時間：2023-03-06 15:57:39
導語：在包干合同的撰寫旅程中，學習并吸收他人佳作的精髓是一條寶貴的路徑，好期刊匯集了九篇優(yōu)秀范文，愿這些內(nèi)容能夠啟發(fā)您的創(chuàng)作靈感，引領您探索更多的創(chuàng)作可能。
承包人： (以下簡稱乙方)
依照《中華人民共和國合同法》、《中華人民共和國建筑法》、《建設工程質(zhì)量管理條例》及其它有關法律、行政法規(guī)，遵循平等、自愿、公平和誠實信用的原則，雙方經(jīng)協(xié)商一致訂立本協(xié)議。
第一條：工程概況
工程名稱： 住宅套內(nèi)及公共區(qū)域裝修工程。
一、工程地點：
二、工程內(nèi)容：乙方負責按甲方確認的施工圖紙及相關設計變更通知對 住宅室內(nèi)、首層電梯大堂及電梯間、標準層電梯間裝修工程。
其它工程內(nèi)容：
第二條：承包范圍及承包方式
一、承包范圍： 室內(nèi)、首層電梯大堂及電梯間、標準層電梯間精裝修工程的施工。具體內(nèi)容包括各區(qū)域地面、天棚、墻面的裝修，入戶門、室內(nèi)護窗欄桿制安、衛(wèi)生潔具、衛(wèi)生間掛件、櫥柜、地柜、開關插座、燈具、抽油煙機、煤氣爐、消毒碗柜安裝等。
其它內(nèi)容： 。
不包含在本工程承包范圍的毛坯房和已施工的樣板房：
二、承包方式：包人工、包材料、包機械、包損耗、包工期、包質(zhì)量、包安全、包文明施工、包市場風險、包驗收合格、包稅金的形式承包本項目。
三、乙方須按甲方的要求，提供報建相關的資料，并配合甲方進行報建的相關工作，如因乙方原因影響甲方報建及驗收的進度，由此增加的費用由乙方負責。
四、其它約定：
第三條：工程質(zhì)量標準
質(zhì)量標準按國家、地方現(xiàn)行相關規(guī)范及通用條款第9條執(zhí)行,并達到合格。
第四條：驗收及移交
按照本合同通用條款第12條以及協(xié)議書第三條、第七條的約定進行驗收。
第五條：質(zhì)量保修期
本合同防水工程保修期為五年，室內(nèi)裝修工程的質(zhì)量保修期為兩年。其余未提及的均按照通用條款第13條執(zhí)行。
第六條：合同工期
一、開工日期：開工時間暫定為 年 月 日開工，具體開工日期以甲方現(xiàn)場管理代表簽發(fā)的開工令確定的開工日期為準。
二、合同工期：(下列幾項根據(jù)項目實際情況選擇填寫)
總工期： 日歷天
工程分批進場施工，每批工程工期： 日歷天
單棟工期為： 日歷天
節(jié)點工期：
三、竣工日期： 具體竣工日期以甲方現(xiàn)場管理代表簽發(fā)的開工令日期及合同總工期確定。
各樓棟竣工日期：
四、節(jié)點工期要求：甲方可以根據(jù)現(xiàn)場的施工條件，合理安排本合同工程項目進行分段施工，乙方應按甲方現(xiàn)場管理代表下發(fā)的分段施工指令組織施工。
第七條：材料的供應及計價
一、由乙方自行選擇供貨商進行采購的材料由乙方在簽訂合同前按照甲方確認的設計圖紙要求注明的顏色、質(zhì)量、質(zhì)感、規(guī)格、品牌送實物樣品供甲方確認，經(jīng)甲方確認后，作為實物樣板封存，并由乙方按甲方確認的實物樣板自行采購。
二、乙方應根據(jù)材料需進場的時間，在圖紙下發(fā)后7天內(nèi)，以書面形式提交屬于代供代扣代付的材料進場計劃報工程師審核，計劃須包含品種、規(guī)格、等級、數(shù)量、品牌及進場時間等內(nèi)容。如設計變更需取消原材料計劃，應在變更下發(fā)后3天內(nèi)通知甲方(代供代扣代付材料已按計劃進場后，因甲方設計變更所導致的相關責任均由甲方承擔)。如因乙方未及時提交代供代扣代付材料進場計劃或提交錯漏計劃，導致甲方不能及時進行代供代扣代付材料采購或采購錯漏時，一切不利后果均由乙方自行承擔。若代供代扣代付材料的進場未滿足乙方提交的材料進場計劃的要求，屬甲方原因所造成的損失和因此延誤的工期責任經(jīng)甲方確認后，由甲方承擔;
三、代供代扣代付材料由甲方負責運到工地，乙方在送貨單上核對并簽認，并由乙方負責代供代扣代付材料的卸車、場內(nèi)運轉(zhuǎn)、清點、驗貨、接收、保管、切割磨邊加工等一切后續(xù)工作，以上工作(包括期間的損耗、損失)涉及的費用已包含在合同價中，甲方不另行支付費用。
四、甲方代供代扣代付材料的品牌、型號、價格以施工現(xiàn)場收貨單為準，甲方代供代扣代付材料的價格按本合同附件 及附件 《甲方代供代扣代付材料單價清單》。甲方代供代扣代付材料的總損耗率見本合同附件 ～附件 、附件 ～附件 ，本合同附件 ～附件 、附件 ～附件 的總損耗率結(jié)算時不作調(diào)整。乙方領用甲方代供代扣代付材料的總數(shù)量=施工項目工程量×(1+總損耗率)，超出此數(shù)量范圍的甲乙雙方重新核定后乙方方可領用，超出部分的材料費用(含采保費和稅金)由乙方承擔。
五、所有代供代扣代付材料的送檢由乙方負責，檢測費用由甲方承擔，乙方先行墊付，由甲方現(xiàn)場管理代表在相關收費票據(jù)上簽字確認后與最近的進度款一并支付。
