yīng)用于新生兒溶血病的檢查，免疫性溶血病的檢查。
3 程序
通過(guò)WADiana軟件選擇任何一種軟件編輯的免疫一血液學(xué)實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)樣品推薦使用帶對(duì)照數(shù)字的粘貼條形碼標(biāo)簽(加和檢測(cè)碼)。以便系統(tǒng)識(shí)別。該程序允許樣本的連續(xù)檢測(cè)，也就是說(shuō)，在前面樣本孵育期間可以開(kāi)始新的實(shí)驗(yàn)。這樣就可以盡可能地節(jié)省我們的時(shí)間，同時(shí)，精確的對(duì)照、樣本的陽(yáng)性識(shí)別及試劑能夠避免任何可能發(fā)生的錯(cuò)誤。還可以?xún)?yōu)先檢測(cè)緊急樣本，也就是說(shuō)，能夠中斷已經(jīng)設(shè)定好的實(shí)驗(yàn)順序，在完成正在檢測(cè)的樣本之后，放入緊急樣本，程序就能在其他早已放好的樣品之前優(yōu)先進(jìn)行檢測(cè)(但必須首先完成正在檢測(cè)的樣本)還對(duì)樣品的檢測(cè)實(shí)行質(zhì)量控制，能夠檢查凝膠卡中所有的孔是否均已得到使用，能夠自動(dòng)檢查使用試劑、凝膠卡和卡中的凝膠柱是否過(guò)期。
所有卡經(jīng)過(guò)離心以后都可由基于圖像分析的判讀儀自動(dòng)進(jìn)行判讀，判讀的敏感陛可根據(jù)使用者的要求自由設(shè)定。對(duì)常規(guī)實(shí)驗(yàn)(ABO、Rh、抗體篩選的陽(yáng)性或陰性結(jié)果及交叉匹配實(shí)驗(yàn))的解釋說(shuō)明也是自動(dòng)完成的。在發(fā)生檢測(cè)結(jié)果不能確定或者不相符合的情況時(shí)(如ABO抗原與抗體鑒定不明確、陰性對(duì)照柱出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果、重復(fù)實(shí)驗(yàn)得出的結(jié)果不同)，程序能夠向有可能發(fā)生問(wèn)題的凝膠卡進(jìn)行圖像或者顯微檢查，使結(jié)構(gòu)得到修正，對(duì)修正后的結(jié)果有明確標(biāo)識(shí)，這樣就可找出是誰(shuí)做的修正，而原始的圖像也仍然能夠保存。
4 結(jié)論
我院2003年引進(jìn)了戴安娜全自動(dòng)血型／配血系統(tǒng)用于患者的血型鑒定及輸血前檢測(cè)，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果是由系統(tǒng)的判讀系統(tǒng)(兩個(gè)數(shù)字照相機(jī)和一個(gè)特殊的照明系統(tǒng))經(jīng)過(guò)拍照反應(yīng)圖譜保存到計(jì)算機(jī)并自動(dòng)判讀，運(yùn)用信息網(wǎng)絡(luò)與醫(yī)院的LIS或HIS系統(tǒng)對(duì)接可同步完成費(fèi)用確認(rèn)并且網(wǎng)上傳輸發(fā)送到醫(yī)院信息中心及各臨床科室終端系統(tǒng)。(若患者辦理了長(zhǎng)期就診卡那么在以后的就診中醫(yī)生可隨時(shí)調(diào)取檢測(cè)結(jié)果)并可根據(jù)設(shè)計(jì)的格式自動(dòng)打印報(bào)告，醫(yī)生同時(shí)在網(wǎng)上可隨時(shí)查閱報(bào)告。系統(tǒng)檢測(cè)過(guò)程無(wú)人操作，避免了人為錯(cuò)誤，同時(shí)具有方便的數(shù)據(jù)聯(lián)網(wǎng)功能，實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化管理，并有獨(dú)特的洗針技術(shù)避免污染。同時(shí)具有質(zhì)控管理、急診管理功能。實(shí)現(xiàn)了血型血清學(xué)檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化、數(shù)字化、自動(dòng)化、網(wǎng)絡(luò)信息化的高靈敏度檢驗(yàn)。
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一、建設(shè)免疫規(guī)劃系統(tǒng)是檔案服務(wù)民生的迫切需要
免疫規(guī)劃工作是疾病預(yù)防控制工作的重要組成部分，湖北省自實(shí)行兒童免疫規(guī)劃以來(lái)，疫苗針對(duì)傳染病的控制工作取得了顯著成績(jī)。但是隨著經(jīng)濟(jì)社會(huì)的發(fā)展，免疫規(guī)劃?rùn)n案信息工作與社會(huì)發(fā)展呈現(xiàn)不平衡的問(wèn)題，大部分地區(qū)免疫規(guī)劃服務(wù)和管理工作停留在簡(jiǎn)單、落后的手工登記、統(tǒng)計(jì)分析的原始手段上，其報(bào)告的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和及時(shí)性得不到保障，傳統(tǒng)落后的免疫規(guī)劃?rùn)n案信息的錄入和管理方式已難以適應(yīng)免疫規(guī)劃實(shí)際工作的需要。流動(dòng)人口的劇增，群眾預(yù)防接種意識(shí)的增強(qiáng)，業(yè)務(wù)管理模式的不一致，數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)、編碼、接口的不統(tǒng)一，不能實(shí)現(xiàn)異地接種和檔案信息共享等問(wèn)題直接影響著民眾需求和免疫事業(yè)發(fā)展。如何建立動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)的檔案信息，提供科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)、及時(shí)準(zhǔn)確的各類(lèi)免疫規(guī)劃相關(guān)數(shù)據(jù)，解決異地接種，實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)共享，為管理部門(mén)決策提供依據(jù)，更好的為社會(huì)服務(wù)，為人民大眾服務(wù)，成為免疫規(guī)劃工作新的難點(diǎn)和工作重點(diǎn)。2005年省疾病預(yù)防控制中心開(kāi)始免疫規(guī)劃信息管理系統(tǒng)的開(kāi)發(fā)建設(shè)工作。
