時(shí)間：2023-06-22 09:32:41
導(dǎo)語(yǔ)：在分子遺傳學(xué)綜述的撰寫(xiě)旅程中，學(xué)習(xí)并吸收他人佳作的精髓是一條寶貴的路徑，好期刊匯集了九篇優(yōu)秀范文，愿這些內(nèi)容能夠啟發(fā)您的創(chuàng)作靈感，引領(lǐng)您探索更多的創(chuàng)作可能。
其實(shí)，大多數(shù)環(huán)境適應(yīng)都涉及相關(guān)疾病。如乳制品代謝過(guò)程中存在乳糖不耐受、紫外輻射適應(yīng)中的光敏性皮炎以及維生素D缺乏性佝僂病等。
隨著群體遺傳學(xué)信息、環(huán)境因素和表型資料的不斷累積，有越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)，環(huán)境因素在人類(lèi)的適應(yīng)性進(jìn)化中起著至關(guān)重要的作用。
“簡(jiǎn)單而言，人類(lèi)群體環(huán)境適應(yīng)性研究就是應(yīng)用達(dá)爾文進(jìn)化論的思維，分析不同環(huán)境對(duì)生存于其中的人群的自然選擇作用?！敝袊?guó)科學(xué)院院士張亞平說(shuō)。
張亞平等從自然氣候因素、環(huán)境中的病原體分布及食物來(lái)源等方面，對(duì)人類(lèi)的適應(yīng)性進(jìn)化進(jìn)行了綜述。文章第一作者、寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)系講師季林丹認(rèn)為，人類(lèi)群體環(huán)境適應(yīng)性研究的意義之一，是可為人類(lèi)的歷史提供印證信息甚至新的線索?！皬牟杉鳙C型社會(huì)逐漸過(guò)渡為農(nóng)耕社會(huì)，人類(lèi)的飲食組成發(fā)生了極大變化，牛奶及其他乳制品、麥類(lèi)等開(kāi)始出現(xiàn)在人們的食物中?，F(xiàn)有的遺傳學(xué)數(shù)據(jù)顯示，不同人群中與上述食物代謝相關(guān)的基因可能經(jīng)歷了自然選擇，不同人群的遺傳背景與他們的飲食習(xí)慣密切相關(guān)。”
為什么北方人通常比南方人高大？為什么隨著緯度升高，人的膚色逐漸變淺？“通過(guò)環(huán)境適應(yīng)性研究，可以直接從環(huán)境角度來(lái)尋找不同人群表型差異的根本原因?！奔玖值ふf(shuō)。
此外，人類(lèi)群體環(huán)境適應(yīng)性研究還可為今后氣候變遷應(yīng)對(duì)策略的制定提供參考信息。
為更好地研究臨床疾病服務(wù)
在張亞平看來(lái)，人類(lèi)群體環(huán)境適應(yīng)性研究的最終目的是為了更好地研究臨床疾病。
從達(dá)爾文醫(yī)學(xué)角度，疾病就是一種不適應(yīng)體內(nèi)外綜合環(huán)境而導(dǎo)致的狀態(tài)，只是這個(gè)不適應(yīng)要經(jīng)由一個(gè)很長(zhǎng)的進(jìn)化學(xué)上的時(shí)間尺度才顯現(xiàn)出來(lái)而已。因此，這些疾病的發(fā)病機(jī)制及診療可以嘗試從分子進(jìn)化角度進(jìn)行新的探討。
“隨著科技發(fā)展，不同人群的表型數(shù)據(jù)、分子遺傳學(xué)數(shù)據(jù)、環(huán)境數(shù)據(jù)逐步累積，統(tǒng)計(jì)分析方法不斷改進(jìn)，從分子進(jìn)化角度來(lái)研究人類(lèi)的進(jìn)化歷史和相關(guān)疾病的研究日益增多，逐步開(kāi)始從整體、多維的角度分析人類(lèi)表型/基因型的分子進(jìn)化。”
寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院預(yù)防醫(yī)學(xué)系副教授徐進(jìn)舉了兩個(gè)國(guó)外的研究例子：2010年，劍橋大學(xué)研究人員發(fā)現(xiàn)大猩猩能夠攜帶一種導(dǎo)致瘧疾的惡性瘧原蟲(chóng)，這種瘧原蟲(chóng)曾被認(rèn)為只存在于人類(lèi)身上。瘧疾每年導(dǎo)致200萬(wàn)人死亡，其中85%的死亡發(fā)生在撒哈拉以南的非洲。他們認(rèn)為，隨著靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物和人類(lèi)的接觸增加――這主要是由于非洲的伐木和森林砍伐――人類(lèi)與動(dòng)物之間的寄生蟲(chóng)傳播風(fēng)險(xiǎn)會(huì)增加。
近期，美國(guó)加州大學(xué)伯克利分校研究人員通過(guò)研究人群中基因變異頻率與環(huán)境因素的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)病原體尤其是寄生蟲(chóng)在人類(lèi)基因變異中的作用最為重要；同時(shí)這些變異或許使人類(lèi)對(duì)自身免疫性疾病更加易感。
1.VT的臨床特點(diǎn)及診斷技術(shù)：VT常起始于脛靜脈或比目魚(yú)肌的肌內(nèi)靜脈竇，且往往多發(fā)，易脫落至?靜脈，股靜脈及下腔靜脈內(nèi)，因多數(shù)栓子體積甚小，甚至脫落至肺動(dòng)脈內(nèi)亦無(wú)任何臨床表現(xiàn)，而易被忽略，但如無(wú)防治則長(zhǎng)期反復(fù)脫落栓塞至肺動(dòng)脈，血栓機(jī)化后便形成慢性肺動(dòng)脈栓塞，引起栓塞性肺動(dòng)脈高壓、肺心病，治療棘手，預(yù)后較差。而在臨床上，常引起我們注意的是一些有明顯臨床表現(xiàn)的下肢深靜脈血栓栓塞，因其栓子較大，如連續(xù)幾塊栓子脫落栓塞于段以上的肺動(dòng)脈則可引起致命性的臨件發(fā)生，至少可在短時(shí)間內(nèi)引起心肺功能惡化。但實(shí)際上前者發(fā)病率遠(yuǎn)高于后者。須指出很多患者雖因原發(fā)疾病而死亡，但慢性肺動(dòng)脈栓塞常是使原發(fā)疾病難以糾正的重要原因。
臨床常用VT檢測(cè)手段包括下肢靜脈阻抗容積圖法、X線靜脈造影及同位素靜脈顯像等，但目前便攜式靜脈彩色超聲多譜勒儀因其方便、無(wú)創(chuàng)及靈敏度、特異性高而最受推崇，可應(yīng)用于人群普查，為研究VT單位的必備設(shè)備。
2.明確VT與PE的關(guān)系：必須強(qiáng)調(diào)，VT是PE發(fā)生的標(biāo)識(shí)。嚴(yán)格定義，PE是靜脈系統(tǒng)（含右心）血栓形成后，在環(huán)境因素作用下脫落并栓塞于肺動(dòng)脈而引起一系列病理生理變化的臨床綜合征，所以靜脈血栓是PE的源頭，而控制VT是防治PE的根本所在。
為了進(jìn)一步闡明二者之間關(guān)系，國(guó)外已有通過(guò)尸檢而確認(rèn)PE栓子靜脈來(lái)源的研究，其中歐洲的一組研究結(jié)果為：?jiǎn)蝹€(gè)栓子來(lái)源排序分別是下肢靜脈（52.7%）、盆腔靜脈叢（32.1%）、右心（13.7%）、上肢靜脈（1.5%）；多個(gè)栓子來(lái)源排序分別是下肢靜脈和盆腔靜脈叢（36.2%）、不同下肢靜脈組合（31.9%）、下肢靜脈和右心（10.6%）、盆腔靜脈叢和右心（10.6%）；19%來(lái)源不詳［1］。我國(guó)目前尚無(wú)此方面的報(bào)道，建議有條件的醫(yī)院可以聯(lián)合起來(lái)匯集尸檢資料，分析我國(guó)PE栓子的來(lái)源靜脈，對(duì)于國(guó)人PE防治有積極意義。
3.VT的危險(xiǎn)因素：目前公認(rèn)VT的危險(xiǎn)因素分為遺傳因素和環(huán)境因素兩部分。
環(huán)境因素包括：年齡＞40歲、長(zhǎng)期臥床、腫瘤、胸腹盆腔下肢或骨科手術(shù)、肥胖、靜脈曲張、心力衰竭、心肌梗塞或腦卒中、糖尿病、骨折、炎癥性腸病、腎病綜合征、長(zhǎng)期留置中心靜脈導(dǎo)管、口服避孕藥等［2，3］。
遺傳因素目前是研究VT的熱門(mén)領(lǐng)域，同樣骨折或手術(shù)后患者，臥床時(shí)間相同，有的患者發(fā)生PE而有的患者未發(fā)生，原因既在于此。目前認(rèn)為至少有12種基因參與，本文作者亦對(duì)此有較為詳細(xì)的綜述［4］。須著重強(qiáng)調(diào)的是活化的蛋白C抵抗即FV leiden，是目前最為肯定也是最常見(jiàn)的VT遺傳危險(xiǎn)因子，是V因子基因單點(diǎn)錯(cuò)意突變，即其基因核甘酸序列中1691位鳥(niǎo)嘌呤被腺嘌呤替代，導(dǎo)致其氨基酸序列中第506位精氨酸被谷酰氨代替［5］。但其與國(guó)人VT的關(guān)系，尚不清楚。目前雖可見(jiàn)在國(guó)人VT患者血中檢測(cè)到FV leiden的報(bào)道，但僅一例，并不能說(shuō)明其發(fā)生頻率。
4.國(guó)人VT研究現(xiàn)狀：目前我國(guó)匱乏大樣本、正規(guī)的VT及PE的流行病學(xué)資料。最近雖有幾組關(guān)于發(fā)病情況的報(bào)道也多是其醫(yī)院內(nèi)局域統(tǒng)計(jì)資料，對(duì)于人群防治價(jià)值有限。而血栓性疾病發(fā)病的地區(qū)、人種差異很大，不能完全引用國(guó)外的流行病學(xué)資料，尚有待我國(guó)國(guó)人資料的總結(jié)。令人鼓舞的是我院程顯聲教授領(lǐng)銜的“九五”攻關(guān)課題“肺栓塞的早期防治研究”已將VT的流行病學(xué)研究列為重要的分支課題，調(diào)查資料有望發(fā)表，將為國(guó)人VT的防治提供極為有價(jià)值的基線資料。
另外，國(guó)內(nèi)研究VT者多為血液科醫(yī)師與研究人員，規(guī)模較小，成果受限。因PE是一跨學(xué)科疾病，應(yīng)學(xué)習(xí)國(guó)外模式，聯(lián)合肺科、心臟科、血管外科、流行病學(xué)家、社區(qū)全科醫(yī)師等，形成正規(guī)研究團(tuán)體，才可能對(duì)國(guó)人VT與PE防治作出有意義的工作。
5.VT的預(yù)防措施：根據(jù)國(guó)外經(jīng)驗(yàn)，常用的VT預(yù) 防措施有以下幾種：(1)目前推薦最有效的預(yù)防措施為在以上提到的高危人群中應(yīng)用低分子量肝素或普通肝素。有報(bào)道可使VT發(fā)生率由25%降為8%，使大塊PE發(fā)生率降低50%［6，7］。(2)間歇空氣加壓：在高?；颊叩南轮脷鈮盒鋷糠昼娂訅?5～40 mm Hg×10 s (1 mm Hg=0.133 kPa)，目前認(rèn)為可以減少靜脈血栓的形成［6］。(3)有人推薦使用彈性襪預(yù)防VT，但無(wú)流行病學(xué)資料證實(shí)其有效性。(4)右旋糖苷：其預(yù)防VT發(fā)生不如肝素有效，但可進(jìn)一步阻止VT的發(fā)展而減少PE［6，8］，其作用機(jī)制可能是阻止血栓進(jìn)一步增大和脫落［9］。(5)阿司匹林：曾有研究否認(rèn)了阿司匹林對(duì)VT的預(yù)防作用，但最近一項(xiàng)較大規(guī)模臨床試驗(yàn)證實(shí)其可使VT發(fā)生率較對(duì)照組減少37%，PE發(fā)生減少71%［10］。且阿司匹林使用方便，價(jià)格便宜，適合各級(jí)醫(yī)師包括初級(jí)保健醫(yī)師、農(nóng)村醫(yī)師使用。(6)華法令雖然有效，但監(jiān)測(cè)煩瑣，作用時(shí)間較難控制，不推薦常規(guī)使用。
6.VT預(yù)防工作尚未廣泛開(kāi)展的原因：在美國(guó)，96%的外科醫(yī)師都同意在術(shù)中、術(shù)后廣泛使用各種措施預(yù)防VT［6］，而在國(guó)內(nèi)尚未廣泛開(kāi)展，其原因有以下幾條：(1)誤以為發(fā)生率低；(2) 恐懼出血的副作用；(3)擔(dān)憂醫(yī)療費(fèi)用增加（沒(méi)有計(jì)算治療PE的高額費(fèi)用）；(4)感知困難：出血令人難忘，抗凝的益處卻很難直接感知；(5)對(duì)發(fā)生的后果估計(jì)不足。這提示我們需要加強(qiáng)宣傳，提高全體醫(yī)師包括縣級(jí)基層醫(yī)院醫(yī)師防治VT的意識(shí)。
VT的研究與防治在我國(guó)是一項(xiàng)很重要的衛(wèi)生保健任務(wù)?？傮w來(lái)說(shuō)，目前我國(guó)相關(guān)研究與國(guó)外相比，差距很大，僅有零星個(gè)案報(bào)道，急需組織一支由多學(xué)科研究人員共同組成的專(zhuān)業(yè)研究團(tuán)體，專(zhuān)門(mén)從事其臨床研究工作，爭(zhēng)取從分子遺傳學(xué)、遺傳流行病學(xué)、人群篩查技術(shù)、初級(jí)及二級(jí)預(yù)防措施的推廣等多方面有所突破，從而為總體降低PE的發(fā)生打下基礎(chǔ)。
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遺傳學(xué)論文4000字(一)：南瓜銀葉突變體48a的表型特征及其遺傳學(xué)分析論文
摘要：南瓜銀葉突變體48a是在嫩食型中國(guó)南瓜中分離篩選到的穩(wěn)定遺傳自交系，銀色葉不僅可以作為標(biāo)記性狀應(yīng)用到育種中，還可為南瓜抗蟲(chóng)、抗病、耐寒等一系列研究提供重要的材料基礎(chǔ)。筆者對(duì)銀葉突變體的表型特征及葉片的解剖結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定分析，發(fā)現(xiàn)植株整體長(zhǎng)勢(shì)、熟性與野生型無(wú)明顯差異；成熟葉片正面全部呈銀灰色，葉綠素含量明顯降低，葉片上表皮細(xì)胞與柵欄細(xì)胞間明顯剝離，存在明顯的空隙。利用突變體48a和野生型49a南瓜自交系構(gòu)建的六世代遺傳群體，調(diào)查發(fā)現(xiàn)F2的綠葉與銀葉符合3∶1的分離比，回交群體BC1P1分離比符合1∶1，表明南瓜銀色葉性狀由單隱性基因控制。
關(guān)鍵詞：南瓜；銀葉突變體；表型特征；遺傳學(xué)分析
中圖分類(lèi)號(hào)：S642.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1673-2871（2020）04-012-05