六、代供代扣代付材料送檢不合格所造成的一切后果由甲方承擔，且延誤的工期相應順延。
第八條：合同價
一、暫定總價(含甲方代供代扣代付材料)：人民幣 (￥ 元)。
二、計價方式
1、住宅套內(nèi)裝修工程(不包括： )
(1)采用每平米套內(nèi)面積單價包干的方式，具體每個戶型的每平方米套內(nèi)面積包干單價見本合同附件 。每個戶型的每平米套內(nèi)面積包干單價的造價分析見本合同附件 ～附件 。
(2)工程量的計算：根據(jù)施工竣工圖按實際完成工程量計算。結(jié)算按實際完成戶型的套內(nèi)面積乘以對應戶型的合同單價結(jié)算。套內(nèi)面積計算規(guī)則為：各套公用墻(包括各套之間、各套與公共建筑間的分隔墻及外墻)的中心線所圍的水平投影面積計算(中心線以外的飄窗臺面積不計算裝修面積);陽臺裝修面積(含封閉陽臺)按水平投影凈面積(不含外墻)的一半計算，露臺不計算面積。
(3)套內(nèi)面積包干單價已經(jīng)包含了該項工程項目施工圖中所有的及施工圖中沒有說明但在施工過程中為完成該項工程必須完成的所有工作，如該項工程描述存在漏項、測誤亦視為已經(jīng)包含在該項包干單價中，不得另增加費用。
(4)住宅套內(nèi)面積包干單價不含入戶門、入戶門檻石、弱電的管線(除有線電視線外)及插座面板(除寬頻電視插座外)、入戶總電箱等。其它不包含內(nèi)容：
2. 公共區(qū)域裝修工程(包括首層入戶大堂及首層電梯間、標準層電梯間，其它包含的內(nèi)容： )
(1)采用含稅單項單價包干方式。具體的包干單價詳見附件 ～附件 、附件 ～附件 。
(2)計算規(guī)則為：各單項子目按實際發(fā)生工程量結(jié)算。
(3)單項包干單價已經(jīng)包含了施工圖或報價清單中沒有說明但在施工過程中為完成本項工程必須完成的所有工作，如有測誤亦視為已經(jīng)包含在清單包干價中，不得另增加費用。
3、按以上計價方式計算的工程造價包含的內(nèi)容：人工費、機械費、材料費(含代供代扣代付材料的卸車、場內(nèi)運轉(zhuǎn)、清點、驗貨、接收、保管等一切后續(xù)工作所發(fā)生的費用在內(nèi))、搭拆腳手架工料費用、石材磨邊、材料加工(含甲供塊料加工)、開槽、防污、防水、以及幕墻防污防腐防火防水防雷、鋼型材除銹防腐費、吊裝費、工程及材料(乙方自行采購的材料)所須的各種檢測費及試驗費(包含幕墻的“四性”試驗檢測費和實驗的試件材料費及安裝人工費)、各種材料損耗費、卸車費、材料場內(nèi)二次運輸費、負責其它專業(yè)承包人施工收邊收口產(chǎn)生的費用、技術處理費、保管費、合同工期內(nèi)的趕工費、施工水電費、技術措施費、已完工程及設備保護措施費、安全文明施工費、雨季或異常氣候施工措施費、成品保護費、垃圾清運到甲方指定地點堆放費用、工程完工驗收前清潔費、遠程施工增加費、現(xiàn)場經(jīng)費、綜合管理費、利潤、稅金及其他一切費用。
4、包干單價不含主體配合費，由甲方另行支付給主體單位。
5、主體單位的配合內(nèi)容為：詳見第十一條
6、若由甲方提供水、電源，則水電費按甲方實際代繳數(shù)額由甲方從乙方的每一次工程進度款中扣除。
7、乙方負責其它專業(yè)(土建專業(yè)除外)的樓板或墻體穿洞的收邊收口等工作，此部分費用包含在清單包干價中，甲方不予另行簽證。
8、甲方只負責提供施工現(xiàn)場堆放材料的場地，乙方自行解決施工及管理人員住宿辦公場所，甲方不予補償費用。
9、甲方只提供現(xiàn)有的垂直運輸設備;若裝修單位在主體單位拆除垂直運輸設備后進場，則由裝修單位自行解決運輸問題，相關費用已包含在合同價格中;裝修單位不準使用客梯進行運輸?！?/p>
10、乙方進場前，由甲方組織乙方、總包定位、監(jiān)理單位對土建、裝飾施工界面進行勘測、交驗、核對，并形成書面文字備案;若甲方未及時組織四方進行界面交驗，因此造成工期延誤的，經(jīng)甲方確認后，可以順延工期。
三、調(diào)價方法：
(一)住宅套內(nèi)裝修工程
1、除甲方原因引起的設計變更、甲方代供代扣代付材料變更外，本合同執(zhí)行期間，面積包干單價不因任何因素而作調(diào)整。若因甲方設計原因引起的設計變更，本合同附件 ～附件 已有的項目按合同附件 ～附件 的項目單價執(zhí)行，合同附件 ～附件 外的項目，由雙方協(xié)商對變更部分的造價增減進行約定。
2、若因甲方原因變更甲方代供代扣代付材料，則附件 ～附件 欄目中除主材基價按雙方簽字確認的工地收貨單上的價格調(diào)整外，其它費、取費表不作調(diào)整，甲方代供代扣代付材料總損耗率除材料規(guī)格變化外其他因素發(fā)生變化不作調(diào)整
(二)公共部分裝修工程
1、除甲方原因引起的設計變更外，本合同執(zhí)行期間，包干單價不因任何因素而作調(diào)整。若因甲方設計原因引起的設計變更，本合同附件 ～附件 已有的項目按合同附件 ～附件 的項目單價執(zhí)行，合同附件 ～附件 外的項目，由甲方簽證，雙方協(xié)商簽訂補充協(xié)議，對變更部分的造價增減進行約定。