二、收集檔案信息是建設(shè)免疫規(guī)劃系統(tǒng)的基本前提
根據(jù)衛(wèi)生部《關(guān)于兒童預(yù)防接種信息報(bào)告管理工作規(guī)范（試行）》（衛(wèi)疾控發(fā)[2006]512號(hào)）和湖北省衛(wèi)生廳《關(guān)于開(kāi)展兒童預(yù)防接種信息報(bào)告管理系統(tǒng)建設(shè)的通知》（鄂衛(wèi)辦發(fā)[2007]24號(hào)）要求，湖北省自2005年開(kāi)始實(shí)施信息化試點(diǎn)工作，將兒童接種檔案的收集納入信息化工作和免疫規(guī)劃系統(tǒng)建設(shè)。
一是從2006年開(kāi)始，全面組織全省兒童預(yù)防接種信息檔案的普查統(tǒng)計(jì)工作，組織數(shù)據(jù)錄入，建立報(bào)告管理系統(tǒng)；
二是從2008年開(kāi)始，完成平臺(tái)權(quán)限開(kāi)通工作，實(shí)現(xiàn)客戶端系統(tǒng)市、縣、鄉(xiāng)鎮(zhèn)三個(gè)100%覆蓋，實(shí)現(xiàn)2005年以來(lái)出生兒童個(gè)人檔案覆蓋率達(dá)到98%以上；
三是2009年狠抓客戶端數(shù)據(jù)的覆蓋率和數(shù)據(jù)質(zhì)量、增大經(jīng)費(fèi)投入加快省市兩級(jí)平臺(tái)建設(shè)，在進(jìn)一步完善檔案信息數(shù)據(jù)錄入的基礎(chǔ)上，全面更新全省免疫規(guī)劃信息化設(shè)備、加強(qiáng)人員培訓(xùn)和加大系統(tǒng)維護(hù)經(jīng)費(fèi)的支持力度；
四是2010年重點(diǎn)抓好省級(jí)信息化平臺(tái)建設(shè)工作，2010年6月，湖北省預(yù)防接種信息化管理系統(tǒng)平臺(tái)開(kāi)通并試運(yùn)行，12月，全省全面啟動(dòng)各類(lèi)醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)產(chǎn)科接種點(diǎn)新生兒預(yù)防接種信息化系統(tǒng)建設(shè)工作；2011年4月25日湖北省免疫規(guī)劃信息系統(tǒng)正式啟動(dòng)。
三、通過(guò)免疫規(guī)劃信息系統(tǒng)提升民生檔案服務(wù)能力
免疫規(guī)劃信息管理系統(tǒng)以接種單位兒童預(yù)防接種信息管理系統(tǒng)客戶端軟件為基礎(chǔ)，包括湖北省免疫規(guī)劃之窗、預(yù)防接種信息管理平臺(tái)、免疫規(guī)劃辦公自動(dòng)化系統(tǒng)、免疫規(guī)劃GIS系統(tǒng)、免疫規(guī)劃信息服務(wù)中心等五個(gè)部分，其主要的功能就是服務(wù)兒童免疫防疫工作，服務(wù)民生工作。
1、湖北省免疫規(guī)劃之窗。湖北省免疫規(guī)劃之窗由首頁(yè)、工作動(dòng)態(tài)、免疫預(yù)防知識(shí)、接種門(mén)診、接種查詢(xún)、專(zhuān)家咨詢(xún)、公眾投訴等7個(gè)界面組成，以簡(jiǎn)潔的展示風(fēng)格，緊握“實(shí)施免疫規(guī)劃、保障和諧、促進(jìn)健康的主題”。建設(shè)以事務(wù)鏈為中心的網(wǎng)站展示系統(tǒng)，體現(xiàn)服務(wù)型單位形象；整合網(wǎng)上服務(wù)項(xiàng)目，實(shí)現(xiàn)對(duì)人民群眾的“一站式”服務(wù)，建立方便、高效的渠道，使人民群眾能夠獲取相關(guān)信息知識(shí)，逐步實(shí)現(xiàn)單位與人民群眾的互動(dòng)式交流。
2、湖北省預(yù)防接種信息管理平臺(tái)。湖北省預(yù)防接種信息管理平臺(tái)是解決免疫規(guī)劃的業(yè)務(wù)應(yīng)用平臺(tái)，由新生兒接種、基本信息、常規(guī)接種、群體接種、免疫監(jiān)測(cè)、疫苗流通等6個(gè)子系統(tǒng)組成。覆蓋了省、市、區(qū)（縣）衛(wèi)生行政部門(mén)和疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)、鄉(xiāng)級(jí)預(yù)防接種機(jī)構(gòu)、醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)產(chǎn)科接種點(diǎn)等相關(guān)部門(mén)，及時(shí)、準(zhǔn)確和完整的收集免疫接種情況、疾病監(jiān)測(cè)情況、單位情況、人員情況、轄區(qū)人口情況等基本信息，通過(guò)計(jì)算機(jī)技術(shù)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行利用和深度挖掘，對(duì)全省的免疫接種、發(fā)病和疫苗使用等情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析匯總，為管理部門(mén)提供決策依據(jù)，實(shí)現(xiàn)免疫規(guī)劃工作的一體化管理。
3、湖北省免疫規(guī)劃辦公自動(dòng)化系統(tǒng)。湖北省免疫規(guī)劃辦公自動(dòng)化系統(tǒng)由個(gè)人辦公、在線交流、意見(jiàn)建議、工作動(dòng)態(tài)、文件流轉(zhuǎn)、工作任務(wù)、文檔共享、車(chē)輛管理、會(huì)議管理、人員管理、網(wǎng)站管理、數(shù)據(jù)字典、系統(tǒng)管理等13個(gè)功能模塊組成。通過(guò)辦公自動(dòng)化系統(tǒng)，無(wú)縫連接各級(jí)下屬機(jī)構(gòu)；建成手段先進(jìn)、反應(yīng)靈敏、制度規(guī)范、隊(duì)伍健全、運(yùn)行高效的集檔案信息采集、分析、交流、為一體的，滿足對(duì)日常工作業(yè)務(wù)要求的系統(tǒng)信息化體系。同時(shí)以網(wǎng)絡(luò)為依托，建立起符合免疫規(guī)劃管理體系和科學(xué)的宏觀決策體系。