南瓜葉片銀斑是南瓜中的常見(jiàn)性狀，主要表現(xiàn)為葉脈的腋處帶銀白色斑紋，俗稱(chēng)“銀斑葉”，是受單個(gè)顯性基因控制的一種斑紋[1-3]，區(qū)別于煙粉虱BemisiatabaciB型（又名銀葉粉虱B.argentifolii）誘發(fā)的葫蘆科作物葉片正面全部呈銀白色的銀葉病[4-5]。2016年筆者在嫩食型中國(guó)南瓜資源中分離出1株完全銀色葉突變體，自交后5代后形成可遺傳的穩(wěn)定銀葉自交系，同時(shí)在同一材料中分離出穩(wěn)定的普通綠葉自交系，田間種植觀察發(fā)現(xiàn)銀斑葉南瓜具有很好的避蚜和抗病毒病的效果，這為南瓜抗蟲(chóng)育種提供了新的思路。筆者對(duì)銀葉突變體的表型特征、葉片解剖結(jié)構(gòu)進(jìn)行了鑒定分析，并構(gòu)建了銀葉六世代遺傳群體進(jìn)行遺傳學(xué)分析，為后續(xù)的南瓜銀色葉基因定位和避蚜上的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
1材料與方法
1.1材料
在嫩食型中國(guó)南瓜材料的自交后代中，分離出具有完全銀葉的突變體48a和普通綠葉野生型材料49a，經(jīng)過(guò)5代自交，形成穩(wěn)定的自交系。以突變體48a和野生型49a為親本，構(gòu)建六世代遺傳群體，2018年4月將銀葉南瓜親本P1、綠葉南瓜親本P2、F1、F2、BC1P1、BC1P2種子同時(shí)種于湖南省蔬菜研究所高橋試驗(yàn)田中。種子采用穴盤(pán)育苗，幼苗生長(zhǎng)至3～4片真葉時(shí)定植，株行距50cm×100cm人字架栽培，進(jìn)行統(tǒng)一的肥水管理，用于銀葉和綠葉南瓜農(nóng)藝學(xué)性狀調(diào)查和銀葉性狀的遺傳學(xué)分析。
1.2方法
1.2.1突變體48a的表型及農(nóng)藝性狀觀察突變體48a在苗期即可觀察到明顯的銀葉表型，定植后到成株期都為銀葉表型，6月中旬成株期，對(duì)主蔓長(zhǎng)、主蔓粗、葉片長(zhǎng)度、葉片寬度、葉柄長(zhǎng)等生物學(xué)性狀進(jìn)行調(diào)查；同時(shí)在生育期內(nèi)對(duì)其始花期（小區(qū)內(nèi)50%植株開(kāi)花的時(shí)期）、雌花數(shù)量進(jìn)行調(diào)查，本試驗(yàn)分別調(diào)查測(cè)量了突變體和野生型南瓜材料各10株。
1.2.2遺傳學(xué)分析方法定植后30d左右，分別統(tǒng)計(jì)雙親、F1、F2、BC1P1、BC1P2等世代各群體銀色葉和綠色葉的植株數(shù)量，然后通過(guò)卡平方測(cè)驗(yàn)，分析控制南瓜銀葉性狀基因的遺傳特性。
1.2.3葉綠素含量測(cè)定方法待植株生長(zhǎng)到成苗期，定植后30d左右，分別取突變體48a和野生型49a的頂端嫩葉和相同位置的成熟葉片用于檢測(cè)葉綠體色素含量。參考Arnon法[6]，具體如下：隨機(jī)稱(chēng)取葉片0.1g，剪碎，裝入15mL帶塞的玻璃試管中，加入10mL的80%丙酮，黑暗浸泡24h，至組織發(fā)白。將提取液在島津公司的UV-1800分光光度計(jì)上測(cè)定663、645、470nm波長(zhǎng)的OD值，計(jì)算Ca、Cb、Cx·c和CT（mg·L-1），公式如下：
Ca=12.21×OD663-2.81×OD645；
Cb=20.13×OD645-5.03×OD663；
Cx·c=（1000×OD470-3.27×Ca-104×Cb）/229；
CT=Ca+Cb。
式中，Ca、Cb和CT分別表示葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素濃度；Cx·c為類(lèi)胡蘿卜濃度，按下式計(jì)算組織中各色素含量。
葉綠體色素含量（mg·g-1）=（色素濃度×提取液體積×稀釋倍數(shù)）/樣品鮮質(zhì)量。
1.2.4葉片解剖學(xué)觀察方法定植后30d左右，選取生長(zhǎng)一致的突變體48a和野生型49a植株相同部位的成熟葉片，用于葉片解剖學(xué)觀察。首先用FAA固定液固定，番紅-固綠染色，RM2016病理切片機(jī)進(jìn)行切片，切片放入干凈的二甲苯透明5min，中性樹(shù)膠封片，NIKONECLIPSEE100光學(xué)顯微鏡鏡檢，NIKONDS-U3成像系統(tǒng)進(jìn)行圖像采集分析。用測(cè)微尺測(cè)量葉片橫截面的厚度、上下表皮厚度、柵欄組織厚度、海綿組織厚度，葉片結(jié)構(gòu)緊密度（CTR）、疏松度（SR）的計(jì)算，參考田麗波等[7]的方法。
CTR/%=（柵欄組織厚度/葉片厚度）×100；
SR/%=（海綿組織厚度/葉片厚度）×100。
2結(jié)果與分析
2.1突變體48a的表型與農(nóng)藝性狀分析
突變體48a和野生型49a進(jìn)行表型對(duì)比觀察。子葉期，銀葉突變體和綠葉野生型子葉均表現(xiàn)為正常的綠色，子葉顏色無(wú)明顯差別；但進(jìn)入真葉期，突變體48a長(zhǎng)出真葉為綠色，帶明顯銀斑（圖1-A），隨著真葉逐漸長(zhǎng)大，葉正面銀灰色逐漸加深，植株長(zhǎng)大成熟后，葉片正面全部為銀灰色（圖1-B、C、E），背面仍為綠色（圖1-D）。
由成熟期的田間比較（圖1-B）可以看出，除了葉色有明顯區(qū)別外，突變體48a與野生型49a南瓜整體長(zhǎng)勢(shì)和熟性差別不大，對(duì)兩者農(nóng)藝性狀測(cè)量數(shù)據(jù)顯示，兩者的始花期、葉長(zhǎng)、葉寬等指標(biāo)無(wú)明顯差異。其中突變體48a南瓜主蔓長(zhǎng)度（335.43±14.50）cm，比野生型49a低8.94%，而突變體48a主蔓粗度（1.19±0.03）cm，比野生型49a高4.39%，整體長(zhǎng)勢(shì)與野生型49a差別不大（表1）。
2.2遺傳學(xué)分析
構(gòu)建六世代遺傳群體，用目測(cè)分級(jí)的方法探究南瓜葉顏色的遺傳規(guī)律，F(xiàn)1為綠葉、卡平方檢驗(yàn)結(jié)果表明F2綠葉與銀葉符合3∶1的分離比，回交群體BC1P1分離比符合1∶1，BC1P2植株葉顏色全為綠色，南瓜銀色葉性狀符合1對(duì)顯一隱性基因的分離規(guī)律，為完全隱性遺傳（表2）。
2.3葉綠素含量分析
由圖2可以看出，突變體48a與野生型49a間葉綠素相比，葉片葉綠素含量明顯減低，但嫩葉與成熟葉間的葉綠素?zé)o明顯差別。從成熟葉來(lái)看，突變體48a葉片中，葉綠素和類(lèi)胡蘿卜素含量均顯著低于野生型葉片，其中葉綠素含量的變化主要由于葉綠素a含量變化導(dǎo)致，葉綠素b含量相對(duì)于綠葉野生型葉片無(wú)明顯差異。
2.4突變體48a解剖學(xué)特征
從葉片橫切面可見(jiàn)（圖3-A）銀葉突變體48a葉片的上表皮細(xì)胞與柵欄組織、下表皮細(xì)胞與海綿狀組織之間有明顯的空隙，其中上部空隙更大。從圖3-B可見(jiàn)綠葉野生型49a葉片的上表皮細(xì)胞與柵欄細(xì)胞，下表皮細(xì)胞與海綿狀的葉肉細(xì)胞之間連接緊密，沒(méi)有明顯的空隙。
對(duì)突變體48a與野生型49a的葉片厚度、表皮細(xì)胞厚度、柵欄組織厚度、海綿組織厚度進(jìn)行測(cè)量（表3），結(jié)果表明，突變體48a海綿組織厚度（44.2±3.00）μm，顯著低于野生型49a，葉片厚度、上表皮厚度、下表皮厚度、柵欄組織厚度等指標(biāo)兩者間無(wú)顯著性差異，通過(guò)測(cè)算，突變體48a葉片結(jié)構(gòu)緊密度（CTR）32.06%，顯著高于野生型49a，葉片葉片結(jié)構(gòu)疏松度（SR）40.11%，顯著低于野生型49a（表3）。
3討論
突變體48a的銀色葉可能是葉片結(jié)構(gòu)變化所致，一般葉斑/片顏色變化產(chǎn)生原因主要分兩類(lèi)，色素的變化（葉綠素/花青素等）和葉片結(jié)構(gòu)的變化（表皮細(xì)胞/空隙結(jié)構(gòu)）。前人研究普遍認(rèn)為銀斑是葉片結(jié)構(gòu)變化導(dǎo)致的，由于上表皮組織與柵欄組織之間的空隙，使光線達(dá)到綠色組織時(shí)候發(fā)生二次反射，在葉片上表皮形成多邊形的光反射，而不是正常綠葉上皮細(xì)胞形成的白色點(diǎn)狀光反射，使得葉片呈現(xiàn)偏灰白色，即銀色的葉片/葉斑[8-10]。本研究結(jié)果表明，銀葉突變體48a的葉綠素含量比野生型49a雖有顯著降低，但也不會(huì)造成葉面顯示銀灰色，從突變體48a葉片解剖學(xué)特征顯示，上表皮細(xì)胞與柵欄組織、下表皮細(xì)胞與海綿狀組織之間有明顯的空隙，其中上部空隙更大，這與張慧杰、張站備等[11-12]對(duì)西葫蘆銀斑研究一致，但他們的研究主要是基于西葫蘆銀葉病的葉片結(jié)構(gòu)，突變體48a與西葫蘆銀葉病葉片在結(jié)構(gòu)上雖然相似，但西葫蘆銀葉病會(huì)造成植株長(zhǎng)勢(shì)弱、植株矮小、生長(zhǎng)點(diǎn)皺縮等特征[4]，而突變體48a與野生型49a相比，除葉片呈銀灰色外，植株整體長(zhǎng)勢(shì)正常，與野生型差別不大。所以突變體48a葉綠素含量明顯減低，但長(zhǎng)勢(shì)正常的原因值得進(jìn)一步研究。
銀葉突變體48a的銀葉表型為單基因的隱性遺傳，與Lopez-Anido等[13]研究結(jié)果一致，他們?cè)谖餮竽瞎虾椭袊?guó)南瓜雜交后代中發(fā)現(xiàn)了1個(gè)完全銀葉，研究表明由隱性基因grl控制。而Coyne[14]和Paris[15]等研究認(rèn)為，南瓜銀斑葉受M基因的顯性遺傳，且認(rèn)為影響銀葉性狀變異的主要因素有3個(gè)，（1）細(xì)胞結(jié)構(gòu)：V基因作用最強(qiáng)的部位是位于葉脈的腋處的細(xì)胞。（2）修飾基因：影響了M基因的時(shí)空表達(dá)。（3）包括溫度/干旱在內(nèi)的環(huán)境因素。據(jù)筆者田間試驗(yàn)表明，突變體48a的銀葉性狀，不受環(huán)境影響，在不同季節(jié)、不同環(huán)境下種植均顯示完全銀葉，也不受時(shí)空表達(dá)影響，在全生育期內(nèi)均顯示銀色葉。目前南瓜的基因組測(cè)序已經(jīng)完成[16]，下一步擬利用全基因組混池測(cè)序的方法，進(jìn)行銀葉基因的快速定位，為后續(xù)研究該基因在南瓜中的作用機(jī)理奠定基礎(chǔ)。
遺傳學(xué)畢業(yè)論文范文模板(二)：高職臨床醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)課程教學(xué)改革探討論文
[摘要]面對(duì)高職院校醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)課程教學(xué)的困境及主要問(wèn)題，圍繞提高學(xué)生學(xué)習(xí)興趣和教學(xué)效果的目標(biāo)，本文從高職臨床醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)學(xué)生特點(diǎn)、學(xué)?，F(xiàn)實(shí)情況及人才培養(yǎng)目標(biāo)出發(fā)，分析適應(yīng)于高職臨床醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)的醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)課程定位、課程目標(biāo)及內(nèi)容設(shè)置，舉例探討優(yōu)化抽象性、理論性強(qiáng)、重點(diǎn)教學(xué)內(nèi)容的方式方法，提出改革、創(chuàng)新課堂教學(xué)方法和考核評(píng)價(jià)手段，以提升學(xué)生的學(xué)習(xí)主觀能動(dòng)性，探討提升高職醫(yī)學(xué)遺傳課程教學(xué)質(zhì)量的途徑。
[關(guān)鍵詞]高職；醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)；教學(xué)改革
[中圖分類(lèi)號(hào)]R394；G712[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1673-7210（2020）01（c）-0185-05
醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)是研究人類(lèi)遺傳性疾病的病因、遺傳方式、診斷、預(yù)防和治療的一門(mén)學(xué)科，也是基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床醫(yī)學(xué)之間的橋梁課程，是醫(yī)學(xué)院校學(xué)生必須學(xué)習(xí)和掌握的一門(mén)課程。但高職院校在培養(yǎng)目標(biāo)、學(xué)生層次、教材、教學(xué)、實(shí)驗(yàn)環(huán)境等方面有其自身的特點(diǎn)，學(xué)生層次不一、課時(shí)少、實(shí)驗(yàn)室硬件條件較差等。教師如何選擇教育模式來(lái)激發(fā)學(xué)生興趣和提高教學(xué)效果，進(jìn)行教學(xué)的診斷與改革是個(gè)值得探討的問(wèn)題。
1課程定位
高職院校的醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)課程時(shí)臨床醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)必修的一門(mén)專(zhuān)業(yè)拓展課程，是一門(mén)理論+實(shí)踐的課程，其功能是對(duì)接專(zhuān)業(yè)人才培養(yǎng)目標(biāo)、面向基層醫(yī)院、衛(wèi)生所、社區(qū)醫(yī)院等工作崗位，目標(biāo)是在培養(yǎng)學(xué)生掌握基本醫(yī)學(xué)遺傳理論知識(shí)的同時(shí)，形成良好的醫(yī)學(xué)職業(yè)行為操守，建立能尊重患者、為患者服務(wù)、替患者著想的職業(yè)素質(zhì)[1]。
2課程目標(biāo)與內(nèi)容設(shè)置
醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)課程理論知識(shí)涉及面廣，綜合了細(xì)胞學(xué)、分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、醫(yī)學(xué)倫理學(xué)等知識(shí)[2-4]。課程的整體設(shè)計(jì)不僅要讓學(xué)生掌握醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)的基本知識(shí)、遺傳病發(fā)生的機(jī)制以及遺傳方式，學(xué)會(huì)利用產(chǎn)前診斷的原理幫助人類(lèi)減少出生缺陷，降低遺傳病的發(fā)生率，而且應(yīng)注重遺傳倫理學(xué)、醫(yī)學(xué)法律法規(guī)等醫(yī)學(xué)人文知識(shí)的滲透融合[5-7]。高職的臨床醫(yī)學(xué)生通過(guò)學(xué)習(xí)能掌握醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)的經(jīng)典理論和技能，同時(shí)形成良好的職業(yè)素養(yǎng)，邏輯推理和創(chuàng)新思維也得到開(kāi)發(fā)，為衛(wèi)生保健和醫(yī)療實(shí)踐服務(wù)。本課程總課時(shí)32學(xué)時(shí)，其中理論課26學(xué)時(shí)、實(shí)驗(yàn)課6學(xué)時(shí)。
2.1課程目標(biāo)
該課程教學(xué)的知識(shí)培養(yǎng)目標(biāo)是使得學(xué)生能熟練掌握遺傳的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)以及分子生物學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)，學(xué)會(huì)利用遺傳的基本規(guī)律分析常見(jiàn)遺傳病的傳遞方式，學(xué)會(huì)對(duì)人染色體進(jìn)行核型分析，能運(yùn)用醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)原理解釋一些常見(jiàn)的臨床遺傳病的遺傳機(jī)制；其能力培養(yǎng)目標(biāo)是培養(yǎng)學(xué)生具備分析正常核型、識(shí)別常見(jiàn)染色體病的能力，繪制系譜及分析常見(jiàn)單基因遺傳方式的能力和初步診斷常見(jiàn)遺傳病以及具備優(yōu)生指導(dǎo)的能力；職業(yè)素質(zhì)培養(yǎng)目標(biāo)是樹(shù)立辨證唯物主義的生命觀、客觀的職業(yè)認(rèn)知及職業(yè)意識(shí)、熱愛(ài)醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)、良好的職業(yè)行為習(xí)慣及職業(yè)道德，塑造嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶W(xué)術(shù)學(xué)風(fēng)、務(wù)實(shí)的職業(yè)態(tài)度、良好的職業(yè)道德和積極的職業(yè)價(jià)值觀，促進(jìn)學(xué)生個(gè)性化發(fā)展、人格逐步完善，同時(shí)具有良好的合作精神和服務(wù)意識(shí)[8-9]。
2.2內(nèi)容設(shè)置
課程理論教學(xué)主體內(nèi)容包括醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)概述、遺傳的分子學(xué)基礎(chǔ)、遺傳的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)、遺傳的基本規(guī)律、單基因遺傳病、多基因遺傳病、染色體畸變與染色體病、優(yōu)生學(xué)等部分。該課程設(shè)置與傳統(tǒng)理論、純實(shí)驗(yàn)實(shí)訓(xùn)課程比較，該課程凸顯了學(xué)科融合、邏輯推理思維能力培養(yǎng)、實(shí)驗(yàn)技能訓(xùn)練及理論聯(lián)系臨床等特點(diǎn)。
長(zhǎng)沙衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院（以下簡(jiǎn)稱(chēng)“我?！保└鶕?jù)高職臨床醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)學(xué)生的人才培養(yǎng)目標(biāo)及特點(diǎn)優(yōu)化設(shè)計(jì)，該課程的實(shí)驗(yàn)課開(kāi)設(shè)染色體核型分析、系譜分析、唐氏篩查3個(gè)實(shí)驗(yàn)，均注重遺傳學(xué)理論、實(shí)驗(yàn)技能及醫(yī)學(xué)人文知識(shí)的融合滲透（表1）。高職醫(yī)學(xué)院校培養(yǎng)的臨床醫(yī)學(xué)生對(duì)接的是基層醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)，染色體核型分析實(shí)驗(yàn)通過(guò)手工剪紙的方式讓學(xué)生熟指人類(lèi)21對(duì)染色體的基本形態(tài)結(jié)構(gòu)，掌握根據(jù)各組染色體的形態(tài)特征進(jìn)行分類(lèi)，并能進(jìn)行核型分析，了解常見(jiàn)的染色體疾病及核型；系譜分析實(shí)驗(yàn)整體設(shè)計(jì)鍛煉學(xué)生能在臨床實(shí)踐中繪制出患者的家族系譜并進(jìn)行簡(jiǎn)單分析，了解常見(jiàn)遺傳病的臨床表現(xiàn)及遺傳方式；唐氏綜合征篩查實(shí)驗(yàn)通過(guò)血清學(xué)的方法分析21-三體綜合征的臨床意義，普及唐氏綜合征的影響因素，并從遺傳學(xué)角度培養(yǎng)學(xué)生分析解決優(yōu)生問(wèn)題的能力，增強(qiáng)優(yōu)生觀念，做好基層優(yōu)生宣傳。
3教學(xué)內(nèi)容的優(yōu)化
將教學(xué)內(nèi)容進(jìn)行優(yōu)化整合，注重理論知識(shí)設(shè)計(jì)的簡(jiǎn)約性，同時(shí)融入臨床內(nèi)容將教學(xué)過(guò)程豐富和生動(dòng)活化，積極倡導(dǎo)自主、合作、探究的學(xué)習(xí)方式，采取活動(dòng)體驗(yàn)和問(wèn)題探討等方式進(jìn)行指導(dǎo)。如Prochazkova等[10]在講授醫(yī)學(xué)分子遺傳學(xué)時(shí)，采用游戲化、數(shù)據(jù)模擬的方式，開(kāi)發(fā)的交互式應(yīng)用程序模擬了一個(gè)家族遺傳性疾病的分子遺傳學(xué)診斷過(guò)程，大大地吸引了學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，提高了教學(xué)效果。
3.1枯燥乏味、抽象性教學(xué)內(nèi)容的優(yōu)化
對(duì)枯燥乏味、抽象性的教學(xué)內(nèi)容進(jìn)行趣味化加工處理，如講授染色體病時(shí)，適當(dāng)插入一些病例圖片，既形象、生動(dòng)，又記憶深刻，理論性較強(qiáng)的內(nèi)容進(jìn)行簡(jiǎn)易化及圖示化處理（表2、圖1）。
3.2難理解、理論性較強(qiáng)的教學(xué)內(nèi)容的優(yōu)化
對(duì)于難理解、理論性較強(qiáng)的內(nèi)容進(jìn)行歸納總結(jié)，幫助學(xué)生理清思路。如講解遺傳的分子學(xué)基礎(chǔ)時(shí)，針對(duì)基因的分類(lèi)及結(jié)構(gòu)，文字的講解使得學(xué)生很容易混淆和不理解，即使加上基因的結(jié)構(gòu)圖，高職的學(xué)生還是覺(jué)得模糊不清，可適當(dāng)加上圖表的方式進(jìn)行匯總歸納，幫助學(xué)生進(jìn)行理解和記憶（圖2）。
4創(chuàng)新和豐富課程教學(xué)方式方法
根據(jù)高職醫(yī)學(xué)生的特點(diǎn)、高職醫(yī)學(xué)遺傳課程的培養(yǎng)目標(biāo)，該課程的課堂教學(xué)方法應(yīng)注重教與學(xué)互動(dòng)、教學(xué)方式多樣化、內(nèi)容興趣化。
4.1根據(jù)課程內(nèi)容需要，采取多樣化的教學(xué)方法
案例教學(xué)及討論教學(xué)法可將臨床案例搬入課堂學(xué)習(xí)，在學(xué)生早期還未積累經(jīng)驗(yàn)時(shí)，給學(xué)生提供熟悉的學(xué)習(xí)背景，幫助學(xué)生整合應(yīng)用專(zhuān)業(yè)知識(shí)、全面學(xué)習(xí)評(píng)估具體的臨床問(wèn)題，激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)的興趣，引發(fā)學(xué)生對(duì)專(zhuān)業(yè)知識(shí)的理解、工作態(tài)度和職業(yè)理念的探究，了解職業(yè)行為及態(tài)度在真實(shí)經(jīng)驗(yàn)或想象的經(jīng)歷中的應(yīng)用[11-12]。例如講解單基因遺傳病時(shí)，分析共顯性遺傳時(shí)，舉例ABO血型的遺傳方式，以故事的形式假設(shè)某院同一天出生了4個(gè)孩子，已知4個(gè)孩子的血型分別是A、B、O、AB，4個(gè)孩子父母的血型分別為O與O、AB與O、A與B、B與B，請(qǐng)你采用遺傳學(xué)的知識(shí)幫護(hù)士將4個(gè)孩子準(zhǔn)確無(wú)誤地分配給他們的父母？通過(guò)故事和敘事的方式，演示推理過(guò)程，解釋遺傳學(xué)知識(shí)，拓展醫(yī)務(wù)工作職業(yè)行為及涉及的法律法規(guī)問(wèn)題，使學(xué)生加深印象和理解，引導(dǎo)學(xué)生樹(shù)立良好的職業(yè)行為習(xí)慣。案例敘述教學(xué)應(yīng)強(qiáng)調(diào)學(xué)生參與評(píng)論事件，促使學(xué)生認(rèn)識(shí)蘊(yùn)含在行動(dòng)中的價(jià)值觀，這種教學(xué)方法可充分展示醫(yī)務(wù)工作者的能力，調(diào)動(dòng)學(xué)生的積極性參與討論，促進(jìn)教學(xué)互動(dòng)[13]，使學(xué)生以學(xué)生的角度是評(píng)價(jià)、剖析、辨別、反思醫(yī)學(xué)行為，提高其發(fā)現(xiàn)、分析和解決問(wèn)題的綜合能力，促進(jìn)學(xué)生對(duì)問(wèn)題進(jìn)行主動(dòng)思考和歸納，將自己的觀點(diǎn)與他人的觀點(diǎn)相對(duì)比而做出深思熟慮的選擇，塑造自己的思想和行為。情境教學(xué)法通過(guò)角色扮演的教學(xué)方式，讓學(xué)生處于醫(yī)務(wù)工作的環(huán)境。在講述常染色體遺傳病時(shí)，舉例史詩(shī)級(jí)的生物學(xué)家達(dá)爾文，為什么他無(wú)后代，因?yàn)樗c他的表妹結(jié)婚，雖然生育了10個(gè)孩子，但有3個(gè)從小就夭折，剩余的7個(gè)孩子，除了二女兒終身未婚，其余的都終身不育，該實(shí)例為解釋婚姻法中避免近親婚配提供了實(shí)際基礎(chǔ)。在此過(guò)程中，要求學(xué)生繪制系譜圖，通過(guò)連連看的方式說(shuō)明親緣系數(shù)（圖3），假設(shè)自己置身于系譜圖中的角色，估算親近結(jié)婚的遺傳病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，解釋遺傳規(guī)律，拓展醫(yī)學(xué)遺傳倫理學(xué)中有關(guān)遺傳病患者的婚配與生育權(quán)問(wèn)題，由此激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，培養(yǎng)學(xué)生主動(dòng)學(xué)習(xí)的能力，同時(shí)增強(qiáng)課堂趣味性。
Ⅲ2與Ⅱ5之間有兩段不間斷的連線，兩者為二級(jí)親屬；Ⅲ2與Ⅲ5之間有三段不間斷的連線，兩者為三級(jí)親屬
4.2邊緣性的遺傳學(xué)內(nèi)容，采用多元結(jié)合的教學(xué)方法
邊緣性的遺傳學(xué)內(nèi)容，采用多元結(jié)合的教學(xué)方法[14]。例如，八成以上的罕見(jiàn)病由遺傳因素引起，而且國(guó)內(nèi)的罕見(jiàn)病誤診、漏診很多，但因?yàn)楹币?jiàn)性遺傳病種類(lèi)多、發(fā)病率低，大多遺傳學(xué)的教材中未曾涉及，如果利用有限的課堂教學(xué)提高學(xué)生對(duì)罕見(jiàn)遺傳病的診斷識(shí)別能力具有重要意義，南通大學(xué)的陳曹逸等[15]指出采用“課堂教學(xué)+撰寫(xiě)綜述+課堂討論+教師總結(jié)點(diǎn)評(píng)”的多元教學(xué)方法，不僅能提高學(xué)生的探索能力和學(xué)習(xí)興趣，也能豐富教學(xué)雙方的交流與溝通，活躍課堂教學(xué)氛圍。
4.3用信息手段，開(kāi)展互聯(lián)網(wǎng)教學(xué)
將信息技術(shù)與醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)課堂教學(xué)內(nèi)容深度融合，以網(wǎng)絡(luò)資源平臺(tái)拓展個(gè)性化學(xué)習(xí)空間，多媒體教學(xué)資源由少量文字、圖片、數(shù)據(jù)圖表、動(dòng)畫(huà)、音頻、視頻等元素組成，能給學(xué)生以更強(qiáng)烈的感官記憶[16-17]。我校的醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)課程充分利用學(xué)院“學(xué)習(xí)通”信息化教學(xué)平臺(tái)，為學(xué)生提供了豐富的教學(xué)課件、專(zhuān)題討論資料、課程文獻(xiàn)資料、課后復(fù)習(xí)資料等，開(kāi)展網(wǎng)上教學(xué)答疑、疑難案例討論等活動(dòng)，形成集電子教案、試題庫(kù)、文獻(xiàn)庫(kù)、教學(xué)反饋等為一體的網(wǎng)絡(luò)教學(xué)資源平臺(tái)，實(shí)現(xiàn)“教學(xué)-學(xué)習(xí)-輔導(dǎo)”無(wú)縫對(duì)接。在課前，任課老師通過(guò)學(xué)習(xí)平臺(tái)共享教學(xué)資源讓學(xué)生進(jìn)行預(yù)習(xí)，學(xué)生在預(yù)先過(guò)程出現(xiàn)的相關(guān)問(wèn)題反饋到教師，教師通過(guò)平臺(tái)了解學(xué)生基本信息，并根據(jù)學(xué)生的課前反饋情況進(jìn)行有目的的教學(xué)設(shè)計(jì)；在上課中，教師可通過(guò)教學(xué)平臺(tái)進(jìn)行師生互動(dòng)，教師可通過(guò)導(dǎo)入問(wèn)題至平臺(tái)中，學(xué)生通過(guò)手機(jī)直接回答問(wèn)題，采用信息化的手段使得每個(gè)學(xué)生都可參與教學(xué)的課堂提問(wèn)或討論，教師可根據(jù)全部的學(xué)生結(jié)果進(jìn)行分析，針對(duì)學(xué)生集中容易出錯(cuò)的知識(shí)點(diǎn)、部分未講解清楚的內(nèi)容等進(jìn)行針對(duì)性的講解，幫助學(xué)生進(jìn)一步地理解和掌握；在課后，教師根據(jù)學(xué)生的課前預(yù)習(xí)和課堂教學(xué)情況進(jìn)行有針對(duì)性的課后作業(yè)，學(xué)生在規(guī)定時(shí)間內(nèi)完成課后作業(yè)并提交平臺(tái)，教師對(duì)做錯(cuò)題的同學(xué)進(jìn)行個(gè)別輔導(dǎo)，實(shí)現(xiàn)私人訂制式的個(gè)人輔導(dǎo)[18]。普及遺傳學(xué)相關(guān)專(zhuān)業(yè)網(wǎng)站，如中國(guó)遺傳咨詢(xún)網(wǎng)、中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)遺傳咨詢(xún)分會(huì)，學(xué)生可以在相應(yīng)的網(wǎng)上查看相關(guān)遺傳疾病詳細(xì)、專(zhuān)業(yè)的、科學(xué)的遺傳學(xué)知識(shí)和相關(guān)病例分析，拓寬醫(yī)學(xué)視野和見(jiàn)解，激發(fā)學(xué)習(xí)熱情。