2、若因甲方原因變更甲方代供代扣代付材料的品種、規(guī)格或者價格時，則附件 ～附件 欄目中除主材基價按雙方簽字確認的工地收貨單上的價格調(diào)整外，其它費、取費表不作調(diào)整，甲方代供代扣代付材料總損耗率除材料規(guī)格變化外其他因素發(fā)生變化不作調(diào)整。
(三)本合同適用于下列第 種情況
第1種情況：本合同附件 ～附件 中的組成套內(nèi)裝修單元面積包干單價的“各戶型單套工程量”和附件 的“單套套內(nèi)面積”及附件 ～附件 、附件 ～附件 中甲方代供代扣代付材料中的拋光磚和瓷片的“材料總損耗率”為暫定，待詳細圖紙下發(fā)后1個月內(nèi)雙方根據(jù)施工圖紙重新核對“各戶型單套工程量” 、甲方代供代扣代付材料中的拋光磚和瓷片的“材料總損耗率”和“單套套內(nèi)面積”，并根據(jù)核對后的結(jié)果以補充協(xié)議書的形式調(diào)整本合同造價。(本條適用于未出詳細圖紙情況)
第2種情況：本合同附件 中的組成套內(nèi)裝修單元面積包干單價的“各戶型單套工程量”和附件 的“單套套內(nèi)面積”已核對完畢，除甲方原因引起的設計變更、甲方代供代扣代付材料價格變更及甲方代供代扣代付材料中的拋光磚和瓷片的“材料總損耗率”變更外，本合同執(zhí)行期間，各套內(nèi)戶型清單子目數(shù)量及面積包干單價不因任何因素而作調(diào)整。(本條適用于已出詳細圖紙情況)
第九條：付款時間、條件與付款方式
一、合同簽訂，乙方進場施工后7天內(nèi)，甲方支付乙方合同暫定總價并扣除甲方代供代扣代付材料款、 后金額的10%作為工程備料款。若工程分期分批施工，甲方按分期分批施工部分 合同暫定價扣除甲方代供代扣代付材料款后金額的10%作為工程備料款。
其它約定：
二、乙方每30天申報一次進度款，經(jīng)核實后7天內(nèi)甲方按乙方當期實際完成工程量金額(含簽證)扣除已使用(包括損耗)的甲方代供代扣代付材料款后的70%作為工程進度款，當期領用但未使用的甲方代供代扣代付材料的款項應在領用之日起第60天后申報的第一筆進度款中按70%的比例扣除完畢，不足扣的在下一筆進度款中扣完，在最后一次進度款中，扣除乙方已領用的全部甲方代供代扣代付材料款(含乙方庫存部分)的剩余金額，進度款不足抵扣的,在結(jié)算款中扣除。
即：當期實際支付的進度款=(當期實際完成工程量金額-當期使用(包括損耗)的甲方代供代扣代付材料款-當期滿足扣減條件的領用但未使用的甲方代供代扣代付材料款)×70%。
三、工程竣工驗收合格，承包人應在30天內(nèi)向發(fā)包人遞交竣工結(jié)算報告及相關資料，辦理結(jié)算后30天內(nèi)，甲方累計支付乙方至實際工程結(jié)算價的97.5%，甲方應支付的款項應扣除甲方代供代扣代付材料款、工程備料款、工程進度款、 。
四、工程結(jié)算價的2.5%作為保修金，待工程竣工驗收合格滿兩年后如無質(zhì)量問題、無發(fā)生甲方代扣代付維修費用，則甲方在30天內(nèi)無息支付2.3%，其余0.2%待防水工程五年質(zhì)保期滿后如無質(zhì)量問題、無發(fā)生甲方代扣代付維修費用，則甲方在30天內(nèi)無息付清保修金。
五、乙方在領取每一次工程款時須向甲方提交建安發(fā)票，發(fā)票金額為包含甲方代供代扣代付材料在內(nèi)的裝修造價，甲方同時向乙方提交甲方代供代扣代付材料等額材料發(fā)票，乙方向甲方開具的工程發(fā)票的累計金額為含甲方代付代扣材料款在內(nèi)的工程總價。
第十條：現(xiàn)場移交標準
場地移交標準：
1、內(nèi)墻抹灰、衛(wèi)生間沉箱回填及找平完成。
2、垃圾清理干凈，樓面不得留有浮渣。
3、
第十一條：施工配合和總包服務內(nèi)容
1、總承包單位提供現(xiàn)有室內(nèi)外垂直運輸及室外腳手架供乙方運輸材料、設備、機械(大、中型設備、機械除外)，乙方對垂直運輸設備的使用須服從甲方的整體安排，乙方須對室內(nèi)垂直運輸設備進行保護，由乙方承擔因室內(nèi)垂直運輸設備保護不利造成的損失
2、總承包單位負責施工垃圾及余泥外運。乙方將垃圾及余泥堆放至總承包單位指定的地點(但甲方與總承包單位指令出現(xiàn)矛盾的，以甲方的為準)，由總承包單位負責外運;若發(fā)現(xiàn)乙方的建筑垃圾亂堆放，作業(yè)面清理不到位，在甲方工程師的見證下,總承包單位有權(quán)派人將作業(yè)面清理，對于所發(fā)生的人工、機械等費用，甲方可以在乙方當期進度款中轉(zhuǎn)扣給總承包單位。
3、總承包單位每棟每單元提供水電源點(如不能提供水電源點,也可按總承包單位現(xiàn)有水電源點情況適當提供,但須滿足本工程施工接取水電源的需要)，乙方需自行安裝水表、電表并承擔水、電費(須分攤總表線路損耗)，將由乙方自行繳交給主體施工總承包人。