4、湖北省免疫規(guī)劃GIS系統(tǒng)。湖北省免疫規(guī)劃GIS系統(tǒng)由地圖工具、信息搜索、地圖信息管理、預(yù)警分析等4個(gè)部分組成。采用圖形化表現(xiàn)方式，充分利用Web-GIS（網(wǎng)絡(luò)GIS）直觀化、圖形化特點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)功能強(qiáng)大，操作簡(jiǎn)單的應(yīng)急指揮數(shù)字化平臺(tái)。整個(gè)系統(tǒng)建立在完整的系統(tǒng)安全體系保護(hù)下，并且完全遵守我國(guó)計(jì)算機(jī)軟件、電子政務(wù)、衛(wèi)生行業(yè)信息化相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，具有完全開(kāi)放性和可擴(kuò)展性。
5、湖北省免疫規(guī)劃信息服務(wù)中心。湖北省免疫規(guī)劃信息服務(wù)中心由最新通知、幫助中心、程序下載、聯(lián)系我們等5部分組成，幫助用戶及時(shí)了解最新信息及動(dòng)態(tài)，軟件操作指南，軟件故障處理小教程，軟件升級(jí)及相關(guān)升級(jí)用的軟件模塊，方便用戶盡快的聯(lián)系相關(guān)部門(mén)解決問(wèn)題及疑惑。
四、免疫規(guī)劃信息系統(tǒng)建設(shè)推動(dòng)檔案事業(yè)科學(xué)發(fā)展
1、在為接種機(jī)構(gòu)服務(wù)中完善檔案信息資源。全省近2500個(gè)接種點(diǎn)，分布在鄉(xiāng)/街道、村/社區(qū)，利用PC機(jī)和讀卡設(shè)備，使用客戶端軟件，完成數(shù)據(jù)采集、處理和管理等功能。產(chǎn)科新生兒接種管理，完成新生兒卡介苗、乙肝第一針接種管理和新生兒基本個(gè)人檔案信息的采集。全省17個(gè)市州，市級(jí)應(yīng)用覆蓋率為100%；全省102個(gè)縣（市、區(qū)），縣（市、區(qū)）級(jí)覆蓋率為100%；全省1300個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)（街道）應(yīng)用覆蓋率達(dá)到98%以上；全省1831個(gè)接種門(mén)診應(yīng)用覆蓋率達(dá)100%；全省醫(yī)療機(jī)構(gòu)產(chǎn)科1567個(gè)應(yīng)用覆蓋率達(dá)100%。
新生兒疾病篩查
質(zhì)譜技術(shù)在該領(lǐng)域的發(fā)展已十分成熟。我國(guó)很多地區(qū)和醫(yī)院都已采用LC-MS，利用衍生化法檢測(cè)氨基酸、肉堿等化合物，可同時(shí)篩查十幾種新生兒疾?。膊》N類(lèi)可增加）（見(jiàn)表1）。質(zhì)譜技術(shù)能夠做到篩查效率高、結(jié)果可靠，費(fèi)用相對(duì)低廉，這是常用分析方法例如細(xì)菌抑制法、放射免疫分析法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、時(shí)間分辨熒光免疫分析法、熒光酶免疫分析法等不可企及的?？梢灶A(yù)測(cè)，隨著臨床對(duì)于疾病的認(rèn)識(shí)和方法的建立，篩查項(xiàng)目的數(shù)量將會(huì)逐漸增加。以我國(guó)每年2200萬(wàn)新生兒中有苯丙酮尿癥患兒1700例和先天性甲狀腺功能減低癥患兒5000例計(jì)算，及時(shí)診斷和治療有著十分重要的社會(huì)意義和經(jīng)濟(jì)效益。
具有臨床意義的內(nèi)源性和（或）外源性化合物的監(jiān)測(cè)
內(nèi)分泌激素和營(yíng)養(yǎng)素的監(jiān)測(cè)對(duì)個(gè)體的疾病診斷、預(yù)測(cè)和評(píng)價(jià)健康狀態(tài)都是非常有幫助的。以維生素D及其代謝產(chǎn)物為例，國(guó)內(nèi)外最新研究認(rèn)為，維生素D與心血管疾病、代謝性疾病[5]和腫瘤等疾病的發(fā)生間具有一定相關(guān)性。目前，臨床以檢測(cè)25(OH)-D總量來(lái)表示維生素D狀況，雖然25(OH)-D水平在體內(nèi)波動(dòng)小，相對(duì)而言，濃度較高易于測(cè)量，半減期較長(zhǎng)(~3周)，但LC-MS檢測(cè)法比放免法、酶免疫法等快速且靈敏，更耐用。1,25(OH)2-D3是維生素D狀態(tài)最好的監(jiān)測(cè)指標(biāo)，但其在體內(nèi)含量極低且不穩(wěn)定，目前已開(kāi)發(fā)出可用以檢測(cè)1,25(OH)2-D3的LC-MS法，比放射免疫分析法有更高的特異度和靈敏度，且安全。另外，臨床要求監(jiān)測(cè)兒童體內(nèi)極低量性激素變化情況，但免疫法檢測(cè)低于試劑盒檢測(cè)下限的數(shù)據(jù)波動(dòng)很可能不能反映體內(nèi)真實(shí)水平。質(zhì)譜技術(shù)可為我們提供pg甚至是fg級(jí)的檢測(cè)限，但需注意高分辨帶來(lái)的高背景噪音問(wèn)題，應(yīng)綜合考慮。
治療藥物監(jiān)測(cè)
作為臨床個(gè)體化治療重要組成部分，對(duì)于一些血藥濃度與療效關(guān)系密切、有明確的有效濃度范圍、治療窗較窄、體內(nèi)代謝個(gè)體差異大、藥物中毒癥狀與疾病癥狀難以鑒別、用于長(zhǎng)期治療和搶救的藥物等情況下，臨床需測(cè)定體液中藥物的濃度，指導(dǎo)臨床個(gè)體化治療，讓患者利益最大化而風(fēng)險(xiǎn)最小化。美國(guó)病理學(xué)家學(xué)會(huì)研究表明，采用LC-MS法檢測(cè)結(jié)果更具有真實(shí)性和實(shí)驗(yàn)可信度，已成為治療藥物監(jiān)測(cè)必備的分析方法。目前，臨床實(shí)驗(yàn)室仍以免疫分析為主要方法，質(zhì)譜分析法由于自動(dòng)化程度不足和缺少認(rèn)證試劑在近期內(nèi)難以取代前者，但依舊是實(shí)驗(yàn)室非常好的參考方法。
微生物鑒定