5改革考核方式及手段
高職教育是為了培養(yǎng)技能型的人才，評(píng)價(jià)方式應(yīng)多樣化，注重學(xué)生的技能操作能力的提升，其中理論試卷考核分?jǐn)?shù)占50%，實(shí)驗(yàn)考核占40%，教師平時(shí)考核占10%。改革理論考核手段，由傳統(tǒng)的試卷答題改為利用手機(jī)學(xué)習(xí)通進(jìn)行無(wú)紙化電子考核；實(shí)驗(yàn)考核采取抽題作答和現(xiàn)場(chǎng)操作考核相結(jié)合，學(xué)生的最終實(shí)驗(yàn)考核成績(jī)由實(shí)驗(yàn)課平時(shí)分（30%）、實(shí)驗(yàn)操作（50%）和實(shí)驗(yàn)現(xiàn)場(chǎng)作答（20%）組成，這種考核不僅能調(diào)動(dòng)學(xué)生日常實(shí)驗(yàn)課的參與積極性，也能激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，提高操作技能。
[關(guān)鍵詞] 心肌?。环屎裥停还Ｗ栊裕徊∫蜻z傳學(xué)；病理生理；梗阻機(jī)制；治療
[中圖分類(lèi)號(hào)] R542.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2012）10（b）-0022-04
肥厚型心肌病是一種相對(duì)常見(jiàn)的顯性遺傳性疾病，約50%患者有家族史，在我國(guó)發(fā)病率約為1/500[1]。肥厚型心肌病以不對(duì)稱(chēng)性心肌肥厚、心肌纖維肥大、排列紊亂為病理特征，其中，由于左心室流出道（LVOT）在靜息或應(yīng)激狀態(tài)下出現(xiàn)血流動(dòng)力學(xué)梗阻的被稱(chēng)為梗阻性肥厚型心肌?。℉OCM），大約25%的HCM患者存在左心室流出道梗阻，提示患者預(yù)后不良，是青少年尤其是35歲以下運(yùn)動(dòng)員心源性猝死（SCD）的最常見(jiàn)原因[2]。HCM 在世界范圍內(nèi)的人群發(fā)病率約為0.2%[3]，患者年死亡率約為1%[4]。HCM是致病基因、修飾基因、環(huán)境等因素共同作用的結(jié)果。本文就HOCM的致病分子機(jī)制、病理生理、梗阻機(jī)制及診治的研究進(jìn)展作一全面綜述。
1 病因遺傳學(xué)
分子遺傳學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，編碼肌小節(jié)結(jié)構(gòu)蛋白的基因突變是肥厚型心肌病的根本病因，數(shù)個(gè)基因中的一個(gè)發(fā)生突變即可致病[5]，大約50%的HCM患者是由于心肌肌小節(jié)蛋白基因突變所致。與基因突變有關(guān)的肥厚型心肌病在分子水平上是一種“肌小節(jié)疾病”[6]，編碼肌小節(jié)蛋白的基因突變是肥厚型心肌病形成的分子基礎(chǔ)[7]。已發(fā)現(xiàn)和報(bào)道13個(gè)突變基因和超過(guò)400個(gè)位點(diǎn)突變與HCM的發(fā)病有關(guān)[8]，其中有11種是編碼肌小節(jié)結(jié)構(gòu)蛋白的基因[9]。8個(gè)常見(jiàn)的致病基因?qū)е?0%的病例，編碼β肌球蛋白重鏈的MYH7基因及編碼心臟肌球蛋白結(jié)合蛋白C的MYBPC3基因?yàn)镠CM最常見(jiàn)的兩個(gè)致病基因，已報(bào)道與HCM相關(guān)的MYH7突變超過(guò)180個(gè)[10]，在心肌的能量供應(yīng)產(chǎn)生中具有重要的作用，MYH7突變引起的HCM占35%～50%[11]。MYBPC3基因突變引起的HCM 占20～25%[12]。心臟肌鈣蛋白T（TnT）是一種重要的調(diào)節(jié)蛋白，該基因突變引起的HCM 約占15～20%[11]，這類(lèi)患者具有心肌肥厚程度輕、猝死發(fā)生早、預(yù)后不良的特點(diǎn)。其他與HCM 相關(guān)的基因還包括肌鈣蛋白I3 基因（TnI3）、α-原肌球蛋白基因（TPM1）、肌球輕鏈蛋白基因（MYL2、MYL3）及心臟肌動(dòng)蛋白基因（ACTC1）等，這些基因突變引起的HCM 所占比例相對(duì)較小，每個(gè)基因占1%～5%甚至更少。研究還發(fā)現(xiàn)，核基因編碼的線粒體磷酸載體蛋白（PiC）Gly72Glu同質(zhì)性突變導(dǎo)致HCM患者的肌肉線粒體ATP合成障礙[13]。HCM與其他疾病一樣，即使同一個(gè)家族或不同家族攜帶同一突變是否發(fā)病，個(gè)體之間差異很大，不同的基因突變也可有同樣的臨床表現(xiàn)，這些差異與環(huán)境因素、性別差異、遺傳因素、不同的致病與修飾基因、表觀遺傳因素有關(guān)。
多種因素參與了HCM的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程。已發(fā)現(xiàn)HCM患者體內(nèi)存在兒茶酚胺活性增強(qiáng)和環(huán)磷酸腺苷的儲(chǔ)存減少。美國(guó)國(guó)家心肺血液中心的研究發(fā)現(xiàn)，HCM患者中33%心室間隔及心房肌的鈣拮抗劑受體增加，胞質(zhì)內(nèi)鈣調(diào)節(jié)機(jī)制異?？赡軈⑴cHCM發(fā)病過(guò)程。另外，HCM患者血漿中去甲腎上腺素、心鈉素和腦鈉肽濃度均顯著增高，其中，腦鈉肽濃度可以反映心室內(nèi)壓力階差和左心室舒張功能不全，而心鈉素只反映左心室舒張功能不全。
2 病理和病理生理
HOCM患者通常表現(xiàn)為室間隔增厚為主、心室壁其他各部分正?；虿煌潭仍龊?，整體心室心肌形態(tài)呈現(xiàn)復(fù)雜多樣。典型的病理表現(xiàn)為心肌顯著肥厚和心室腔縮小，并且以左心室肥厚多見(jiàn)，顯微鏡下可見(jiàn)心肌纖維粗大、交錯(cuò)排列。病理生理改變的特點(diǎn)是動(dòng)力性壓力階差的存在，最初認(rèn)為這種壓力階差為主動(dòng)脈瓣下區(qū)的肌性括約肌作用所致，目前認(rèn)為是面對(duì)肥厚室間隔的二尖瓣前葉收縮期前向運(yùn)動(dòng)（SAM）導(dǎo)致原已狹小的左心室流出道（由顯著肥厚的室間隔，或因二尖瓣位置異常引起的狹窄）進(jìn)一步狹窄。當(dāng)流出道存在壓力階差時(shí)，左心室射血受到機(jī)械性梗阻，為二尖瓣前向運(yùn)動(dòng)跨越流出道，在收縮中期與室間隔接觸所致。而舒張功能不全為HCM最具特征性的病理生理改變，大多數(shù)HCM患者，無(wú)論是否有臨床癥狀的出現(xiàn)，均可出現(xiàn)心室舒張功能異常[14]。心肌間質(zhì)纖維化和心肌細(xì)胞排列紊亂使室壁僵硬度增加，引起心室弛緩及擴(kuò)張異常從而導(dǎo)致心室舒張充盈改變，心室充盈壓升高，使舒張充盈時(shí)間推遲，降低了心室舒張速度，導(dǎo)致心室舒張功能異常。而引起心肌缺血的主要原因是肥厚心肌心壁內(nèi)冠狀動(dòng)脈異常，血管內(nèi)徑縮小且血管壁增厚，使血管舒張儲(chǔ)備力受損，心肌需氧量增加，尤其是存在流出道壓力階差患者，可反復(fù)引起室壁張力增高和增加心肌氧耗以及收縮期主動(dòng)脈的高速血流對(duì)冠狀動(dòng)脈血流的抽吸作用，促使心肌缺血壞死和纖維化，形成惡性循環(huán)，最終導(dǎo)致心力衰竭。主動(dòng)脈瓣下壓力階差>30 mm Hg，可成為HOCM患者猝死、產(chǎn)生心力衰竭、腦卒中的獨(dú)立預(yù)后因素。有文獻(xiàn)指出，安靜時(shí)流出道壓力階差>30 mm Hg，總死亡危險(xiǎn)增加。此外，心房負(fù)荷的增加、二尖瓣返流、肥厚心肌質(zhì)量的增加、心肌缺血，可導(dǎo)致多種形態(tài)的心律失常，以房性心律失常多見(jiàn)，占35%～50%。房性和室性心律失常是HOCM患者死亡的重要原因之一。
3 梗阻機(jī)制
肥厚型心肌病根據(jù)其左心室流出道內(nèi)的血流動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)可分為梗阻性與非梗阻性。而HOCM主要特點(diǎn)為左室與主動(dòng)脈流出道壓差超過(guò)50 mm Hg。根據(jù)梗阻發(fā)生在LVOT的不同部位，包括：（1）二尖瓣水平梗阻。最常見(jiàn)，二尖瓣前葉收縮期前向運(yùn)動(dòng)（SAM）是HOCM患者LVOT梗阻的主要原因。而SAM的原因有室間隔肥厚致肌位置發(fā)生變化以及二尖瓣在左室流出道的位置異常，致使二尖瓣向室間隔靠攏；（2）左心室中部梗阻。與室間隔中部、肌肥厚和左室心尖部室壁瘤形成有關(guān)，左室中部梗阻時(shí)，收縮期在左心室形成兩個(gè)心腔，上端心腔的血流射入主動(dòng)脈，心尖部形成的高壓腔血流在舒張?jiān)缙诜戳魅胱笮姆浚唬?）心尖部梗阻。由心尖肥厚肌肉的過(guò)度收縮所致，可導(dǎo)致極高的壓力階差；（4）右室流出道梗阻。較少見(jiàn)，當(dāng)右室的肥厚心肌收縮時(shí)，將血液射入由室上嵴及中隔旁肌束帶構(gòu)成的相對(duì)狹小的右室流出道而導(dǎo)致梗阻。大約50%的HCM患者可出現(xiàn)動(dòng)力性LVOT梗阻，同時(shí)伴SAM現(xiàn)象。因此，所有HCM患者都應(yīng)檢測(cè)LVOT壓力，以早期發(fā)現(xiàn)隱匿性流出道梗阻的高?；颊遊15]?？刹捎盟幬锛ぐl(fā)試驗(yàn)（如輸注多巴酚丁胺）和運(yùn)動(dòng)激發(fā)試驗(yàn)[16]，目前推薦和提倡的方法為運(yùn)動(dòng)激發(fā)試驗(yàn)，其最符合人體生理變化，而輸注多巴酚丁胺可能出現(xiàn)假陽(yáng)性，一般不主張應(yīng)用[17]。
4 臨床表現(xiàn)
臨床癥狀及體征與年齡相關(guān)，年齡越大，癥狀、體征越多。HOCM主要臨床表現(xiàn)為：舒張功能障礙、心力衰竭、快速型心律失常、心房顫動(dòng)（發(fā)生率至少為20%，是引起栓塞的主要原因）及心源性猝死，癥狀表現(xiàn)為勞力型呼吸困難、胸痛、心悸、暈厥、猝死等。梗阻型與非梗阻型患者的臨床表現(xiàn)無(wú)明顯差異，梗阻型患者胸悶胸痛的表現(xiàn)更明顯。HOCM患者易發(fā)生多種形態(tài)的室上性心律失常、室性心動(dòng)過(guò)速、心室顫動(dòng)甚或心源性猝死，心房顫動(dòng)、心房撲動(dòng)等房性心律失常也較常見(jiàn)。猝死的主要危險(xiǎn)因素是惡性心律失常、室壁過(guò)厚、流出道階差超過(guò)50 mm Hg。多數(shù)患者可長(zhǎng)期無(wú)明顯癥狀，心源性猝死往往是HOCM患者的首次癥狀表現(xiàn)[18]。心臟收縮期雜音為HOCM的常見(jiàn)體征，以胸骨左緣明顯，向心尖部傳導(dǎo)但無(wú)頸部傳導(dǎo)，雜音強(qiáng)度與梗阻程度有關(guān)，站立時(shí)、Valsalva動(dòng)作、硝酸酯類(lèi)等增加心肌收縮力或減輕心臟負(fù)荷可使雜音增強(qiáng)，反之則雜音減弱。
5 診斷及輔助檢查
超聲心電圖（UCG）：UCG是目前診斷HOCM常用且最重要的無(wú)創(chuàng)檢查方法，敏感性和特異性較高，可直觀地判定心肌肥厚的部位和程度、心功能及流出道壓力階差，其典型的UCG改變?yōu)椋海?）室間隔非對(duì)稱(chēng)性肥厚≥15 mm，室間隔厚度/左室游離壁厚度≥1.3；（2）SAM征陽(yáng)性；（3）LVOT狹窄，一般小于20 mm；（4）主動(dòng)脈瓣收縮中期呈部分性關(guān)閉；（5）彩色多普勒血流顯像可評(píng)價(jià)左心室壓力階差、二尖瓣反流，左心室壓力階差>30 mm Hg。近年來(lái)心臟聲學(xué)造影技術(shù)的發(fā)展，提高了超聲診斷的準(zhǔn)確性，它能清晰的顯示解剖結(jié)構(gòu)、心內(nèi)膜邊界及心功能、血流信息和心肌灌注。
心臟核磁（MR）：MR可全面清晰地觀察左心室各個(gè)節(jié)段心肌肥厚的范圍及程度，可以直觀反映心室壁肥厚和室腔變窄，多數(shù)表現(xiàn)為心肌影像增強(qiáng)。對(duì)于特殊部位心肌壁肥厚和對(duì)稱(chēng)性肥厚更具有診斷價(jià)值。尤其是心尖部心肌病變，MRI優(yōu)于超聲心動(dòng)圖。
心電圖：HOCM患者的心電圖改變可早于超聲表現(xiàn)，為青年人HOCM的早期診斷提供線索。30%～50%的患者Ⅱ、Ⅲ、aVF及V4～6導(dǎo)聯(lián)上出現(xiàn)深而窄的Q波（
心內(nèi)膜心肌活檢：心肌細(xì)胞畸形肥大，排列紊亂有助于診斷。
基因檢測(cè)：基因檢測(cè)可以早期診斷，其特異性達(dá)99.9%，是肥厚型心肌病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但敏感性為50%～70%[17]。
6 治療