4、總承包單位及時提供裝修工作面以及符合要求的標高線(水平線)及軸線(垂直線)。
5、乙方進場施工時，在甲方或委托的監(jiān)理組織下，乙方應與總承包單位辦理場地移交手續(xù)，以明確所移交場地的范圍、條件及相互責任。
6、總承包單位負責土建修補工作，因乙方原因而需要重復打鑿所產(chǎn)生的修補或由于乙方的錯誤而導致的返修、返工等引起的修補，由乙方自行修補并承擔費用。
7、乙方在進場前，須與總承包單位簽訂文明施工、安全生產(chǎn)協(xié)議書及臨水臨電供應協(xié)議書，否則，總承包單位有權(quán)拒絕乙方的進場，導致的工期延誤及其他損失，全部由乙方承擔。
8、乙方所有臨時建筑物、構(gòu)筑物、排柵、場地等，應按經(jīng)甲方批準的施工組織設計進行搭建(施工現(xiàn)場不許搭建生活設施)。在施工過程中一旦發(fā)生臨時設施需要拆除或遷移時，乙方應服從并負責拆除或遷移，其費用已綜合考慮在合同價中，不另計取。
第十二條：雙方現(xiàn)場代表
一、甲方授權(quán) 為現(xiàn)場管理代表，監(jiān)督檢查工程質(zhì)量、進度、負責設計圖紙的變更，工程期間的質(zhì)量驗收及其他事宜。
二、乙方委派 為項目經(jīng)理。委派的項目經(jīng)理須持有與工程項目相適應的真實有效的資格證書，負責施工期間的施工質(zhì)量、安全等問題。
三、乙方應至少任命一位稱職的一級項目經(jīng)理(或一級建造師)常駐工地，作為負責施工管理和合同履行的代表，此項目經(jīng)理的人選必須經(jīng)甲方審批。
四、乙方委派的項目經(jīng)理、技術負責人須持有與工程項目相適應的真實有效的資格證書，項目經(jīng)理須從事同類專業(yè)工程施工管理工作經(jīng)歷5年以上，并具有同類工程施工經(jīng)驗，負責施工期間的施工質(zhì)量、安全等問題。甲方任何發(fā)給此項目經(jīng)理的指令將視為已有效地發(fā)給乙方。技術負責人須具有中級或中級以上技術職稱，并具有同類工程管理經(jīng)驗。
五、在正常工作時間內(nèi)，乙方項目經(jīng)理、技術負責人每天離開工地現(xiàn)場超過4小時，必須向甲方駐現(xiàn)場代表請假并獲得批準后方可離開;乙方項目經(jīng)理離開期間，乙方項目副經(jīng)理或技術負責人履行項目經(jīng)理的義務。
六、乙方項目經(jīng)理、技術負責人每個月累計離開現(xiàn)場時間不得超過三個日歷天;項目經(jīng)理、技術負責人當月累計離開現(xiàn)場時間超出三天的，每超出一天，乙方承擔5000元的違約金，此后每天的違約金按20xx元遞增;施工過程中，甲方有權(quán)力指令乙方撤換不能勝任、玩忽職守的項目管理人員(包括項目經(jīng)理、副經(jīng)理及施工管理人員)或班組，乙方必須服從并執(zhí)行。
七、乙方派駐本工程項目的管理人員名單見合同附件，乙方未經(jīng)甲方同意不可更換項目經(jīng)理、項目副經(jīng)理或技術負責人，否則乙方應向甲方支付違約金5萬元/人，同時甲方保留單方解除合同的權(quán)利，特殊情況須經(jīng)甲方同意。甲方在施工現(xiàn)場設立指紋考勤機對項目管理人員進行考勤管理。
第十三條：其他約定
一、乙方在投標過程中已仔細察看過招標樣板，并熟知甲方對相關的材料的要求，如乙方提供的材料樣板無法達到甲方的要求，乙方承諾按照甲方提供的招標樣板施工，相應項目的綜合單價不作調(diào)增。
二、本合同簽訂后3個日歷天內(nèi)，乙方應向甲方提供合同暫定總價 0.5%的履約保證金或 3% 的履約銀行保函。乙方未依本約定提供履約保證金或履約銀行保函的，甲方有權(quán)從乙方的任何一筆工程款中抵扣。
三、乙方必須做好現(xiàn)場已完工項目成品保護工作，重點做好入戶門、地毯、地板、石材地面部分完工項目成品保護工作，若成品保護措施不到位出現(xiàn)問題，乙方需無條件服從甲方要求整改、修復或賠償甲方委托第三方單位修復費用。
四、在工程施工過程中，若甲方要求增加施工人員，則乙方應無條件按甲方要求執(zhí)行。由此而增加的費用已在相應的單價中綜合考慮，該部分費用不另行增加。
五、乙方在工程竣工驗收時，應按甲方要求，向甲方提供符合國家城建檔案管理部門的要求規(guī)格編制成冊的工程竣工圖及有關的技術文件檔案資料，并確保通過建設工程檔案專項驗收，取得符合驗收備案要求的《建設工程檔案驗收意見書》。
六、乙方必須為從事危險作業(yè)的職工辦理意外傷害保險，并為施工場地內(nèi)自有人員生命財產(chǎn)和施工機械設備辦理保險，支付保險費用。
七、乙方承諾就甲方代供代扣代付材料與甲方及代供代扣代付材料供應商簽訂《代付代扣材料物資款三方協(xié)議》，此合同作為甲方受乙方委托代供代扣代付材料物資款給代供代扣代付材料供應商的依據(jù)。
八、代供代扣代付材料供應商每月收到乙方委托甲方代付的材料物資款后，代供代扣代付材料供應商應于收款時開具等額發(fā)票給乙方，此發(fā)票由甲方轉(zhuǎn)給乙方。