感染性疾病的病原學(xué)診斷仍以微生物的分離培養(yǎng)作為“金標(biāo)準(zhǔn)”，但能培養(yǎng)成功的僅為少數(shù)，且病原體（尤其是真菌）的培養(yǎng)周期較長(zhǎng)，費(fèi)用頗高，因此微生物非培養(yǎng)技術(shù)正是為滿足難培養(yǎng)或者感染早期診斷需要所建立的方法，包括蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、宏基因組技術(shù)、DNA指紋技術(shù)、分子雜交及生物芯片技術(shù)等。此處介紹應(yīng)用MALDIBiotyper高通量微生物鑒定系統(tǒng)，通過(guò)鑒定病原體自身獨(dú)特的蛋白質(zhì)組成，在MALDI-TOF質(zhì)譜儀中得到指紋圖。該系統(tǒng)另一個(gè)重要的組成部分是已包含3千多種微生物蛋白特征指紋圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)，通過(guò)特征模式峰的匹配值作鑒定。質(zhì)譜技術(shù)鑒定微生物的優(yōu)點(diǎn)在于其操作簡(jiǎn)單（微生物單個(gè)菌落前處理簡(jiǎn)單）、快速且高通量（每1.5h可檢測(cè)100個(gè)樣本），靈敏度高（100ng蛋白即可檢出），準(zhǔn)確率高(<5u，m/z：~10000u)，成本經(jīng)濟(jì)（<1歐元），穩(wěn)定性及重現(xiàn)性好（微生物蛋白指紋譜峰主要集中在2～20ku質(zhì)量范圍內(nèi)，這些持續(xù)高表達(dá)的蛋白質(zhì)受微生物生長(zhǎng)環(huán)境和狀態(tài)影響很小），以上優(yōu)點(diǎn)使得質(zhì)譜技術(shù)在病原體臨床診斷方面具有廣闊的應(yīng)用前景。同時(shí)，我們也需要認(rèn)識(shí)到質(zhì)譜技術(shù)的限制性，雖然其在微生物檢定中可快速、準(zhǔn)確、早期地診斷感染性病原體，但仍不能替代藥敏實(shí)驗(yàn)。合理、正確、綜合地將有限的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)變?yōu)楦咝У脑\斷信息才是檢驗(yàn)的目的，質(zhì)譜技術(shù)的加入不僅沒(méi)有妨礙反而極大程度地推進(jìn)了檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展。
生物標(biāo)志物研究
由于質(zhì)譜技術(shù)的高靈敏度、高準(zhǔn)確率及易于自動(dòng)化等特點(diǎn)，毫無(wú)疑問(wèn)地成為解決蛋白質(zhì)組學(xué)關(guān)鍵手段之一，在生物標(biāo)志物研究中是必不可少的一種手段。生物質(zhì)譜技術(shù)在其中扮演了重要角色，其測(cè)定生物大分子的相對(duì)分子質(zhì)量高達(dá)400ku，準(zhǔn)確率高達(dá)0.100%～0.001%，遠(yuǎn)高于目前常規(guī)應(yīng)用的十二烷基硫酸鈉電泳和高效凝膠色譜技術(shù)。利用肽質(zhì)量指紋譜技術(shù)，結(jié)合蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，可實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)的快速鑒別和高通量篩選，尋找新的生物標(biāo)志物。同時(shí)，利用生物質(zhì)譜的準(zhǔn)確相對(duì)分子質(zhì)量測(cè)定，可實(shí)現(xiàn)對(duì)二硫鍵和自由巰基及蛋白質(zhì)翻譯后修飾如糖基化等的快速定位與確定，包括SNPs在內(nèi)，生物質(zhì)譜已實(shí)現(xiàn)對(duì)數(shù)十個(gè)堿基寡核苷酸的分子量和序列進(jìn)行測(cè)定，應(yīng)用浸入分裂法結(jié)合MALDI-TOF質(zhì)譜可對(duì)基因組SNPs進(jìn)行分析，該法既節(jié)省時(shí)間，又適于高通量分析，有利于特異性基因的定位、鑒定和功能表征。
質(zhì)譜分析技術(shù)在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用前景新藥物（尤其是靶向藥物）和生物制品的不斷涌現(xiàn)、基因治療的重大突破、蛋白質(zhì)組學(xué)和代謝組學(xué)的重要發(fā)現(xiàn)都是檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)利用高新技術(shù)新一輪發(fā)展的重要契機(jī)。我國(guó)質(zhì)譜技術(shù)在實(shí)驗(yàn)室中的使用多為研究型應(yīng)用，質(zhì)譜分析技術(shù)是否能夠整合到檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn)室，是否可取代常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，如何作為常規(guī)檢查方法開(kāi)展檢測(cè)等，以上在世界范圍內(nèi)均屬于熱點(diǎn)問(wèn)題。
2月-2016年2月筆者所在醫(yī)院門(mén)診婦科收治的疑似梅毒患者200例為試驗(yàn)對(duì)象。所有患者均取晨起空腹靜脈血檢測(cè)，初篩試驗(yàn)采用CLIA法展開(kāi)特異性梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)，再將標(biāo)本經(jīng)TPPA與梅毒甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）進(jìn)行復(fù)檢。比較不同S/CO值標(biāo)本TPPA與TRUST復(fù)檢結(jié)果。結(jié)果：S/CO值12.00標(biāo)本符合率分別為91.30%、94.87%、97.14%、96.43%、100%，均明顯高于TRUST的63.04%、69.23%、68.57%、75.00%、77.78%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P