HOCM 的治療是一個(gè)長(zhǎng)期甚至終生的過(guò)程，治療原則是減輕LVOT梗阻，弛緩肥厚心肌，緩解癥狀，抗心律失常，預(yù)防猝死。許多HOCM患者常無(wú)重要癥狀，通常無(wú)需治療干預(yù)。對(duì)僅有輕度癥狀的患者可予以藥物控制。對(duì)藥物治療無(wú)效，且LVOT 梗阻較重的 HOCM 患者，可考慮非藥物治療。
6.1 藥物治療
主要的治療藥物包括以下幾種：（1）β受體阻滯劑。β受體阻滯劑是治療HOCM患者的一線藥物，有效率可達(dá)60%～80%。其通過(guò)減慢心率，降低心肌收縮力，減輕收縮期二尖瓣的前向運(yùn)動(dòng)，延長(zhǎng)舒張期， 延長(zhǎng)心室充盈時(shí)間，使心肌有效灌注時(shí)間延長(zhǎng)，心肌耗氧量減少，減小流出道壓差，其本身還具有抗心律失常作用。使用β受體阻滯劑從小劑量開(kāi)始，目標(biāo)心率為60 /min。（2）鈣離子通道阻滯劑。通過(guò)阻斷心肌細(xì)胞鈣離子通道 ，降低心肌收縮力，改善心肌順應(yīng)性，從而改善心室舒張功能。常用有維拉帕米、地爾硫 。與β阻滯劑合用時(shí)，二者負(fù)性肌力作用增加，可能會(huì)引起嚴(yán)重的竇性心動(dòng)過(guò)緩及房室傳導(dǎo)阻滯，故一般不推薦二者聯(lián)合應(yīng)用。（3）丙吡胺。對(duì)于不能耐受β受體阻滯劑、鈣拮抗劑的治療，已出現(xiàn)呼吸困難，運(yùn)動(dòng)受限患者，國(guó)外建議用丙吡胺，丙吡胺為Ⅰa類(lèi)抗心律失常藥物，其通過(guò)減弱心肌收縮力，提高周?chē)茏枇Χ纳菩呐K的舒張功能，還可治療HOCM并發(fā)的心律失常，其單獨(dú)使用時(shí)致心律失常作用較小。因其有較強(qiáng)的負(fù)性肌力作用，合并心力衰竭時(shí)應(yīng)慎用。西苯唑啉亦為Ⅰ類(lèi)抗心律失常藥，可改善HOCM 患者心臟舒張功能，且其抗膽堿能作用較弱，可用于治療左室中部梗阻性 HCM。另有研究結(jié)果表明，醛固酮可能是 HCM 突變基因與臨床表型之間的一座重要橋梁，醛固酮受體拮抗劑如螺內(nèi)酯等或可成為治療 HCM 的新型藥物。不推薦血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑（ACEI）、血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑（ARB），它們僅適合沒(méi)有左心室流出道梗阻的患者，出現(xiàn)明顯心功能不全、心臟擴(kuò)張的終末階段疾病時(shí)可適當(dāng)應(yīng)用。伴有梗阻和瓣膜損傷、反流的患者是感染性心內(nèi)膜炎的危險(xiǎn)人群，盡管其發(fā)病率不高，但預(yù)后差、病死率較高，對(duì)那些梗阻嚴(yán)重、瓣膜功能不全的患者應(yīng)在抗感染的基礎(chǔ)上積極手術(shù)治療，以減少死亡率。建議對(duì)流出道梗阻程度嚴(yán)重并伴有瓣膜明顯損傷的患者預(yù)防心內(nèi)膜炎。
6.2 非藥物治療
對(duì)藥物治療無(wú)效、有明顯癥狀且LVOT梗阻嚴(yán)重患者，即應(yīng)考慮非藥物治療，非藥物治療方法主要有以下幾種：
外科手術(shù)治療：對(duì)靜息流出道壓差>50 mm Hg（青少年>75～100 mm Hg），并且有明顯心功能不全者，通過(guò)切除部分肥厚心肌，解除機(jī)械梗阻，修復(fù)二尖瓣反流，可有效降低壓力階差，明顯解除或緩解心力衰竭，是有效的治療方案，但心律失常是常見(jiàn)的術(shù)后并發(fā)癥[19]。
經(jīng)皮室間隔心肌化學(xué)消融術(shù)（PTSMA）：其原理是通過(guò)導(dǎo)管注入無(wú)水酒精，閉塞冠狀動(dòng)脈的間隔支，使其支配的肥厚室間隔心肌缺血壞死，使心室流出道梗阻消失或減輕，從而改善HOCM患者的臨床癥狀[20]。該治療方法微創(chuàng)和相對(duì)安全，并發(fā)癥在不斷減少，其主要并發(fā)癥是需要永久起搏器置入的完全性房室傳導(dǎo)阻滯。其近期療效可靠，但其是否可以改善患者的長(zhǎng)期預(yù)后，是否優(yōu)于傳統(tǒng)的外科手術(shù)及DDD起搏器安置術(shù)，尚未有定論[21]。對(duì)于年齡
雙腔心臟起搏治療：對(duì)于發(fā)生急性呼吸困難、胸痛等癥狀，超聲證實(shí)靜息流出道壓力階差>30 mm Hg的患者，雙腔起搏通過(guò)改變心室收縮順序而降低壓力階差，減輕左心室流出道梗阻。尤其是老年患者療效明顯，但不推薦做為首選治療。
埋藏或自動(dòng)心臟復(fù)律除顫器（ICD）：盡管外科手術(shù)和PTSMA均可減輕HOCM患者的癥狀，提高生活質(zhì)量[22]，但仍有較高的死亡率。HOCM患者主要危險(xiǎn)因素的存在即心臟驟停（心室顫動(dòng)）存活者，未成年猝死的家族史，暈厥史，自發(fā)性持續(xù)性室性心動(dòng)過(guò)速，運(yùn)動(dòng)時(shí)低血壓，惡性基因型患者對(duì)猝死有重要的預(yù)測(cè)價(jià)值，近年來(lái)主張應(yīng)用ICD預(yù)防[23]，置入ICD能有效終止致命性室性心律失常，恢復(fù)竇性心律，提高HCM高?；颊呱媛?，是預(yù)防猝死的最有效措施。
心臟移植：終末期心衰的患者可考慮心臟移植，為治療的最后選擇，目前尚不能普遍開(kāi)展。
6.3 并發(fā)癥的治療
心律失常：心房顫動(dòng)是HOCM的重要并發(fā)癥，可觸發(fā)致命性室性心動(dòng)過(guò)速，亦可形成左心房血栓，是導(dǎo)致腦卒中的主要原因，因此，抗心律失常治療能有效的改善左心室充盈，預(yù)防猝死。胺碘酮是治療和預(yù)防HOCM患者心房顫動(dòng)復(fù)發(fā)的最有效藥物。
心力衰竭：小劑量利尿劑可減輕肺淤血癥狀，發(fā)展至終末期的患者，藥物治療應(yīng)采用標(biāo)準(zhǔn)的抗心力衰竭治療，包括利尿劑、ACEI和洋地黃治療，對(duì)于無(wú)心力衰竭的HOCM患者應(yīng)避免使用這三種藥物，因?yàn)樗鼈兛杉又豅VOT的梗阻。
目前所有的治療方法均不能根治HOCM，應(yīng)根據(jù)患者癥狀及梗阻情況實(shí)施個(gè)體化治療，選擇合理、有效、風(fēng)險(xiǎn)低的治療方案。
7 預(yù)防與展望
HCM基因診斷技術(shù)在國(guó)外已經(jīng)成熟且被廣泛應(yīng)用，對(duì)患者家族成員和懷孕患者進(jìn)行妊娠早期的基因檢測(cè)可以早期診斷，但如何預(yù)防疾病發(fā)生及基因突變對(duì)預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值仍然面臨著很大的挑戰(zhàn)。我國(guó)這方面研究工作開(kāi)展較少，需要開(kāi)展中國(guó)HCM基因突變譜的研究，進(jìn)行突變與臨床表現(xiàn)的關(guān)聯(lián)研究，探討能否通過(guò)基因突變預(yù)測(cè)患者的預(yù)后。而HOCM的遺傳及分子生物學(xué)發(fā)病機(jī)制尚處于研究階段，尚有30%以上的致病基因沒(méi)有發(fā)現(xiàn)。其病理生理及臨床表現(xiàn)復(fù)雜，進(jìn)一步的分子遺傳學(xué)研究對(duì)HOCM的早期診斷及治療有重要意義。阻止突變基因表達(dá)或校正突變基因，RNA催化技術(shù)使突變基因功能缺失，可能是一種理想的治療選擇?；蛑委熡型ㄟ^(guò)抑制基因突變，使其編碼的蛋白失活而成為HOCM的根治手段。
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中圖分類(lèi)號(hào)：R541.7文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1009_816X（2014）06_0500_03
doi：10.3969/j.issn.1009_816x.2014.06.20短QT綜合征（short QT syndrome，SQTs）是一種心肌離子通道病，伴/不伴有心房顫動(dòng)、室性心動(dòng)過(guò)速、心室顫動(dòng)、暈厥、心源性猝死（Sudden Cardiac Death SCD）。1990年Kontny等[1]首先報(bào)道一例反復(fù)心室顫動(dòng)伴暈厥患者，心室顫動(dòng)停止后心電圖QT間期明顯縮短。1993年Algra等[2]對(duì)動(dòng)態(tài)心電圖回顧性分析時(shí)發(fā)現(xiàn)，QT間期縮短增加猝死風(fēng)險(xiǎn)。2000年Gussak等[3]報(bào)道1例無(wú)器質(zhì)性心臟病青年男性，發(fā)生心源性猝死，有特征性體表心電圖QT間期縮短，胸導(dǎo)聯(lián)V2、V3有時(shí)可見(jiàn)T波電交替，短QT綜合征逐漸為人們認(rèn)識(shí)。2003年Gaita等[4]將其定義為常染色體遺傳疾病，正式命名為SQTs。迄今為止報(bào)道病例約為100例左右。一項(xiàng)回顧性研究（61例）顯示：75%患者為男性，其平均發(fā)病年齡為21歲，33%患者發(fā)生心源性猝死，18%患者存在心房顫動(dòng)[5]。女性患病率相對(duì)較低的原因可能在于：雌激素對(duì)Q_T間期的延長(zhǎng)作用[6]。但女性患者并非低危人群，因?yàn)镾QTs的女性患者發(fā)生心源性猝死的風(fēng)險(xiǎn)等同于男性[7]。本文對(duì)SQTs診治進(jìn)展作一綜述。
1基因分型從分子遺傳學(xué)的角度研究，目前已有5種與SQTs致病相關(guān)的基因被發(fā)現(xiàn)：KCNH2，KCNQ1，KCNJ2，CACNA1C和CACNB2b。SQTs根據(jù)以上5種基因突變分為5型。但大多數(shù)患者并不能進(jìn)行基因分類(lèi)。KCNH2是第一個(gè)發(fā)現(xiàn)的致病基因，最常見(jiàn)的是N588K突變導(dǎo)致Ikr（慢速激活延遲整流鉀電流）通道電流增加從而導(dǎo)致動(dòng)作電位復(fù)極化第2和3期縮短。隨后編碼鉀離子通道相關(guān)的KCNQ1和KCNJ2被發(fā)現(xiàn)。CACNA1C和CACNB2b分別編碼L型鈣通道的al和8亞單位，功能分析顯示突變通道功能喪失，尤其是CACNAIC的A39V突變是由于突變通道功能轉(zhuǎn)運(yùn)缺失而導(dǎo)致內(nèi)向鈣離子流降低，且突發(fā)的基因還引起胸前導(dǎo)聯(lián)心電圖ST段上抬（短QT間期并Brugada綜合征）。
2臨床表現(xiàn)
2.1心電圖特征：SQTs的心電圖除了QT間期縮短外，還有T波高尖、T波峰―末間期（Tp_e）延長(zhǎng)。一般認(rèn)為T(mén)p_e間期延長(zhǎng)是因?yàn)樾募?fù)極化的離散度增大所致，因而也是SQTs患者常伴室性心動(dòng)過(guò)速或心室顫動(dòng)和心房顫動(dòng)等心律失常的機(jī)制之一。SQTs的心電圖表現(xiàn)可分為4類(lèi)：①ST段與T波均縮短，同時(shí)有T波高尖，易發(fā)房性和室性心律失常；②以ST段縮短為主，T波縮短不明顯，以室性心律失常為主要表現(xiàn)；③ST段改變不明顯，T波高尖和縮短為主，T波下降支明顯陡直，以室性心律失常為主要表現(xiàn)；④ST段抬高，V1_3導(dǎo)聯(lián)出現(xiàn)I型Brugada波，T波高尖，以室性心律失常為主要表現(xiàn)。
2.2臨床表現(xiàn)：由其并發(fā)心律失常的類(lèi)型及伴隨的其他系統(tǒng)的癥狀決定。輕者可無(wú)癥狀，或有輕度心悸、頭暈，重癥患者可出現(xiàn)暈厥、猝死。心房顫動(dòng)可能是SQTs首發(fā)表現(xiàn)，對(duì)于年輕的孤立性心房顫動(dòng)，應(yīng)提高警惕。
[14]對(duì)53例SQTs患者中14例SQT1予以口服奎尼丁治療后，隨訪6～8年后發(fā)現(xiàn)未治療組每年心律失常發(fā)病率為4.9%，藥物組未有發(fā)作，且其藥物耐受性可，僅有9%患者因藥物副作用中斷治療。對(duì)于不能接受ICD治療者（如兒童），奎尼丁優(yōu)先選擇。此外，除了SQT1外D_索他洛爾對(duì)其它型SQTs都有效。另外，射頻消融對(duì)于SQTs引起的室性心動(dòng)過(guò)速/心室顫動(dòng)有一定療效[15]，但報(bào)道例數(shù)較少，還需進(jìn)一觀察。對(duì)于無(wú)癥狀患者的管理最為關(guān)鍵，如何識(shí)別其中高?；颊?，降低心源性猝死發(fā)生率亟待解決。
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【關(guān)鍵詞】 基因診斷； 2型糖尿?。?易感基因
Advances Researches on Gene Diagnosis of Type 2 Diabetes Mellitus/WU Bin，WU Keng.//Medical Innovation of China，2015，12（34）：150-153
【Abstract】 Type 2 diabetes mellitus is a typical metabolic disease，genetic factors are the main causes of the disease，traditional diagnostic methods are easy to cause missed diagnosis， misdiagnosis and thus delay the best treatment time.Genetic diagnosis is a method of using molecular genetic techniques to analyze the mutation of a gene in DNA or RNA levels and to diagnose certain diseases.It is widely used because its advantages of direct diagnosis， early diagnosis， with high specificity and sensitivity， which make up for the shortcomings of traditional diagnosis. So， it is quite essential and meaningful that we make diagnosis and treatment of diabetes from the perspective of gene.