九、乙方認同《民工權(quán)益保障承諾書》內(nèi)容，并作出慎重承諾，具體內(nèi)容詳見：附件。
十、甲方通訊地址: ，郵政編碼為： ，乙方依本地址向甲方發(fā)送有關信函文件，甲方如變更上述地址應及時通知乙方，避免發(fā)生延誤。
十一、乙方通訊地址： ，郵政編碼為： ，甲方依本地址向乙方發(fā)送有關信函文件，因乙方所留地址有誤或變更地址未通知甲方的責任由乙方承擔，甲方向乙方所發(fā)送的信函文件等視為已送達乙方。
十二、乙方負責清除和外運在施工過程中產(chǎn)生的一切垃圾，包括設計修改、增加工程產(chǎn)生的垃圾，按甲方的要求將垃圾堆于工地內(nèi)自然地面上的指定地點。工程竣工前負責完成場地清理(包括建筑物周圍的余泥及其他堆積物，臨時的施工和生活設施拆除)。乙方須在甲方要求時間前完成場地清理，逾期未完成，甲方有權(quán)自行處理，乙方承擔一切費用。
十三、雙方當事人在自愿、平等的基礎上對“通用條款”進行了協(xié)商。乙方對于“通用條款”的修改意見，已經(jīng)完整地包括在本協(xié)議書中。雙方自愿遵守“通用條款”中未修改的部分和本協(xié)議書。
十四、如甲方工作人員明示或暗示要求宴請、招待，或索取禮金、禮品、禮券、其他利益，或故意刁難、顯失公平現(xiàn)象，乙方可以向甲方監(jiān)察部門進行舉報。
十五、其它約定：
第十四條：合同生效
一、本合同自雙方簽字蓋章后生效。
二、本合同文本壹式肆份，甲方、乙方雙方各執(zhí)貳份，各份具同等法律效力。合同發(fā)生糾紛協(xié)商不成時，雙方約定由工程所在地人民法院裁判。
發(fā)包人(蓋章)： 承包人(蓋章)：
簽約代表： 簽約代表：
承包方：_________，簡稱乙方；
企業(yè)經(jīng)營者：_________。
甲、乙雙方根據(jù)_________，經(jīng)協(xié)商簽訂本合同。
一、承包形式
上繳利潤定額包干，超額全留。
二、承包期限
自_________年_________月_________日起至_________年_________月_________日止，共_________年。
三、上交利潤定額
1．乙方在_________年內(nèi)，上交利潤總額為_________元。其中，_________年_________元，_________年_________元，_________年_________元。
2．超出定額部分的利潤，全部留給乙方。
3．乙方應根據(jù)留利數(shù)額，建立生產(chǎn)發(fā)展基金，獎勵基金和福利基金。三項基金的比例為：_________。
四、經(jīng)濟技術指標：_________。
五、技術改造任務：_________。
六、承包前債權(quán)債務的處理辦法：_________。
七、貸款歸還辦法：_________。
八、承包期間，甲方有權(quán)根據(jù)法律和合同的規(guī)定監(jiān)督檢查乙方的生產(chǎn)經(jīng)營情況；有權(quán)_________；
承包期間，甲方不得在法律和合同的規(guī)定之外隨意干涉乙方的生產(chǎn)經(jīng)營活動并有義務_________。
九、承包期間，乙方享有國家法律、法規(guī)、政策規(guī)定的經(jīng)營管理自主權(quán)。
企業(yè)經(jīng)營者_________為乙方法定代表人，對企業(yè)經(jīng)營管理中的下列事項，有依法自主決定的權(quán)利：_________。
十、違約責任：_________。
十一、對企業(yè)經(jīng)營者的獎懲：_________。
十二、爭議的解決辦法：_________。
十三、其他有關事項：_________。
十四、本合同自_________時起生效。合同正本_________，副本_________。
甲方（公章）：_________乙方（公章）：_________
法人代表（簽章）：_________企業(yè)經(jīng)營者（簽章）：_________
摘 要 《保險法》作為規(guī)制保險經(jīng)營活動，規(guī)范保險人，保護被保險人和受益人的一項基本法律制度在現(xiàn)代國家經(jīng)濟生活中起到了不可估量的作用。新《保險法》總結(jié)了以往司法實踐的有益成果并借鑒了國外先進立法模式，對規(guī)范與保障保險關系各主體有了更加具體的規(guī)定，而作為保險關系各方主體權(quán)利義務的集中體現(xiàn)――保險合同，表現(xiàn)的尤為突出。本文試圖通過分析保險合同訂立的不同階段中產(chǎn)生的問題，旨在為進一步完善新《保險法》相關規(guī)則提供理論借鑒。
關鍵詞 新《保險法》 保險合同 條款