【關(guān)鍵詞】 化學(xué)發(fā)光免疫分析法； 梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)； 梅毒； 血清學(xué)篩查
doi：10.14033/ki.cfmr.2017.15.023 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 文章編號(hào) 1674-6805（2017）15-0042-02
梅毒是一種傳染性較強(qiáng)、病程較長(zhǎng)的性傳播疾病，可嚴(yán)重?fù)p害心血管、神經(jīng)等多系統(tǒng)，對(duì)人們健康危害極大，尤其威脅臨床輸血安全[1]。此外，梅毒可通過(guò)母嬰傳播這一途徑將梅毒傳染至胎兒，進(jìn)而造成先天梅毒、自發(fā)性流產(chǎn)。故早期診治梅毒顯得尤為重要。目前臨床常用的檢測(cè)方式為血清學(xué)篩查，包括酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法（ELISA）、CLIA、TPPA、TRUST等。其中ELISA、CLIA、TPPA屬于特異性梅毒抗體試驗(yàn)，而TRUST屬于非特異性梅毒抗體試驗(yàn)[2]。多數(shù)醫(yī)院采用上述其中的兩種方式篩查梅毒，但因選用不同的方式可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生差異。本研究擬用CLIA法聯(lián)合TPPA法進(jìn)行梅毒血清學(xué)篩查，探討其臨床應(yīng)用價(jià)值，為梅毒早期診斷提供合理借鑒，現(xiàn)報(bào)道如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料
選擇2014年2月-2016年2月筆者所在醫(yī)院門(mén)診婦科收治的疑似梅毒患者200例為試驗(yàn)對(duì)象，年齡23～70歲，平均（36.84±3.26）歲。
1.2 儀器與設(shè)備
微量U形反應(yīng)板、平板混合器、微量滴管（25 μl/滴）、微量加樣器（25 μl）。CLIA法采用Chem cline全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀，應(yīng)用北京科美生物技術(shù)有限公司提供的配套試劑盒。TPPA試劑盒由日本富士瑞必歐株式會(huì)社提供，包括血清稀釋液、陽(yáng)性對(duì)照血清、致敏粒子、溶解液等。TRUST試劑購(gòu)自上海榮盛生物藥業(yè)有限公司。
1.3 方法
所有患者均取3 ml晨起空腹?fàn)顟B(tài)下靜脈血，行離心處理15 min，轉(zhuǎn)速為3000 r/min，血清分離后，制作血清標(biāo)本，于4 ℃保存。采用全自動(dòng)分析儀進(jìn)行CLIA測(cè)試，并讀取結(jié)果。參照實(shí)際說(shuō)明書(shū)，S為待測(cè)樣品發(fā)光值，陰性對(duì)照品平均發(fā)光值的2.1倍為臨界值（CO）。S/CO
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料用（x±s）表示，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較用字2檢驗(yàn)，P
2 結(jié)果
S/CO值12.00標(biāo)本符合率均明顯高于TRUST，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P
3 討論
梅毒是由蒼白密螺旋體感染導(dǎo)致的性傳播疾病，其病原體可累及全身所有臟器，引起多器官病變、破壞組織，從而導(dǎo)致功能失常。近年來(lái)，隨著人們行為觀念及生活方式的變化，梅毒發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)，逐漸引起臨床重點(diǎn)關(guān)注[3]。由于梅毒螺旋體僅存在于人體內(nèi)，故人是唯一的梅毒傳染源。文獻(xiàn)[4]顯示，95%～98%左右的患者是通過(guò)性接觸而感染，梅毒螺旋體通過(guò)穿透人體正常皮膚及黏膜，從而使健康者感染梅毒?；颊呷旧厦范竞笃湫难芟到y(tǒng)與神經(jīng)系統(tǒng)嚴(yán)重受損，生命安全受到威脅，同時(shí)該病具有較強(qiáng)的傳染性，因而積極防治梅毒對(duì)維護(hù)社會(huì)公共衛(wèi)生安全具有重要意義。
傳統(tǒng)上梅毒篩查方式主要有兩種，一是初篩以特異性梅毒螺旋體試驗(yàn)，復(fù)檢應(yīng)用非特異性梅毒螺旋體試驗(yàn)；另外一種方式中初篩與復(fù)檢分別應(yīng)用非特異性與特異性梅毒螺旋體試驗(yàn)。在梅毒血清學(xué)篩查中，較高的敏感度是對(duì)檢查方式的重點(diǎn)要求，目前，CLIA是梅毒初篩試驗(yàn)中應(yīng)用較為普遍的一種方式，制備梅毒螺旋體抗原，并以辣根過(guò)氧化物酶進(jìn)行標(biāo)記，與標(biāo)本中抗體形成雙抗原夾心后，洗滌添加化學(xué)發(fā)光底物，發(fā)光強(qiáng)度測(cè)定后，依據(jù)S/CO值判斷標(biāo)本有無(wú)梅毒螺旋體特異性抗體[5]。由于整個(gè)檢測(cè)過(guò)程中采用全自動(dòng)分析儀讀取結(jié)果，從而充分發(fā)揮高自動(dòng)化的優(yōu)勢(shì)，減少認(rèn)為誤差，并避免攜帶污染。故該檢測(cè)方法能夠?qū)Υ笈繕?biāo)本進(jìn)行篩查。但因其敏感度較高，在檢測(cè)低S/CO值標(biāo)本時(shí)易發(fā)生假陽(yáng)性現(xiàn)象，進(jìn)而造成誤診，增加臨床確診難度[6]。本研究中，46例S/CO值為1.00～2.99患者中，經(jīng)TPPA確證為陰性4例，而TRUST復(fù)檢出17例陰性。該標(biāo)本多來(lái)自腫瘤或透析患者，因此，針對(duì)S/CO值較低的患者需謹(jǐn)慎處理，并采用TPPA進(jìn)行確證，減少假陽(yáng)性的存在。另外，在CLIA初篩后，TPPA復(fù)檢符合率為96.00%，明顯高于TRUST的74.50%，表明TPPA聯(lián)合CLIA檢測(cè)梅毒可有效提高檢測(cè)準(zhǔn)確度，減少漏診、誤診現(xiàn)象。