【Key words】 Gene diagnosis； Type 2 diabetes mellitus； Susceptible gene
First-author’s address：Affiliated Hospital of Guangdong Medical College，Zhanjiang 524001，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.34.050
2型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus，T2DM）是一組由多病因引起的以慢性高血糖為特征的代謝性疾病，臨床表現(xiàn)包括口渴、多飲、多食、多尿、消瘦等，主要是由于胰島素分泌和/或作用缺陷所引起。T2DM的發(fā)展是多因素、多基因參與的過(guò)程，其致病機(jī)制復(fù)雜，包括遺傳因素和環(huán)境因素，現(xiàn)有的診斷標(biāo)準(zhǔn)并不能從遺傳學(xué)的角度解釋病因及發(fā)病機(jī)制，難以從基因的整體表達(dá)譜全面地觀察2型糖尿病發(fā)病時(shí)基因的反應(yīng)模式，并且具有一定的滯后性，因而研究起來(lái)費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、進(jìn)度緩慢。然而，越來(lái)越多的研究表明，遺傳因素在T2DM的發(fā)病過(guò)程中占據(jù)更為主要的地位，全基因組關(guān)聯(lián)分析（Genome-wide association study，GWAS）證實(shí)，T2DM有眾多的遺傳易感基因[1-2]。因此，基因診斷就顯得尤為重要，從基因角度分析2型糖尿病，對(duì)2型糖尿病的診治將會(huì)提供更多的幫助。本文就基因診斷在2型糖尿病中的研究進(jìn)展作一綜述。
1 基因診斷的研究現(xiàn)狀
1.1 基因診斷概述 基因診斷是一項(xiàng)在重組DNA技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的應(yīng)用技術(shù)，其檢測(cè)原理是對(duì)受檢者的某一特定基因（DNA）和/或其轉(zhuǎn)錄物（RNA）進(jìn)行分析和檢測(cè)，進(jìn)而對(duì)相應(yīng)的疾病做出診斷，從基因水平闡明疾病的病因所在。目前，基因診斷技術(shù)已經(jīng)廣泛的被應(yīng)用于諸多領(lǐng)域[3]?；诓煌臋z測(cè)內(nèi)容，基因診斷可以分為DNA診斷和RNA診斷兩部分。前者主要分析基因的結(jié)構(gòu)如DNA序列的缺失、插入、點(diǎn)突變等；后者側(cè)重分析基因的功能，如mRNA量的變化、外顯子變異以及間接加工缺陷等。按照檢測(cè)策略，基因診斷也可以分為兩大類(lèi)：一類(lèi)為直接基因診斷，指直接對(duì)致病基因本身進(jìn)行檢查。通常應(yīng)用基因本身或鄰近的DNA序列作為探針，也可以利用PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行基因探查，以檢測(cè)有無(wú)點(diǎn)突變、缺失等異常并且判斷其性質(zhì)；另一類(lèi)為間接基因診斷，主要用于當(dāng)基因結(jié)構(gòu)不清、復(fù)雜或突變過(guò)多而導(dǎo)致無(wú)法一一檢測(cè)時(shí)，對(duì)被檢者及其家系進(jìn)行遺傳連鎖分析，通過(guò)鑒定遺傳標(biāo)記的存在，進(jìn)而確定患者是否獲得帶有致病基因的染色體[4]。
1.2 基因診斷的研究技術(shù)及相關(guān)技術(shù) （1）Southern blot和Nouthern blot：檢測(cè)特定的DNA、RNA主要的核酸雜交技術(shù)有Southern blot和Nouthern blot，該技術(shù)主要有3個(gè)步驟：核酸的分離與純化、探針的制備和分子雜交。（2）聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）及相關(guān)技術(shù)：PCR是一種對(duì)指定的DN段在體外進(jìn)行快速擴(kuò)增的技術(shù)方法。在PCR基礎(chǔ)上，進(jìn)一步發(fā)展了包括多重PCR（multiplex PCR）、實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）、單鏈構(gòu)象多態(tài)性PCR（Single-Strand Conformation Polymorphism，SSCP）、序列特異引物PCR（Sequence Specific Primer，PCR-SSP）、逆轉(zhuǎn)錄PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）等。（3）限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（Restriction Fragment Length Polymorphism，RFLP）：RFLP是第一代DNA分子標(biāo)記技術(shù)，被用于基因組遺傳圖譜的構(gòu)建、基因的定位以及生物進(jìn)化和分類(lèi)等眾多領(lǐng)域的研究。利用同一種限制性?xún)?nèi)切酶切割不同物種DNA序列時(shí)，可獲得不同長(zhǎng)度、大小、數(shù)量的限制性酶切片段，再將這些片段電泳、轉(zhuǎn)膜、變性，并且與標(biāo)記過(guò)的探針進(jìn)行雜交、洗膜，便可分析其多態(tài)性結(jié)果。（4）變性高效液相色譜分析（Denaturing High Performance Liquid Chromatography，DHPLC）：DHPLC是一項(xiàng)新的雜合雙鏈突變檢測(cè)技術(shù)，能自動(dòng)檢測(cè)單堿基替代以及小片段核苷酸的插入或缺失，可檢測(cè)基因的變異情況。（5）基因芯片技術(shù)：基因芯片是通過(guò)微量點(diǎn)樣技術(shù)等方法，對(duì)DNA樣品的序列信息進(jìn)行高效的解讀和分析，從而對(duì)基因序列及其功能進(jìn)行大規(guī)模高通量的研究，迅速而準(zhǔn)確的解讀遺傳信息。（6）新一代基因測(cè)序技術(shù)：新一代基因測(cè)序技術(shù)是一種和基因芯片技術(shù)互相補(bǔ)充的新的高通量測(cè)序方法，通常是指一個(gè)技術(shù)群，不同的新一代基因測(cè)序技術(shù)，在原理上存在較大的差別。主要包括：全基因組測(cè)序（Whole-Genome Sequencing，WGS）、全外顯子組測(cè)序（Whole-Exome Sequencing，WES）和目標(biāo)區(qū)域測(cè)序（Targeted Regions Sequencing，TRS）等。（7）熒光原位雜交技術(shù)（Fluorescence in Situ Hybridization，F(xiàn)ISH）：FISH是一種重要的非放射性原位雜交技術(shù)，利用非放射性物質(zhì)（如生物素、地高辛）標(biāo)記探針，按照堿基配對(duì)原則進(jìn)行雜交，借助熒光素偶聯(lián)的抗原抗體檢測(cè)系統(tǒng)，在鏡下對(duì)組織、細(xì)胞及染色體DNA或RNA進(jìn)行定性、定量或相對(duì)定位分析。
2 2型糖尿病基因診斷的研究進(jìn)展
2.1 單基因突變型糖尿病 單基因突變型糖尿病約占所有糖尿病患者的2%～5%，這種類(lèi)型糖尿病的外顯率（即某人攜帶突變基因并發(fā)展成糖尿病的可能性）很高，為研究其發(fā)病機(jī)制提供了重要線索。（1）青少年發(fā)病的成人型糖尿病（Maturity-Onset Diabetes of the Young，MODY）：MODY是單基因突變型糖尿病首先發(fā)現(xiàn)的類(lèi)型，是一組遺傳異質(zhì)性的臨床疾病，其共同特征包括存在非酮癥糖尿病、常染色體顯性遺傳模式、胰島β細(xì)胞功能缺陷。根據(jù)突變基因可分為MODY1（HNF4A）、MODY2（GCK）、MODY3（TCF1）、MODY4（IPF1）、MODY5（TCF2）、MODY6（NeuroD1）、MODY7（KLF11）、MODY8（CEL），此外還包括由酶參與底物代謝所引起的突變型MODY及轉(zhuǎn)錄因子型MODY[5]。（2）線粒體糖尿?。∕itochondrial Diabetes）：線粒體糖尿病是母系遺傳性糖尿病，常伴有輕中度神經(jīng)性耳聾，常由編碼亮氨酸的tRNA的A3243G點(diǎn)突變引起。研究發(fā)現(xiàn)，線粒體基因突變可導(dǎo)致胰島素的利用障礙[6-7]。（3）脂肪萎縮性糖尿?。褐疚s性糖尿病常與缺乏或缺少脂肪組織、重度胰島素抵抗、高脂血癥、脂肪肝等有關(guān)。脂肪萎縮性糖尿病有若干類(lèi)型。其中，部分脂肪萎縮類(lèi)型是由核纖層蛋白基因A/C（LMNA）突變引起的一種常染色體為主要形式的遺傳病。這類(lèi)患者通常有過(guò)多的脂肪堆積在顏面和上半身，然而在軀干和下肢的脂肪含量卻逐漸減少。另外，小鼠胸腺瘤癌基因（AKT2）的突變參與了胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，鋅金屬蛋白酶（ZMPSTE24）參與了脂肪萎縮的過(guò)程，也被認(rèn)為引起部分脂肪萎縮性糖尿病的原因之一[8]。（4）過(guò)氧化物酶體增生物激活受體（PPARγ）基因突變：PPARγ是核受體的PPAR的一種亞型。它是調(diào)控脂質(zhì)、葡萄糖穩(wěn)態(tài)和細(xì)胞分化的重要轉(zhuǎn)錄因子，在脂肪組織中高度表達(dá)，也在胰島β細(xì)胞中表達(dá)。其與配體結(jié)合后和維甲酸X受體形成異源二聚體，結(jié)合特定的DNA，起到轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。PPARG基因突變可導(dǎo)致常染色體顯性脂肪萎縮綜合征并伴有早期糖尿病的癥狀。例如，Barroso與其同事在對(duì)重度胰島素抵抗和早期糖尿病的研究中，發(fā)現(xiàn)并報(bào)道了兩個(gè)顯性負(fù)突變基因（p467l和v290m），其突變體具有降低轉(zhuǎn)錄并抑制野生型PPARγ的作用。在對(duì)加拿大的一個(gè)患有家族性脂肪代謝障礙的家族的研究中發(fā)現(xiàn)，位于PPARγ配體結(jié)合域的雜合基因P388L存在突變[9-12]。
2.2 多基因突變型糖尿病 與單基因突變型糖尿病相比，多基因突變型糖尿病更為常見(jiàn)，過(guò)去的二三十年中，筆者在鑒定2型糖尿病基因突變的領(lǐng)域中付諸了巨大努力。候選基因分析法在三種基因（PPARG，KCNJ11，WFS1）中成功鑒定出增加2型糖尿病風(fēng)險(xiǎn)的常見(jiàn)變異位點(diǎn)。全基因組連鎖分析在多個(gè)患有2型糖尿病的家族中鑒定出CAPN10和TCF7L2等基因。近期，全基因組關(guān)聯(lián)分析法（GWAS）對(duì)大量的單核苷酸多態(tài)性進(jìn)行基因分型，成功鑒定出更多的與2型糖尿病相關(guān)的基因或染色點(diǎn)。目前，GWAS已成功鑒定出14個(gè)基因或位點(diǎn)，這些基因或位點(diǎn)的序列變異在人群中很常見(jiàn)，并且每個(gè)基因或位點(diǎn)變異都可增加2型糖尿病的患病風(fēng)險(xiǎn)。
2.2.1 候選基因關(guān)聯(lián)分析法 目前已研究出上百個(gè)候選基因，其中可高度復(fù)制的候選基因有以下幾種。（1）內(nèi)向整流鉀通道亞家族11（KCNJ11）：ATP敏感性鉀通道（KATP）在胰島β細(xì)胞表達(dá)并且是調(diào)節(jié)胰島素分泌的關(guān)鍵因子。它由一個(gè)內(nèi)向整流鉀通道Kir 6.2與磺酰脲類(lèi)受體（由ABCC8編碼）組成，Kir 6.2是染色體11p15.1上的KCNJ11基因編碼，KCNJ11突變屬罕見(jiàn)的激活突變。谷氨酸（E）的一個(gè)常見(jiàn)的錯(cuò)義突變ABCC8取代賴(lài)氨酸（K）的23位點(diǎn)即（E23K）常被認(rèn)為與2型糖尿病有關(guān)。有證據(jù)顯示，攜帶K23基因的患者有很大的可能性對(duì)磺脲類(lèi)藥物產(chǎn)生繼發(fā)性失效[10-11]。（2）過(guò)氧化物酶體增生物激活受體（PPARγ）：PPARG的一個(gè)常見(jiàn)變異是脯氨酸被丙氨酸在12密碼子位點(diǎn)替換（P12A），丙氨酸的等位基因頻率在白種人中很高（0.11-0.19），而在非洲裔美國(guó)人中卻相對(duì)較低（0.02）。有研究表明，PPARG的丙氨酸12位點(diǎn)與降低2型糖尿病風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)，而脯氨酸12位點(diǎn)增加了胰島素抵抗及2型糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)[12]。（3）其他候選基因：WFS1突變導(dǎo)致的Wolfarin氏綜合征，可引起尿崩癥、糖尿病、視神經(jīng)萎縮和耳聾；HNF4A突變可引起MODY1等。
2.2.2 全基因組連鎖分析法 （1）轉(zhuǎn)錄因子7類(lèi)似物2（TCF7L2）：利用全基因組連鎖分析法精細(xì)定位標(biāo)記后，發(fā)現(xiàn)在染色體10q25上，TCF7L2的四核苷酸DG10S478與T2DM的發(fā)生密切相關(guān)，其中TCF7L2是T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子家族的成員之一。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)位于內(nèi)含子3上的rs7903146是一個(gè)高度可復(fù)制的變異位點(diǎn)，rs7903146等位基因增加了約1.4倍的2型糖尿病患病風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)，TCF7L2在信號(hào)通路（WNT）中發(fā)揮重要作用，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖和變異，在腸內(nèi)分泌細(xì)胞，信號(hào)通路通過(guò)TCF7L2影響胰高素血糖樣肽-1（GLP-1）的分泌[13]。（2）鈣蛋白酶10（CAPN10）：通過(guò)全基因組連鎖分析法，在CAPN10上鑒定出3個(gè)常見(jiàn)的可增加2型糖尿病患病風(fēng)險(xiǎn)的變異位點(diǎn)。CAPN10編碼鈣調(diào)節(jié)的半胱氨酸蛋白酶，并在多個(gè)組織廣泛表達(dá)。有研究證實(shí)，該基因上的變異與2型糖尿病有關(guān)。然而，CAPN10是如何影響2型糖尿病的患病風(fēng)險(xiǎn)還不得而知，但鑒于此酶的廣泛表達(dá)，其可能是通過(guò)影響胰島素抵抗和胰島素分泌發(fā)揮作用[14]。
2.2.3 全基因組關(guān)聯(lián)分析法（GWAS） Sladek和同事首次報(bào)道了一個(gè)存在于染色體8q24.11上的基因SLC30A8，其可增加2型糖尿病患病風(fēng)險(xiǎn)，還可編碼鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體8（ZNT8），而ZTN8主要表達(dá)于胰島β細(xì)胞，這一發(fā)現(xiàn)隨后也在其他的GWAS研究中被證實(shí)[15]。GWAS研究證實(shí)，葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白基因GCKR與空腹血清甘油三酯水平有關(guān)，位于GCKR上的一個(gè)突變基因P336L與甘油三酯水平、降低空腹血糖水平及降低2型糖尿病患病風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)。有研究表明，位于染色體3q27的胰島素樣生長(zhǎng)因子2結(jié)合蛋白2（IGF2BP2）的基因突變與2型糖尿病有關(guān)，可增加2型糖尿病的患病風(fēng)險(xiǎn)[16]。FTO是一個(gè)與脂肪量和肥胖相關(guān)的基因，位于染色體16q12，其在2型糖尿病患病風(fēng)險(xiǎn)方面的作用基于身體質(zhì)量指數(shù)的高低[17]。最近，GWAS研究鑒定出一個(gè)新的亞洲人口的2型糖尿病易感基因KCNQ1，位于染色體11p15.5，主要表達(dá)于心臟，少量表達(dá)在其他組織如胰腺、肝臟和脂肪組織等，其在增加2型糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)的同時(shí)還可引起長(zhǎng)QT間期綜合征[18]。其他一些GWAS研究也分別證實(shí)了一些與2型糖尿病有關(guān)的基因，包括CDKAL1、CDKN2A、CDKN2B、HHEX、KIF11、IDE等[19-20]。