保險合同的成立與一般合同成立的構(gòu)成要件相同。保險合同雙方即投保人和保險人雙方意思表示真實一致，保險合同即告成立。在保險合同訂立過程中，一方當事人做出邀約，通常為投保人，內(nèi)容具體確定，保險人在做保險宣傳時若宣傳內(nèi)容具體確定的話也可認定為邀約，另一方當事人做出意思真實，內(nèi)容形式有效的承諾，保險合同以有效承諾做出時即告成立，基本過程與普通合同并無二致。但是，對于保險合同訂立的形式我們需要稍加討論。根據(jù)我國傳統(tǒng)《保險法》學說，保險合同是一種諾成性非要式合同，即可以以口頭形式訂立保險合同。對此筆者提出，應嚴格排除口頭形式保險合同，其原因有二：一方面，保險合同通常時間持續(xù)較長，權(quán)利義務較為復雜，口頭形式不足以將上述權(quán)利義務準確的表述及記錄下來；另一方面，保險合同自成立到生效，直到保險人保險責任的確定中間間隔時間較長，要式保險合同可以有效排除雙方對于合同的矛盾分歧。雖然我國《保險法》和《合同法》對此并未加以規(guī)定，依然秉承意思自由的原則，但誠如上文所言，行政法規(guī)和保監(jiān)會制定的規(guī)章應嚴格排除口頭形式保險合同。
保險人保險責任的起算是整個投保過程中的重中之重，因為其關系到投保人何時轉(zhuǎn)移了自身風險，保險人何時具有危險承擔義務，更重要的是關系到投保人能否獲得賠償。根據(jù)新《保險法》第十三條，十四條的規(guī)定可推知：對于大多數(shù)保險合同而言，保險合同生效，保險人保險責任隨之開始，保險合同的生效時即為保險人承擔保險責任的時間。但是，合同另有約定除外，也就是說，合同生效與保險人保險責任承擔的時間未必同步，而實踐中，這種情況占多數(shù)。保險人保險責任的承擔往往都是附條件的，如投保人交付首期保險費，保險人承保并簽發(fā)保險單等。保險責任的確定具有重要的意義，但是以現(xiàn)有的法律條文，不足以充分保障投保人的權(quán)利，若保險合同上規(guī)定以“保險公司同意承保時為承保責任開始時”而保險公司又遲遲不承保，在這段時間投保人的權(quán)益將如何保障。因此，筆者認為對于保險責任起算時間應更加明確，方案有三：一是將此類不明確或故意模糊保險責任起算時間的條款劃為無效條款，這在下面會論述到；二是對該條文進行有利于投保人的解釋；三是盡快出臺《保險法實施細則》確定一個必要時間，如規(guī)定保險人在保險合同成立后的十到十五個工作日內(nèi)做出承保與否等條文，對保險人的承保時間加以確定性限制。
新《保險法》中的保險人說明義務既是本法的核心重點，也是一個難點。本文對于該義務本身不做過多分析，只對說明義務的對象進行簡要分析。新《保險法》對于說明義務有了三處變動，一是僅對于格式條文進行說明；二是在訂約時需交付格式條文；三是對于責任免除條款的提示義務的確定。此次修改的重要意義不言而喻，但是對于其操作性筆者卻持有保留態(tài)度。對于說明義務的核心無非有兩點，說明對象與說明程度。根據(jù)新《保險法》規(guī)定，說明對象是格式條文，當下保險業(yè)使用的保險合同絕大多數(shù)都是格式合同，保險人是否要逐條為投保人進行解釋？對于說明程度法律上沿用了“明確說明”這一模糊的概念，究竟怎么樣才算明確？而對于保險人進行的說明，在事后投保人又如何舉證？這一系列問題在新《保險法》中依然沒有得到解決。反觀免責條款的提示義務倒容易操作。
正如上文所言，保險合同條款絕大多數(shù)是格式條款。因此，必須在立法上予以限制，保護投保人的利益?！侗ｋU法》及《合同法》對此有專門規(guī)定。（一）保險合同中非格式條款的效力優(yōu)于格式條款?！逗贤ā返谒氖粭l規(guī)定“格式條款與非格式條款不一致的，應當采用非格式條款?！北ｋU合同的格式條款一般是保險人一方的意思表示，而非格式條款往往是投保人與保險人雙方合意的結(jié)果，是在格式條款外另行商定的條款，或?qū)υ袷綏l款重新協(xié)商修改的條款。因此，保險合同非格式條款的效力應當優(yōu)于格式條款①。（二）如何正確理解《保險法》第三十條確立的“有利于投保人和受益人解釋”原則。該規(guī)定被稱為“有利解釋”原則。但實踐中，人們往往片面理解《保險法》第三十一條的規(guī)定，將這種“有利解釋”原則擴大化加重保險人的責任。筆者認為，要正確適用《保險法》的這一原則，必須結(jié)合《合同法》的有關規(guī)定對其進行解釋?！逗贤ā返谒氖粭l規(guī)定“對格式條款的理解發(fā)生爭議的，應當按照通常理解予以解釋?！边@里所說的“通常理解”，根據(jù)《合同法》第一百二十五條的規(guī)定進行解釋?！巴ǔ＠斫狻边€包括這樣一層意思，即應當按可能訂立該合同的一般人的理解來解釋合同條款，這里所講的“一般人的理解”，是指不特定的群體對有關條款的理解，不能認為是具體某個人的理解。
注釋：
①韓秀麗.在保險合同中的適用淺析.大眾商務.2010.7.
參考文獻：
[1]楊華柏.保險法律評論.法律出版社.2009.5.
[2]奚曉明.條文理解與適用.中國法制出版社.2010.
[3]韓秀麗.在保險合同中的適用淺析.大眾商務.2010.7.
[4]張玉.免責條款在保險合同中的認定問題研究.蘭州商學院學報.2009.8.
[5]吳定富.釋義.中國財政經(jīng)濟出版社.2009.4.