這是由于TPPA采用人工載體明膠粒子與梅毒螺旋體抗體形成凝集，發(fā)生粒子凝聚反應(yīng)，進(jìn)而有效檢測(cè)出血清中梅毒螺旋體抗體，其靈敏度與特異度均具有較高水平。而本研究中CLIA檢出率高于TPPA，可能是由藥物干擾所致，或是梅毒螺旋體隱性感染。TRUST作為非特異性梅毒螺旋w，可通過(guò)觀察滴度的變化，以判斷梅毒感染情況。但在復(fù)檢試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，陽(yáng)性率偏低，存在漏診率高等問(wèn)題。故本研究認(rèn)為，CLIA聯(lián)合TPPA檢測(cè)梅毒更具臨床應(yīng)用價(jià)值。但需注意的是，TPPA法在實(shí)際操作過(guò)程中存在檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、操作繁雜、自動(dòng)化水平低等問(wèn)題，判讀結(jié)果時(shí)易受人為因素影響，尤其是標(biāo)本介于陽(yáng)性與陰性之間，難免出現(xiàn)誤差[7]。而CLIA能夠?qū)崿F(xiàn)高通量、高自動(dòng)化、重復(fù)性檢測(cè)，客觀的判讀結(jié)果，敏感度更高，故更適合應(yīng)用于初篩試驗(yàn)[8]。由于各檢測(cè)方式均存在一定的漏診、誤診現(xiàn)象，臨床實(shí)際篩查中應(yīng)注重采用聯(lián)合的方式進(jìn)行檢測(cè)，尤其是對(duì)于S/CO值較低的標(biāo)本，經(jīng)CLIA法初篩后，應(yīng)給予TPPA法確證，以確保檢測(cè)準(zhǔn)確度，盡可能的減少誤診、漏診現(xiàn)象，從而避免醫(yī)療糾紛，構(gòu)建和諧的醫(yī)患關(guān)系。
綜上所述，CLIA聯(lián)合TPPA法在梅毒血清學(xué)篩查中具有顯著的應(yīng)用價(jià)值，臨床可充分發(fā)揮CLIA敏感度高的優(yōu)勢(shì)，在初篩后應(yīng)用TPPA法對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行確證，提高診斷準(zhǔn)確度，為臨床治療提供科學(xué)依據(jù)。
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[關(guān)鍵詞] Ⅳ型膠原；熒光抗體；熒光素；FITC
[中圖分類(lèi)號(hào)] R392 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2015）01-37-03
[Abstract] Objective To lay the foundation of detecting the content of Ⅳ type collagen in human liver or blood through direct or indirect fluorescent method， Identifying monoclonal antibody of collagen typeⅣ by using the fluorescein isothiocyanate. Methods Using a direct dialysis method to identification of fluorescein. The purity of the identifying fluorescent antibody were obtained by Sephadex G-25 gel filtration column， which remove excess fluorescein and other impurities. The purity， fluorescence characteristic and specificity of antibody were measured with SDS-PAGE and double immune diffusion gel electrophoresis. Results The results of SDS-PAGE electrophoresis were measured by fully automatic chemiluminescence fluorescence image analyzer. Eexcitation wave 490nm and emission wave 510nm. The purified of antibody were shown only one strap of yellow with green fluorescence and the molecular weight （MW） of them were estimated to be approximately 150kD， its purity was 96%， there were not any other strap. The result of double agar gel immune-diffusion test showed that both identify antibodies and not identify antibody were combination with antigen， all of product were formed milky white precipitation lines of antigen-antibody complexes with antigen. And the sediment content was consistent. There was a strap of yellow with green fluorescence in the center hole by fluoroanalyzer. Conclusion In this study， the fluorescent antibody against human collagen type Ⅳ with high purity and strong specificity was produced by separation and purification methods， which provide convenience for clinical detection of the human body Ⅳ type collagen.