3 討論
自從1993以來(lái)，筆者對(duì)于糖尿病的遺傳基礎(chǔ)的認(rèn)識(shí)有了顯著進(jìn)步，一些在人群中相對(duì)罕見(jiàn)的包含突變點(diǎn)的基因，在基因表型上起重要作用，可以引起單基因型糖尿病。攜帶這些突變基因的人群有很高的糖尿病發(fā)病率。然而，這類(lèi)人群也僅占糖尿病總?cè)藬?shù)的一小部分，這些基因的發(fā)現(xiàn)揭示了葡萄糖穩(wěn)態(tài)新的通路和機(jī)制。
目前GWAS芯片對(duì)2型糖尿病基因變異的檢測(cè)，多數(shù)局限于白種人。未來(lái)，GWAS、外顯子組和全基因組測(cè)序研究還需要兼顧分析其他人群和其他種類(lèi)的遺傳變異。隨著高通量、低成本以及樣本量的增加，人類(lèi)在解開(kāi)2型糖尿病復(fù)雜的遺傳結(jié)構(gòu)的進(jìn)程中將會(huì)呈現(xiàn)前所未有的飛越。
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關(guān)鍵詞：生物技術(shù)；南瓜；育種
南瓜為葫蘆科（ Cucurbitaceae） 南瓜屬（ Cucur bita ）中的1 年生草本植物， 起源于美洲大陸， 栽培種及野生近緣種共有27 個(gè)[1]。南瓜栽培種有5個(gè)， 而我國(guó)栽培的主要有3 個(gè)： 南瓜（ Cucur bita moschata D. ） 又名中國(guó)南瓜， 筍瓜（ C. maxima D. ） 又名印度南瓜， 西葫蘆（ C. pepo L. ） 又名美洲南瓜[2]。南瓜在我國(guó)有悠久的栽培歷史， 可作糧食、蔬菜、籽用、觀賞和飼料等之用。南瓜還可以入藥， 飲食須知、本草綱目等古籍對(duì)南瓜也有記載。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展， 人們對(duì)南瓜又有了更深的了解， 南瓜含有豐富的維生素A、維生素C、胡蘿卜素、糖類(lèi)、淀粉、鈣質(zhì)等， 有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和較高的醫(yī)療保健作用[3]。
隨著生產(chǎn)的發(fā)展，傳統(tǒng)的育種技術(shù)已不能滿足人們的需要，因此在南瓜育種中運(yùn)用生物技術(shù)逐漸被大家所重視。作為一種高新技術(shù)， 生物技術(shù)是分子遺傳學(xué)、生物化學(xué)、微生物學(xué)等基礎(chǔ)學(xué)科發(fā)展的產(chǎn)物，在整個(gè)科學(xué)領(lǐng)域中占據(jù)了越來(lái)越顯著的地位。作為世界新技術(shù)革命的重要組成部分， 生物技術(shù)已經(jīng)成為人類(lèi)徹底認(rèn)識(shí)和改造自然界， 克服人類(lèi)自身所面臨的人口膨脹、糧食短缺、環(huán)境污染、疾病危害、能源資源匱乏等一系列重大問(wèn)題的有效手段和工具[4]，下面筆者從幾方面來(lái)論述。
1組織培養(yǎng)技術(shù)
1.1離體快繁和器官再生研究
器官離體再生是植物組織培養(yǎng)的重要內(nèi)容，在黃瓜、西瓜、甜瓜、葫蘆等作物上非常成功，但在南瓜方面則困難較大，進(jìn)展一直緩慢。從目前的研究結(jié)果來(lái)看，影響南瓜離體快繁和器官再生的因素主要有以下幾個(gè)方面：
（1）就目前的情況看，大多數(shù)的南瓜均成功進(jìn)行了組織培養(yǎng)和器官再生，只有少數(shù)沒(méi)有成功，其原因估計(jì)與選用試材的基因有關(guān)。
（2）在組織培養(yǎng)和器官再生的過(guò)程中，培養(yǎng)基起關(guān)鍵作用。培養(yǎng)基的重點(diǎn)在配方上，一般來(lái)說(shuō)是在現(xiàn)有的成熟培養(yǎng)基配方的基礎(chǔ)上，添加一定量的激素，其中6-BA使用頻率最高，誘導(dǎo)器官再生的有效范圍在1.0～6.0 mg/L之間，在西葫蘆離體培養(yǎng)的花上，KT1.0 mg/L為最優(yōu)的激素配方[5]。含量在0.05～1.0 mg/L之間的IAA、NAA、IBA也有應(yīng)用。
（3）外植體的苗齡和大小也影響著器官再生的頻率。在南瓜中，剛轉(zhuǎn)綠的南瓜子葉是誘導(dǎo)愈傷的最適外植體[6]。但對(duì)于西葫蘆1片真葉期幼苗上的子葉為外植體最為適合[7]。筍瓜則是以4 d的子葉為最好[8]；趙建萍建立一套子葉高頻率誘導(dǎo)再生芽的程序，為遺傳轉(zhuǎn)化研究打下了基礎(chǔ)[8]。
（4）在組織培養(yǎng)中褐化是大家常遇到的現(xiàn)象，其對(duì)西葫蘆的組織培養(yǎng)的影響很大，但有關(guān)的原因少見(jiàn)報(bào)道，其原因還要進(jìn)一步研究下去。
1.2組織培養(yǎng)獲得單倍體
單倍體在其他植物上的研究已經(jīng)深入，但在南瓜上的研究報(bào)道很少，國(guó)外學(xué)者利用被射線輻照的花粉進(jìn)行受精，獲得了西葫蘆的單倍體胚和植株。研究表明，γ射線的劑量、基因型、胚胎發(fā)育時(shí)期等因素對(duì)植株再生有著重要影響。25 Gy和50 Gy的γ-射線對(duì)孤雌生殖具有較好的誘導(dǎo)效應(yīng)；雖然發(fā)育成各個(gè)時(shí)期的胚胎都能形成單倍體植株，但只有53.8%魚(yú)雷胚和3.1%心型胚可以發(fā)育成單倍體植株，與其他葫蘆科植物相比還處于很低的水平[9]。
胚胎挽救技術(shù)在許多作物上進(jìn)行了成功的應(yīng)用，是一條很有前途的育種途徑。把南瓜與西葫蘆的有性雜交后代進(jìn)行培養(yǎng)，其中一個(gè)品種的南瓜雜種，沒(méi)有培養(yǎng)成功，但另一個(gè)品種duda成功了，雜種后代表現(xiàn)可育，取得了成功的經(jīng)驗(yàn)[10]，為南瓜育種開(kāi)創(chuàng)了一條新的思路。
1.3細(xì)胞與原生質(zhì)體培養(yǎng)
原生質(zhì)體的培養(yǎng)與融合的研究在南瓜上較少。有學(xué)者采用電融合技術(shù)對(duì)黃瓜和黑籽南瓜的子葉原生質(zhì)體進(jìn)行了融合，并對(duì)電場(chǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化，得到了融合細(xì)胞的愈傷組織，但沒(méi)能得到再生植株[11]，估計(jì)與材料的基因，培養(yǎng)基的配方，取材的時(shí)間、部位有關(guān)，可喜的是張興國(guó)等開(kāi)展了黃瓜與南瓜原生質(zhì)體融合的研究，獲得了體細(xì)胞雜種愈傷組織[12]，為南瓜育種引進(jìn)新的育種資源。
2分子育種研究
2.1基因資源的研究
進(jìn)行分子生物學(xué)研究首先要分析基因組的大小。對(duì)南瓜屬11個(gè)種的材料的研究表明墨西哥南瓜種內(nèi)差異較大，西葫蘆較小。雜交后代的基因組大小與親本具有明顯差異，這有利于種間雜交后代的早期檢測(cè)[13]。
2.2基因的克隆
基因的克隆是基因工程重要的組成部分，目前報(bào)道已克隆了抗冷性相關(guān)的基因―甘油-3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶基因，提高了黑子南瓜的抗冷性 [14]，還得到了CAT酶基因[15]，小西葫蘆的（CpCPK1）基因[16]。從筍瓜真葉的cDNA文庫(kù)中，克隆了單拷貝的Ⅲ型幾丁質(zhì)酶基因[17]。這些都為以后的轉(zhuǎn)基因奠定了基礎(chǔ)。采用基因組DNA 步移法克隆了南瓜韌皮部蛋白2（PP2）基因啟動(dòng)因子的序列，得到的轉(zhuǎn)基因植株在韌皮部組織特異性高效表達(dá)GUS[18]。
2.3分子標(biāo)記技術(shù)
蔬菜育種的常規(guī)選擇方法一般分為兩種，即直接選擇和間接選擇。直接選擇的優(yōu)點(diǎn)是直觀、簡(jiǎn)單，但對(duì)數(shù)量性狀和一些易受環(huán)境影響的質(zhì)量性狀往往難以奏效。間接選擇是通過(guò)與目標(biāo)基因連鎖的、易于識(shí)別的形態(tài)標(biāo)記，對(duì)目標(biāo)性狀進(jìn)行相關(guān)選擇。常規(guī)育種常用的形態(tài)標(biāo)記、生化標(biāo)記盡管在育種上發(fā)揮了重要作用，但由于其數(shù)量有限等局限性，限制了它們的進(jìn)一步應(yīng)用。分子標(biāo)記直接反應(yīng)植物基因組DNA間的差異，不受環(huán)境、季節(jié)等限制，而且具有數(shù)量多、多態(tài)性高等優(yōu)點(diǎn)，因此在育種上有著廣泛的應(yīng)用前景。目前，分子標(biāo)記主要包括RFLP、RAPD、AFLP、SSR、SCAR、STS等，主要應(yīng)用于蔬菜遺傳多樣性分析、轉(zhuǎn)基因作物后代的選擇、育種中目標(biāo)質(zhì)量性狀和數(shù)量性狀（QTL）的篩選、品種純度鑒定等方面。相信隨著分子標(biāo)記輔助育種選擇體系的建立和應(yīng)用，將大大加速作物育種進(jìn)程，為人類(lèi)創(chuàng)造出更優(yōu)良的品種[19]。分子標(biāo)記技術(shù)在南瓜類(lèi)作物上應(yīng)用的報(bào)告較多，有報(bào)道，運(yùn)用多種標(biāo)記技術(shù)對(duì)南瓜屬的材料進(jìn)行了分析，結(jié)果與同工酶為基礎(chǔ)的分類(lèi)結(jié)果一致[20]。
在我國(guó)，山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜研究所的李海真等用RAPD技術(shù)探討了南瓜屬3個(gè)栽培種的親緣關(guān)系[21]，周輝等對(duì)影響南瓜RAPD反應(yīng)體系穩(wěn)定性和重復(fù)性的條件進(jìn)行了研究，為南瓜分子標(biāo)記輔助育種打下了基礎(chǔ)[22]。
2.4轉(zhuǎn)基因方面的研究
據(jù)報(bào)道，目前南瓜轉(zhuǎn)基因技術(shù)多采用農(nóng)桿菌法，在西葫蘆上也有采用基因槍法成功的例子。在南瓜上轉(zhuǎn)育的主要是有抗病毒特性的病毒外殼蛋白（CP）基因。將西葫蘆花葉病毒甜瓜種的兩個(gè)CP基因轉(zhuǎn)入西葫蘆也已成功[23]。有人曾擔(dān)心CP基因的安全性問(wèn)題，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明是安全的。另外同許多的作物一樣轉(zhuǎn)基因南瓜安全性評(píng)價(jià)方法也正在建立[24]，相信對(duì)今后這方面的研究會(huì)有促進(jìn)作用。
3展望
生物技術(shù)是一項(xiàng)新興的技術(shù)，人們利用它可以培育出以前無(wú)法想象的品種來(lái)，不過(guò)這項(xiàng)技術(shù)也有它不利的一面。因?yàn)樵谑褂弥?，人們往往將不利于生產(chǎn)生活的品種淘汰。這樣一來(lái)就丟失了很多種質(zhì)資源，那樣以后選擇的范圍將很窄。因此，在使用生物技術(shù)的同時(shí)，要把它與傳統(tǒng)的育種技術(shù)結(jié)合，揚(yáng)長(zhǎng)避短，為我們的生活服務(wù)。
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1 自殺相關(guān)基因
很多研究結(jié)果說(shuō)明自殺行為具有遺傳傾向，從地域水平來(lái)講，某些有著不同政治文化背景的國(guó)家卻有著同樣高的自殺率[5]。從家庭水平來(lái)看，具有自殺病史的家庭成員更具有自殺的危險(xiǎn)[6]；另外，對(duì)雙生子和寄養(yǎng)子的研究表明，自殺行為具有家族聚集特征[7]。研究表明，5羥色胺能（5-HT）、去甲腎上腺能（NA）以及多巴胺神經(jīng)遞質(zhì)（DA）在自殺行為中扮演重要角色，參與調(diào)節(jié)這些神經(jīng)遞質(zhì)的基因也成了研究的重點(diǎn)[8-10] 。目前發(fā)現(xiàn)的與自殺相關(guān)的基因包括色胺酸羥化酶基因、5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體基因、單胺氧化酶基因、多巴胺受體2和4基因、兒茶酚胺氧位甲基轉(zhuǎn)移酶基因等。最近的研究涉及到調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)代謝方面的因素，兒茶酚胺氧位甲基轉(zhuǎn)移酶（COMT）作為參與兒茶酚胺降解的主要酶，COMT基因成為新的自殺候選基因。本研究就COMT基因與自殺行為的近期研究進(jìn)展做簡(jiǎn)要綜述。
2 COMT與自殺行為
COMT是多巴胺代謝過(guò)程中的重要調(diào)節(jié)酶，其編碼基因位置在22q 11．2[11]，有6個(gè)外顯子，2個(gè)啟動(dòng)子和2個(gè)開(kāi)放閱讀框架（ORFs），短的ORF編碼可溶性的COMT形式(S-COMT)，長(zhǎng)的ORF編碼S-COMT和膜結(jié)合的COMT (MB-COMT)。MB-COMT形式主要在腦部，可存在于許多區(qū)域，如皮質(zhì)前沿和基底神經(jīng)中樞[12]。在S-COMT的108位密碼子和MB-COMT的158位密碼子的單核苷酸替代 (G-A) ，可產(chǎn)生纈氨酸到甲亮氨酸的替換，導(dǎo)致COMT 活性出現(xiàn)3～4倍的差異。Met (158/108) 由低活性編碼（L等位基因），而Val（158/108）由高活性編碼（H等位基因）[12-13]。一些研究發(fā)現(xiàn)，自殺與兒茶酚胺能神經(jīng)傳遞的功能失常有關(guān)，而COMT因其在兒茶酚胺代謝中的作用也被發(fā)現(xiàn)與多種精神紊亂疾病相關(guān)。
Rujescu等[14]對(duì)149位德國(guó)自殺未遂者和328名德國(guó)健康對(duì)照者的COMT多態(tài)性研究發(fā)現(xiàn)，在等位基因/基因型上兩組沒(méi)有差異；然而低活性L等位基因和基因型頻率在暴力自殺未遂者較高，LL攜帶者更多地表現(xiàn)為外向易怒個(gè)性，而HH攜帶者則更多表達(dá)為內(nèi)向個(gè)性，提示COMT基因中的功能多態(tài)性可能參與自殺未遂者的表型。Ono等[15]對(duì)163例自殺死亡患者的研究發(fā)現(xiàn)，在男性患者中COMT 158Val/Met的基因型分布與對(duì)照組相比具有明顯的差異，高活性的COMT Val/Val基因型頻率在自殺男性患者中明顯偏低，而在女性自殺患者中并無(wú)此差異。筆者認(rèn)為Val/Val基因型在男性中是一個(gè)抑制自殺的保護(hù)性基因。Nolan等[16]對(duì)94例芬蘭精神分裂癥患者和54例美國(guó)精神分裂癥患者的研究發(fā)現(xiàn)，COMT的 L 等位基因常見(jiàn)于采用暴力方式的男性自殺未遂的精神分裂癥和精神情感患者中，并具有顯著性，而在女性中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)有顯著性，表明COMT等位基因的作用在不同性別中有差別。來(lái)自日本的研究發(fā)現(xiàn)COMT的 L等位基因與抑郁癥相關(guān)聯(lián)[17]。在我國(guó)，目前對(duì)于自殺行為與COMT關(guān)系的研究較少，筆者對(duì)205例自殺未遂者與相應(yīng)對(duì)照組 (與病例同性別、年齡相差3歲以?xún)?nèi)、同地區(qū)) 進(jìn)行的COMT 158/108基因型測(cè)定、環(huán)境因素與自殺未遂的關(guān)系研究發(fā)現(xiàn)，病例組與對(duì)照組在COMT基因型、基因頻率上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；多因素條件Logistic回歸模型分析顯示，COMT 158/108 Val/Val、文化程度低、吸煙、情感沖突、精神障礙、抑郁皆為自殺未遂的危險(xiǎn)因素，支持COMT 158/108 Val/Val為自殺未遂的易感基因型，并提示基因圖譜上116 bp片段可能與COMT高活性相關(guān)[18]。筆者近期對(duì)農(nóng)藥自殺未遂者流行特征以及環(huán)境因素與COMT 158/108基因多態(tài)性的關(guān)系進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)精神障礙、自殺未遂與COMT基因間存在相互關(guān)聯(lián)[19]。最近有筆者對(duì)已有的關(guān)于COMT與自殺行為的研究結(jié)果進(jìn)行了綜合分析，結(jié)果顯示519 例患者和933例正常人相比， COMT158Met多態(tài)性與自殺行為之間存在著明顯的聯(lián)系。結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了COMT與自殺行為之間的聯(lián)系，同時(shí)發(fā)現(xiàn)這聯(lián)系存在著性別上的差異，考慮到大多女性是自殺未遂，而很高比例的男性是自殺身亡，所以COMT有可能與自殺行為的致命程度相關(guān)[20] 。