外墻石材干掛分包合同范文一承包人(全稱)：_______________________ 分包人(全稱)：_______________________
依照《中華人民共和國合同法》、《中華人民共和國建筑法》、《巨力廣場施工總承包合同》及其它有關法律、行政法規(guī)，遵循平等、自愿、公平和誠實信用的原則，承包人(以下簡稱甲方)和分包人(以下簡稱乙方)雙方就分包工程施工事項經(jīng)協(xié)商達成一致，訂立本合同。
一、分包工程概況。
二、分包合同價款及承包方式：
金額：約伍佰陸拾壹萬元整。小寫：材裝飾面積330元/m2。 承包方式：設計及施工包工包料。
三、工期
1、合同工期
開工日期：本分包工程定于___年___ 月___日開工; 竣工日期：本分包工程定于___年___月___日竣工; 合同工期總?cè)諝v天數(shù)為：___天。
2、工期延誤：
因設計變更和工程量增加及一周內(nèi)非乙方原因的停水、停電或非乙方原因造成的工期延誤，甲方給予乙方工期順延，乙方要會同甲方項目部管理人員辦理工期延誤手續(xù);因乙方原因造成的工期延誤，甲方不予工期順延。
3、工期每拖延一天扣違約金
四、工程質(zhì)量標準
本分包工程質(zhì)量標準雙方約定為：____________。
五、工程各種費用和工程價款結(jié)算及支付方式。
1、工程結(jié)算：按照每月工程形象進度的70%支付，余23.5%待工程驗收合格后承包人和發(fā)包人(建設單位)辦理完竣工結(jié)算的一個月內(nèi)付清。留6.5%工程保修金，按照國家有關保修規(guī)定執(zhí)行。
2、支付方式：現(xiàn)金或轉(zhuǎn)賬支票支付工程款。
3、預借和決算承包費均由甲方施工項目經(jīng)理、工程管理部、預算部、材料部簽注意見，總經(jīng)理審批同意后方可由財務部辦理付款手續(xù)。
4、凡國家規(guī)定應由乙方承擔的有關稅、費由乙方自行繳納。
六、安全施工及安全事故處理
1、安全施工：乙方必須執(zhí)行國家和政府部門頒布的有關安全生產(chǎn)的法律、法規(guī)及各項規(guī)定，嚴格按照安全操作規(guī)范組織施工。乙方未按以上規(guī)范組織施工，造成機械傷害、觸電、高處墜落、火災等安全事故，由乙方負全部責任(包括法律責任、經(jīng)濟責任及其連帶責任)。
2、施工期間，乙方在安全管理方面，要嚴格依據(jù)《建筑安裝工人安全技術操作規(guī)程》和《建筑施工安全檢查標準(JGJ59-99)》及甲方的有關規(guī)章制度組織施工。
3、乙方組織的各工種工作人員必須執(zhí)行甲方現(xiàn)行的有關安全生產(chǎn)各項規(guī)章制度，接受“三級”安全教育，乙方負責人及特殊工程人員必須持證上崗，嚴禁出現(xiàn)“三違”現(xiàn)象。
4、乙方施工期間出現(xiàn)非甲方原因造成的居住、飲食(如食物中毒)、行為(如打架斗毆)等方面的人身傷亡事故，責任全部由乙方承擔(包括法律責任、經(jīng)濟責任及其連帶責任)。
5、乙方必須認真接受甲方及建設主管部門、政府其它有關部門的安全生產(chǎn)檢查，乙方自帶的施工機械設備在各方面必須符合國家規(guī)定，如：機械性能良好，安全防護裝置齊全、靈敏、有效等，同時必須按規(guī)定為作業(yè)人員配發(fā)合格的安全勞動防護用品。
6、乙方提供的機械設備及防護用品，如不符合產(chǎn)品質(zhì)量要求，在使用中出現(xiàn)安全事故，乙方承擔全部責任。
7、乙方對施工現(xiàn)場發(fā)生傷亡事故的傷員要及時護送至醫(yī)院全力進行搶救，在保護好現(xiàn)場的同時立即上報甲方項目部，在搶救傷員移動現(xiàn)場設施時，要做好記錄或拍照工作，不準破壞事故現(xiàn)場。乙方應積極配合甲方及當?shù)卣块T勘察現(xiàn)場和調(diào)查事故，不得提供偽證。
8、不管任何原因造成的傷亡事故都由乙方自行負責與甲方無任何關系，甲方不承擔任何責任(包括法律、經(jīng)濟責任及其連帶責任)。
七、甲方的權(quán)力和義務
1、甲方有權(quán)要求乙方嚴格按照設計文件、技術交底和國家有關施工規(guī)范進行施工，工程質(zhì)量符合本合同約定的質(zhì)量等級，達到國家建筑工程質(zhì)量等級驗評標準要求。遵守甲方的技術質(zhì)量管理制度，否則，乙方承擔由此造成的損失。
2、甲方有權(quán)要求乙方按合同約定的期限完成所承包的工程任務量，否則，由此造成的損失由乙方承擔。
3、甲方有權(quán)依據(jù)國家或政府部門制定的有關法律、法規(guī)、和定額標準及本公司管理程序文件等對乙方施工現(xiàn)場的安全生產(chǎn)、文明施工、材料消耗等進行統(tǒng)一管理、協(xié)調(diào)、調(diào)度，并有權(quán)進行監(jiān)督和控制。
4、甲方有權(quán)對乙方的違規(guī)行為提出限期整改要求，若乙方不能按要求整改或嚴重損害甲方利益和信譽時，甲方有權(quán)將乙方清退出施工現(xiàn)場，同時終止合同。
5、甲方負責向乙方提供水、電、臨設及配合施工的腳手架及垂直運輸設施。
八、乙方的權(quán)利和義務
1、乙方有權(quán)拒絕甲方下達的違反國家法律、法規(guī)及施工規(guī)范和安全操作規(guī)程的指令。
2、乙方有義務審查所屬工作人員的身份情況，保證人員的政治素質(zhì)、身體素質(zhì)和技術水平，不得雇用聾啞、智障、殘疾、無技術女工及不滿18周歲和超過55周歲的工人。
3、乙方有義務將其作業(yè)人員登記造冊(須寫明真實姓名、性別、年齡、籍貫、工種、級別、工作證號及身份證號)，并報甲方備案以備教育檢查。