[Key words] Collagen type Ⅳ； Fluorescent antibody； Fluorescein isothiocyanate； FITC
免疫熒光技術(shù)是免疫檢測(cè)技術(shù)中的一種。這種技術(shù)是將熒光示蹤物質(zhì)與抗體結(jié)合，利用抗原抗體反應(yīng)的特異性，進(jìn)行組織、細(xì)胞或體液內(nèi)抗原物質(zhì)的檢測(cè)[1]。免疫熒光技術(shù)現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)的檢測(cè)中[2]。Ⅳ型膠原（ColⅣ）主要存在于各器官的基底膜中，是基底膜的微量成分，很多具有增生性質(zhì)的疾病，ColⅣ含量與病變程度呈正相關(guān)；特
別是在肝纖維化的診斷和分型方面，ColⅣ在體內(nèi)和組織中含量的檢測(cè)更為重要[3-4]。本研究采用異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)識(shí)Ⅳ型膠原單克隆抗體，同時(shí)對(duì)標(biāo)識(shí)后抗體的熒光性及特異性進(jìn)行鑒定分析[5]，為建立直接熒光和間接熒光檢測(cè)方法奠定基礎(chǔ)，現(xiàn)報(bào)道如下。
1 材料與方法
1.1 主要儀器
X100冷凍高速離心機(jī)（HITACHI）、LP型低壓層析系統(tǒng)（BIO-RAD）、2000C微量紫外可見(jiàn)光檢測(cè)儀（Thermoscientific）、F-4600熒光分光光度計(jì)（Hitachi）、2500+藍(lán)光凝膠分析儀（上海天能）、5500multi+RGB全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光熒光圖像分析儀（上海天能公司）。
1.2 主要試劑
Ⅳ型膠原抗體（本實(shí)驗(yàn)室制備）、Sephadex G25凝膠填料（GE）、異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC）（Sigma公司）、其他試劑均為國(guó)產(chǎn)試劑。
1.3 FITC標(biāo)記Ⅳ型膠原抗體的制備和純化
采用透析法標(biāo)記、凝膠過(guò)濾法純化[6-7]。取抗體溶液10mL，抗體含量為9mg，充分溶解。15000g/min，4℃，離心20min。棄上清，沉淀溶解于4mL pH9.8 NaHCO3緩沖液中，吹打混勻，溶液置透析袋中對(duì)上述緩沖液，4℃，透析6h，期間3次更換透析外液，透析過(guò)程在輕柔攪拌中進(jìn)行。透析結(jié)束，透析內(nèi)液5000g/min，4℃離心20min。取上清，微量紫外分光光度計(jì)檢測(cè)抗體含量為1.62mg/mL。上清裝入透析袋，置熒光標(biāo)識(shí)液（200mL pH 9.8NaHCO3緩沖液+FITC 20mg至終濃度為0.1mg/L），避光4℃透析過(guò)夜。置透析袋于PBS中，終止反應(yīng)透析10h，期間數(shù)次更換PBS至檢測(cè)480nm吸光值為零。取葡聚糖凝膠（SephadexG-25）10g，溶于去離子水中12h后裝柱。柱長(zhǎng)1.5×30cm，200mL PBS平衡柱，將標(biāo)識(shí)抗體溶液應(yīng)用于SephadexG-25層析柱，流速0.2mL/min，餾分體積5mL/tube，紫外280nm監(jiān)測(cè)，收集第一峰，體積為15mL；抗體濃度為0.51mg/mL。分裝后-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>
1.4 熒光抗體的鑒定
1.4.1 標(biāo)識(shí)抗體的熒光特性及純度測(cè)定 采用SDS-PAGE電泳及凝膠分析儀、凝膠熒光分析儀鑒定標(biāo)識(shí)抗體的熒光特性[8]。SDS-PAGE非還原性凝膠電泳（樣品緩沖液中不添加β-巰基乙醇），分離膠10%，濃縮膠3%，恒壓200V電泳2h。剝離膠板，蒸餾水浸洗2min，RGB多色熒光分析儀檢測(cè)。熒光檢測(cè)結(jié)束后，膠板用R-250考馬斯亮藍(lán)（0.25%）染色后，凝膠成像儀觀察。
1.4.2 標(biāo)識(shí)的熒光抗體特異性測(cè)定 采用凝膠免疫雙向電泳檢測(cè)法[9]。0.9%鹽水瓊脂糖制備瓊脂板；待瓊脂凝固后，打孔器打孔，孔徑3mm，孔距10mm；加樣，1孔加純化后熒光抗體溶液（0.3mg/mL）、2孔加入未標(biāo)識(shí)抗體溶液（0.3mg/mL）、3孔加入生理鹽水對(duì)照、中心孔加入Ⅳ型膠原（0.5mg/mL）；每孔加樣品20μL；瓊脂板玻片置37℃溫箱中12h。
2 結(jié)果
2.1 熒光抗體熒光特性和純度
5500multi+RGB全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光熒光圖像分析儀檢測(cè)電泳結(jié)果，激發(fā)波490nm，發(fā)射波510nm，標(biāo)識(shí)抗體在150KD有一條黃綠色熒光帶，其他的位置未見(jiàn)條帶出現(xiàn)；凝膠經(jīng)染色后，凝膠成像儀檢測(cè)可見(jiàn)標(biāo)識(shí)、未標(biāo)識(shí)抗體在150KD處均有一條帶，其他處有染色較淺的散在條帶（圖1）。凝膠分析儀分析標(biāo)識(shí)抗體純度為96%。
3 討論
免疫熒光技術(shù)是利用熒光素對(duì)抗體（抗原）進(jìn)行標(biāo)記，之后用于免疫檢測(cè)。近年來(lái)，免疫熒光技術(shù)迅速發(fā)展，以其靈敏度高，準(zhǔn)確性強(qiáng)等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)和臨床診斷[10]?？贵w的熒光標(biāo)識(shí)效果決定了熒光檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，決定標(biāo)識(shí)效果的因素除了熒光素偶聯(lián)的程度，更重要的是標(biāo)識(shí)抗體的純度[11]。本研究采用透析標(biāo)識(shí)法連接熒光素和抗體。采用Sephadex G25柱層析去除未標(biāo)記的熒光素和雜質(zhì)，經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)確定其層析流速為0.2mL/min。SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示標(biāo)記抗體純度達(dá)到96%。經(jīng)RGB多色熒光分析儀分析結(jié)果，標(biāo)識(shí)后的抗體，在激發(fā)熒光490nm，發(fā)射波510nm處可見(jiàn)黃綠色熒光，符合FITC熒光素的熒光特性[12]。采用免疫雙向凝膠電泳方法檢測(cè)標(biāo)識(shí)熒光抗體的特異性，結(jié)果顯示1孔和2孔與中心孔之間均有沉淀線形成，且線的粗細(xì)程度基本相同。經(jīng)熒光分析儀檢測(cè)，可見(jiàn)1孔與中心孔之間有黃綠色線狀熒光。