但是對(duì)于COMT與自殺關(guān)系的研究，也有不同的結(jié)論。Russ等[21]的研究發(fā)現(xiàn)在51例自殺患者與51名正常人中，COMT的功能性基因多態(tài)頻率沒(méi)有差別[21]。De Luca等[22]研究了305個(gè)家庭的COMT基因多態(tài)型，這每個(gè)家庭至少有一人具有雙向性精神障礙，結(jié)果發(fā)現(xiàn)COMT Val 158 Met基因多態(tài)性與自殺之間無(wú)顯著相關(guān)，實(shí)驗(yàn)提示COMT基因可能不影響雙向性精神障礙患者的自殺行為。
3 展望
自殺相關(guān)基因的定位受到許多因素的影響，如環(huán)境因素的潛在作用，基因型與表型的不一致，以及眾多測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)確性的欠缺。雖然有不少科學(xué)家從遺傳學(xué)、流行病學(xué)方面做了大量的研究，提出了一些與自殺相關(guān)的基因，但是還未能明確自殺的易感基因。COMT基因作為一個(gè)有前途的候選基因，目前對(duì)其與自殺關(guān)系的研究還較少。另外我國(guó)漢族人群是一特殊群體，漢族人自殺又有許多不同于其他民族或國(guó)家的自殺現(xiàn)象，該基因多態(tài)性在漢族人自殺未遂中分布情況如何、與自殺未遂的相關(guān)流行因素間是否存在相互作用，目前我國(guó)關(guān)于這方面的研究較少。明確自殺易感基因必將使臨床干預(yù)更具有靶向性，從而更加有效地預(yù)防、干預(yù)此類(lèi)疾病的發(fā)生。
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1BPES的基因定位
1.1 3號(hào)染色體：早在1993年，Jewett等[1]研究發(fā)現(xiàn)BPES患者染色體3q22(3號(hào)染色體長(zhǎng)臂2區(qū)2帶)缺失，并推測(cè)位于3q22～q23區(qū)域的基因位點(diǎn)很可能控制眼瞼發(fā)育。1995年，Warburg[2]等發(fā)現(xiàn)另外3例患BPES伴有智力低下的男孩同樣存在染色體異常：1例為3p25缺失，另1例因?yàn)槿旧w的不平衡異位t(2；3)導(dǎo)致3q23缺失，第3例患者為7q34缺失。與3號(hào)染色體異常有關(guān)的兩個(gè)男孩出現(xiàn)了相似的基因表型，而第3例患者同時(shí)伴有Smith-Lemli-Opitz綜合征。這就進(jìn)一步提示BPES基因與3q23區(qū)域有關(guān)。同年，Small等[3]對(duì)兩個(gè)具有明顯顯性遺傳的BPES家系3q區(qū)域的17個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行基因連鎖分析，證實(shí)RH0、ACPP和D3S1238的Lod值最大，為3.23，由此得出結(jié)論，與BPES有關(guān)的致病基因位于3q22。1998年，Costa等[4]對(duì)兩個(gè)無(wú)親緣關(guān)系的3歲和5歲的BPES并伴有其他畸形的男孩進(jìn)行高分辨率染色體顯帶分析表明，兩個(gè)患兒分別存在3q22.2～q25.1和3q22.2～q24缺失，在此之后，他綜合分析比較了8例3q2中間缺失和6例該區(qū)域重排的患者，發(fā)現(xiàn)這些患者的表現(xiàn)型上出現(xiàn)了很大程度的相似。De Baere等[5]在一個(gè)BPESB患者中發(fā)現(xiàn)存在t(3；4)(q23；p15．2)易位，并用D3S16152．D3S1316區(qū)域的8個(gè)YAC對(duì)3q23斷裂點(diǎn)進(jìn)行相對(duì)定位，發(fā)現(xiàn)5個(gè)YAC跨越3q23斷裂點(diǎn)，用其中的2個(gè)YAC 與人RPCI1 PAC文庫(kù)和3號(hào)染色LLNL粘粒文庫(kù)雜交分別獲得12個(gè)YAC和50個(gè)粘粒，從而構(gòu)建了詳細(xì)的YAC和粘粒物理圖譜。2001年，Dollfus等[6]對(duì)一印地安Ⅱ型BPES大家系進(jìn)行了TWIST基因突變分析,TWIST基因編碼一個(gè)具有bHLH區(qū)域的轉(zhuǎn)錄因子，在雜合子狀態(tài)的Saethre-Chotzen綜合征(scs)的患者中發(fā)現(xiàn)該基因有突變，SCS是常見(jiàn)的常染色體遺傳疾病，表現(xiàn)為顱骨狹窄，輕度的肢體和外耳畸形，常有上瞼下垂。在研究中，對(duì)TWIST基因進(jìn)行分子遺傳學(xué)分析并對(duì)該家系重新進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)，以確定顯著的眼瞼畸形是否是SCS表現(xiàn)譜的臨床變異。對(duì)該家系31個(gè)成員的DNA進(jìn)行單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)分析和直接測(cè)序，16位以前診斷眼瞼異常的患者DNA擴(kuò)增后出現(xiàn)遷移異常，直接測(cè)序分析發(fā)現(xiàn)有相同的突變，即在+82處發(fā)生堿基置換(C-T)，使密碼子CAG變?yōu)門(mén)AG，預(yù)示蛋白翻譯將在遠(yuǎn)離bHLH基序的上游位置提前終止，而bHLH基序是與組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶相互作用的部位。攜帶突變基因的家系成員有些表現(xiàn)非常輕度的SCS癥狀，即無(wú)明顯的顱骨狹窄，主要為眼瞼畸形；而其他的經(jīng)臨床和x線檢查均發(fā)現(xiàn)有顱骨狹窄、短指畸形、外耳畸形。因此，該家系患者應(yīng)診斷為SCS。綜上所述，對(duì)該印第安家系的遺傳和表型的分析說(shuō)明BPES可能具有單一的位點(diǎn)―3q22～q23。
1.27號(hào)染色體：Bianchi等[7]曾對(duì)兩個(gè)伴有BPES等多種畸形的嬰兒進(jìn)行了細(xì)胞遺傳學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)有7p13～7p15中間缺失。而早在1996年，Maw等[8]對(duì)上一印第安Ⅱ型BPES大家系用微衛(wèi)星多態(tài)性標(biāo)記(D3S1551、D3S1290、D3S11569、D3S1316、D3S1555)，對(duì)患者的DNA樣品進(jìn)行兩點(diǎn)連鎖分析，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)連鎖。而且，染色體分離模式證實(shí)沒(méi)有明顯的BPES等位基因與多態(tài)性標(biāo)記共同分離。由于兩個(gè)BPES患者有7p缺失，因此，7p被認(rèn)為是一個(gè)BPES候選區(qū)域，對(duì)該區(qū)域的多態(tài)性標(biāo)記也進(jìn)行連鎖分析，發(fā)現(xiàn)幾個(gè)患者中有染色體重組，該區(qū)域位于D7S488的著絲粒區(qū)和D7S629的端粒區(qū)。在該印第安家系的第二代患者中，3例患病同胞在D7S2551處的基因型有5/6是相同的，而未患病同胞基因型的相似性?xún)H為1/2。在患者的Ⅲ代和Ⅳ代后裔中，11例患病者和11例未患病者中均有3人遺傳了相同的D7S2551等位基因。在這個(gè)家系的14例患者中，6例有單側(cè)的BPES癥狀，而兩個(gè)未患病的個(gè)體遺傳了與BPES有關(guān)的基因缺陷都有倒轉(zhuǎn)性?xún)?nèi)眥贅皮；在關(guān)鍵區(qū)域發(fā)生重組而未患病的個(gè)體具有臨界性的倒轉(zhuǎn)性?xún)?nèi)眥贅皮。這些研究表明，在該研究中被定位的致病基因可能只是表現(xiàn)度不同而不是真正的非外顯性。對(duì)患者用D7S488、D7S2551、D7S2562標(biāo)記進(jìn)行兩點(diǎn)和多點(diǎn)分析都在D7S2562處出現(xiàn)Lod峰值。因此，認(rèn)為該家系BPES致病基因位于7p13～p21，在D7S2551位點(diǎn)附近，但其外顯率降低，結(jié)合從前報(bào)道的BPES致病基因位于3q2區(qū)域，說(shuō)明BPES可能存在基因座異質(zhì)性。
2BPES候選基因
2.1 FOXL2基因：FOXL2基因定位于3q23，由長(zhǎng)2.7kb的單個(gè)外顯子組成，其編碼蛋白質(zhì)屬于forkhead轉(zhuǎn)錄因子大家族，由376個(gè)氨基酸組成，其中包含一個(gè)由100個(gè)氨基酸構(gòu)成的forkhead DNA結(jié)合區(qū)和一個(gè)多聚丙氨酸區(qū)。2001年，Crisponi等[9]克隆了該基因，發(fā)現(xiàn)FOXL2在形成小鼠的間葉細(xì)胞中和成鼠的卵巢濾泡中表達(dá)，在成年人的卵巢中顯著表達(dá)。De Baere等[10]對(duì)診斷分型明確及不明確的BPES家系、散發(fā)的病例進(jìn)行FOXL2突變譜的研究表明，兩型BPES均存在著基因型和表現(xiàn)型的相互關(guān)聯(lián)。FOXL2突變導(dǎo)致蛋白截短，無(wú)論該截短蛋白包含還是不包含forkhead區(qū)域均導(dǎo)致I型BPES，而于forkhead區(qū)域內(nèi)或其下游開(kāi)始的復(fù)制，以及框架向下游移位的復(fù)制，均可產(chǎn)生一種延長(zhǎng)的蛋白，導(dǎo)致Ⅱ型BPES。而且，30例不伴有BPES的POF(premature ovarian failure)患者，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)FOXL2突變。一部分患者的基因缺陷不存在于FOXL2的編碼區(qū)，而可能存在一種位置效應(yīng)。Yamada等[11]對(duì)一日本家系的3例患者進(jìn)行直接的基因序列分析，發(fā)現(xiàn)FOXL2基因1 092～1 108之間的17個(gè)堿基缺失，而在對(duì)照的100名正常人中，未發(fā)現(xiàn)缺失。因此認(rèn)為，F(xiàn)OXL2基因的17個(gè)堿基缺失可能與日本人BPES的發(fā)病有關(guān)。Cha等[12]對(duì)韓國(guó)的BPES患者的FOXL2基因進(jìn)行的突變分析表明，在其研究的9個(gè)BPES家系中的5個(gè)和7例BPES散發(fā)病例中的3例存在FOXL2基因突變。在其中一個(gè)BPES家系的患者中發(fā)現(xiàn)存在14kb的缺失(939～952del14)，這個(gè)缺失會(huì)導(dǎo)致從G235W處發(fā)生移碼，并且使其編碼的蛋白質(zhì)延長(zhǎng)至527個(gè)氨基酸。在1例散發(fā)的BPES病例中發(fā)現(xiàn)存在1個(gè)異常的845C A的顛換而導(dǎo)致的無(wú)義突變。1個(gè)散發(fā)病例攜帶17bp的重復(fù)(1080-1096dup17)。此外，在研究的4個(gè)家系中的8例患者及1例散發(fā)的病例中還發(fā)現(xiàn)存在框內(nèi)30bp的重復(fù)。Bell等 [13]對(duì)兩個(gè)BPEs家系的FOXL2突變進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)由于堿基插入或基因內(nèi)重復(fù)導(dǎo)致框架移位突變，一個(gè)家系發(fā)生蛋白翻譯提前終止，另一個(gè)家系則產(chǎn)生較大的蛋白。根據(jù)目前的數(shù)據(jù)，他們認(rèn)為第一個(gè)家系是I型BPES，而第二個(gè)家系為Ⅱ型BPES，盡管在第一個(gè)家系內(nèi)有女性患者不育，但3例年幼的女性都有正常的盆腔超聲和激素水平，因此，說(shuō)明兩型BPES的劃分并不像提到的那樣清楚。De Baere等[14]對(duì)28例志愿的先證者進(jìn)行了FOXL2突變的篩選―其中包括來(lái)自?xún)衫齀型BPES、4例Ⅱ型BPES、1例既有I型又有Ⅱ型的家系的患者，再加15例散發(fā)的以及來(lái)自6例BPES家系的但是類(lèi)型難以確定的病例，所有患者都具有明顯正常的染色體組型。共發(fā)現(xiàn)了21個(gè)FOXL2突變。確切來(lái)講，包括2個(gè)錯(cuò)義突變，1個(gè)無(wú)義突變，12個(gè)插入或缺失導(dǎo)致框架移位，5個(gè)框架內(nèi)改變導(dǎo)致聚丙氨酸擴(kuò)增，1個(gè)微缺失，其中的16個(gè)是異常的。對(duì)21個(gè)FOXL2突變(16個(gè)新的病例)進(jìn)行ORF、5'非翻譯區(qū)及核心啟動(dòng)子序列分析，并進(jìn)行熒光原位雜交分析，結(jié)果表明，存在兩個(gè)突變熱區(qū)，30％的FOXL2導(dǎo)致聚丙氨酸增加，13％是新的框架外復(fù)制。研究認(rèn)為，聚丙氨酸肽段前有截短的預(yù)告蛋白的突變，發(fā)生POF的幾率就高，而那些包含有完整的聚丙氨酸肽段和forkhead的突變，蛋白無(wú)論是截短的還是延長(zhǎng)的，甚至在同一個(gè)家系均有可能導(dǎo)致兩型BPES，因此，De Baere等對(duì)之前所得出的基因型與表型的關(guān)系做了進(jìn)一步的修正。因此，用分子檢測(cè)預(yù)測(cè)POF的患病率應(yīng)慎重。2006年以來(lái)，唐勝建等[15-16]研究顯示在1個(gè)Ⅱ型小家系的2例患者和1例散發(fā)患者中發(fā)現(xiàn)了FOXL2 901-930重復(fù)插入突變，而在正常人對(duì)照中，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)該突變。一級(jí)結(jié)構(gòu)分析顯示，F(xiàn)OXL2突變前后蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量發(fā)生了明顯的改變，但蛋白質(zhì)等電點(diǎn)沒(méi)有發(fā)生改變。二級(jí)結(jié)構(gòu)分析顯示，F(xiàn)OXL2為一跨膜蛋白，其聚丙氨酸肽段包含1個(gè)α-螺旋區(qū)，該螺旋區(qū)域位于跨膜區(qū)內(nèi)；發(fā)生突變后，聚丙氨酸擴(kuò)增（222-232插入10），螺旋區(qū)域長(zhǎng)度增加，從而使α-螺旋占整個(gè)蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的比例較突變前增加了4.1％，而β折疊與無(wú)規(guī)卷曲的比例相應(yīng)下降。突變前后其編碼蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)存在的顯著差異，可能與BPES發(fā)病密切相關(guān)。但是有些BPES的家系和散發(fā)病例中并沒(méi)有檢測(cè)到FOXL2基因的突變。這可能是由于基因的表達(dá)不僅需要正常的編碼序列同時(shí)也需要調(diào)控區(qū)域的作用，這個(gè)區(qū)域可能與目標(biāo)基因相距甚遠(yuǎn)。2004年，Crisponi等[17]報(bào)道了在距離FOXL2基因5' 端轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)171kb處的平衡易位斷點(diǎn)會(huì)導(dǎo)致BPES，此外他們還在3號(hào)染色體上進(jìn)行了500kb范圍的序列分析以尋找FOXL2的遠(yuǎn)程調(diào)控序列，通過(guò)人類(lèi)和山羊基因組DNA與染色體畸變分析發(fā)現(xiàn)另一種基因MRPS22的外顯子6、ll和l2都可能與FOXL2的調(diào)控有關(guān)，它們的突變有可能影響FOXL2的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，從而引起B(yǎng)PES的表型。以上研究表明，在一些沒(méi)有找到突變的BPES家系中可能存在基因調(diào)控序列的異常。
3展望
盡管目前的研究已將BPES致病基因定位于3q23上，且候選基因主要集中在FOXL2，越來(lái)越多的研究者開(kāi)始關(guān)注BPES中的FOXL2基因突變以及其對(duì)卵巢功能的影響機(jī)制，但由于FOXL2是一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子基因，它不同的突變是如何引起B(yǎng)PES的各種癥狀，又是如何發(fā)揮作用的，還需要更深入的研究。
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