綜上所述，本方法在常規(guī)透析標(biāo)識(shí)后經(jīng)Sephadex G25凝膠過(guò)濾層析后，可有效去除未連接的熒光素和其他雜質(zhì)，進(jìn)而保證了標(biāo)識(shí)后抗體的純度。標(biāo)識(shí)后抗體的特異性從雙向擴(kuò)散免疫電泳結(jié)果分析，基本沒(méi)有損失。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明經(jīng)本方法可獲得純度高，特異性強(qiáng)的Ⅳ型膠原熒光抗體。為臨床采用直接和間接熒光法檢測(cè)人體Ⅳ型膠原，提供了方便條件，為臨床早期診斷肝纖維化奠定了基礎(chǔ)。
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艾滋病這一威脅人類(lèi)健康的惡性傳染病，我國(guó)已列入法定傳染病[1]。輸血安全是當(dāng)前全社會(huì)關(guān)注的焦點(diǎn)問(wèn)題。目前，國(guó)內(nèi)采供血機(jī)構(gòu)，執(zhí)行血站基本標(biāo)準(zhǔn)，按照中國(guó)疾病預(yù)防控制中心2004年下發(fā)的《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》的要求，對(duì)獻(xiàn)血者的血液，采用酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（ELISA）進(jìn)行抗-HIV的篩查。本文對(duì)經(jīng)2次篩查的抗-HIV陽(yáng)性反應(yīng)標(biāo)本，上報(bào)后確認(rèn)的抗-HIV陽(yáng)性結(jié)果分析如下。
1 材料與方法
1.1 標(biāo)本來(lái)源：2000～2005年經(jīng)體檢，乙肝表抗快速金標(biāo)初篩合格后采集的208 470例次血液標(biāo)本。
1.2 試劑：采用上?？迫A公司、廈門(mén)新創(chuàng)公司和萬(wàn)泰生物藥業(yè)公司提供的HIV（1+2）抗體酶聯(lián)免疫診斷試劑盒(雙抗原夾心法和雙抗原夾心二步法)，批檢合格，在有效內(nèi)使用。
1.3 儀器：瑞士澳斯邦（AUSBIO）FAME全自動(dòng)化血液檢測(cè)酶標(biāo)分析儀。
1.4 檢測(cè)方法：按照診斷試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，采用雙人雙試劑檢測(cè)獻(xiàn)血者抗-HIV。初篩血液標(biāo)本抗-HIV結(jié)果呈陽(yáng)性反應(yīng)或單家試劑呈陽(yáng)性反應(yīng)標(biāo)本均再次剪取全血袋的辮子血，進(jìn)行雙孔復(fù)檢，結(jié)果雙孔陽(yáng)性或一陰一陽(yáng)標(biāo)本，均上報(bào)省艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)。
2 結(jié)果（見(jiàn)表1）
3 討論
從表1中結(jié)果看，檢測(cè)抗-HIV的方法，從手工到半自動(dòng)到全自動(dòng)化血液檢測(cè)酶標(biāo)分析儀器技術(shù)的改進(jìn)，檢測(cè)技術(shù)越來(lái)越規(guī)范化，檢測(cè)的準(zhǔn)確度也越來(lái)越高，儀器加樣保證了加樣量的準(zhǔn)確一致，減少了板塊中的孔間差異，為檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性提供了保證，說(shuō)明目前使用的ELISA法，在獻(xiàn)血者的血液的抗-HIV檢測(cè)中基本能達(dá)到安全用血的篩查要求。
表1結(jié)果分析，由于酶聯(lián)免疫診斷試劑是一種生物制品，具有生物活性，易受溫度、 孵育時(shí)間、洗滌等諸多因素影響，2次篩查抗-HIV結(jié)果與WB（蛋白印跡法）確認(rèn)的結(jié)果比較確有很大誤差。原因其一：試劑盒中出現(xiàn)的各反應(yīng)板之間或同一塊板各孔之間孔間差異而導(dǎo)致結(jié)果的差異大，造成的質(zhì)量均一性不好，而且由于2次篩查使用的試劑敏感度比較高，這雖防止“漏檢”，但卻不可避免地出現(xiàn)較多“可疑”標(biāo)本，其二，通常情況，HIV的篩查實(shí)驗(yàn)有陽(yáng)性反應(yīng)的結(jié)果中很大比例是由非特異性因素造成。由于HIV的病毒抗原與其他逆轉(zhuǎn)錄病毒（HTLV）有交叉反應(yīng)，HIV的感染的淋巴細(xì)胞抗原與一些人血清中的HLA抗體有交叉反應(yīng)，故有一定的假陽(yáng)性，因而，凡酶標(biāo)法測(cè)定結(jié)果為HIV抗體陽(yáng)性者需經(jīng)免疫印跡法（WB）加以確認(rèn)[2]。其三，在HIV實(shí)際檢測(cè)的結(jié)果判斷中，確定為陽(yáng)性比確定為陰性更需謹(jǐn)慎。有報(bào)道“窗口期”的長(zhǎng)短存在很大差異，并與檢測(cè)方法和試劑的敏感度有關(guān)[3]。因此，在實(shí)際檢測(cè)時(shí)的HIV的結(jié)果判斷上，把陽(yáng)性反應(yīng)范圍擴(kuò)大在cut of值加20%為灰區(qū)是很可取的。對(duì)灰區(qū)內(nèi)有反應(yīng)的標(biāo)本，均需要再次剪取袋血的辮子血進(jìn)行雙孔復(fù)檢，結(jié)果仍在灰區(qū)內(nèi)則報(bào)告為陽(yáng)性反應(yīng)，可報(bào)確證實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)。實(shí)驗(yàn)中必須觀察整塊反應(yīng)板，若反應(yīng)板中有標(biāo)本孔顯色明顯，其OD值雖然稍低于灰區(qū)范圍，該標(biāo)本應(yīng)謹(jǐn)慎對(duì)待，再次用辮子血和管血標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行雙孔復(fù)檢，再次復(fù)檢結(jié)果與上次結(jié)果對(duì)比分析，再作判斷，發(fā)出報(bào)告，為受血者的健康又多增設(shè)了一道安全防線。
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