4、在施工生產(chǎn)過程中，乙方應保證按期、按項、按量完成與甲方簽訂合同范圍內(nèi)的生產(chǎn)任務，服從甲方的統(tǒng)籌安排，統(tǒng)一調(diào)動。
5、乙方必須按施工圖紙進行施工，如有合理化建議報甲方審閱，經(jīng)審閱采納的建議，需辦理變更手續(xù)后方可變更。
6、乙方應對工人進行安全生產(chǎn)、文明施工、衛(wèi)生防疫及交通安全、明火作業(yè)、煤氣中毒等方面教育，乙方人員必須遵守甲方有關安全生產(chǎn)、消防保衛(wèi)、場容衛(wèi)生等規(guī)章制度，服從甲方有關人員的指導、教育、監(jiān)督和檢查，并及時向甲方提供有關情況和資料。
7、乙方要合理支付勞工工資，依法雇用和清退勞工，因拖欠勞工工資引起糾紛，一切責任由乙方承擔。
8、乙方遵守項目部制定的規(guī)章制度。
九、違約責任
本合同雙方不得違約，如有違約，由違約方承擔違約責任，并賠償給對方造成的經(jīng)濟損失。
十、附則
1、本合同一式四份，自雙方簽字(蓋章)后生效，雙方結(jié)清工程價款即終止。
2、本合同未盡事宜雙方另議。
承包人：(公章) 分包人：(公章)
年月日：
外墻石材干掛分包合同范文二一、工程概況
1、工程名稱： 2、工程地點：
3、承包范圍：外墻石材干掛及龍骨架安裝
4、開工日期：年月
5、竣工日期：
6、合同單價：元/m²
二、圖紙
1、效果圖由甲方提供，乙方可根據(jù)實際進行適當調(diào)整;
2、石材分割圖由乙方提供，費用由乙方負責。在施工過程中，乙方可根據(jù)現(xiàn)場施工實際情況進行相應的改動，解釋權(quán)歸乙方所有。
三、施工管理
1、甲方應該派代表駐工地，對施工現(xiàn)場不符合要求的部位及時提出異議，并進行協(xié)商整改;
2、在施工進行過程中，如果甲方代表不在或沒提出異議，過后所造成的損失應由甲方負責，因為乙方施工技術問題造成甲方的損失全部由乙方負責賠償。
3、乙方在施工過程中應當盡量提出一些合理化建議，一旦某些建議為甲方創(chuàng)造更多的利潤，甲方可以考慮給予乙方適當?shù)莫剟睢?/p>
三、物資供應
1、甲方負責全部材料的供應，并負責送達乙方指定的地點;
2、工程所需材料如因供應部門的規(guī)格品種、顏色或材質(zhì)不能滿足工程所需要求，必須以其他規(guī)格品種代替或人工加工處理石材切割和磨邊時，由于代用或加工而發(fā)生的量差、價差及加工費，由甲方負擔，每平米按原價算外增加費用由乙方書面提出，并由甲方代表現(xiàn)場審定簽字為準。
3、乙方負責提供小型石材切割機、鋼材切割機、鉆孔機、電焊機、紅外線測量儀等，甲方負責供應的主材、施工設備耗材、現(xiàn)場施工配電箱及主線、石材大型切割機、運輸設備等，如未按期供應或規(guī)格質(zhì)量不符要求等原因，經(jīng)雙方共同努力仍無法解決的，因此造成乙方的損失，由甲方負擔。
4、如石材加工沒有按圖紙料單加工，所造成的損失由甲方負責，比如石材沒磨邊倒角，由乙方加工甲方應按每米5元付給乙方。下料單由乙方負責，并經(jīng)過甲方代表審核。
五、安全
1、甲方對乙方承擔的工程要做安全交底，提出明確的安全要求，并進行監(jiān)督檢查，乙方必須認真貫徹有關安全施工的規(guī)章制度，嚴格遵守安全操作規(guī)程，對甲方提供的安全生產(chǎn)設施，乙方經(jīng)檢查合格方可使用，施工中如因違反上述規(guī)定而發(fā)生傷亡事故，其損失由乙方負責。
2、工人必須購買工傷意外保險方可以上崗作業(yè)，保險費用應不由工人負責。
3、勞動保護用品及施工中屬個人使用的帶電操作具如絕緣手套、膠靴等由乙方自行解決，如乙方確有困難，可提出需用計劃，甲方協(xié)助解決。
六、順延工期
在組織施工過程中，如遇下列情況，得順延工期，雙方應及時進行協(xié)商，并通過書面形式確定順延期限：
1、因天災或人力不能抗拒的原因被迫停工者;
2、因甲方提出變更計劃或變更施工圖而不能繼續(xù)施工者;
3、因甲方不能按期供圖、供料、供設備或其所供材料以及設備不合規(guī)格要求，被迫停工或不能順利施工者。
七、工資
1、按進度付款，進程一周開始支付生活費，工人工資根據(jù)形象進度付款80%支付，15天支付一次，甲方不能以任何理由推遲支付。
2、因為甲方的原因造成停工兩天以上時，甲方應通過協(xié)商解決工人的誤工費用。
2、工程完成后，甲方必須一次性付給乙方全部余款。
本合同自雙方簽字之日起生效，至工程全部竣工并結(jié)算完畢后失效。 發(fā)包甲方簽字： 承包乙方簽字：
聯(lián)系手機： 聯(lián)系手機：
年____月____日 年____月____日
外墻石材干掛分包合同范文三甲方：
乙方：
根據(jù)(中華人民共和國合同法)相關規(guī)定經(jīng)甲乙雙方協(xié)商，甲方將其所屬 外墻干掛石材工程承包給乙方具體協(xié)議如下：
一、工程概況
工程名稱：
工程地點：
工程內(nèi)容：外墻干掛石材單包工。
二、工期：自 年 月 日至 年 月 日 止。
三、工程要求：按甲方相關要求進行施工。遵守國家相關規(guī)定。 做到文明施工。必須服從甲方管理。
四、價格：按照實際發(fā)生面積每平方米55元計算。
五。、工程款支付方式
1乙方進入施工現(xiàn)場后，甲方付乙方生活費5000元
2甲方按每月工程進度70%支付乙方工程款。
3工程完成經(jīng)甲方驗收后，剩余工程款在15個工作日之內(nèi)一次性付清。
六、安全保證
乙方施工過程中按國家相關規(guī)定保證安全生產(chǎn)，加強現(xiàn)場安全管理，按要求施工，杜絕發(fā)生一切安全問題，若因為乙方?jīng)]有系安全繩，戴安全帽所發(fā)生的安全事故。有乙方自行負責。甲方概不負責。
七、違約責任
1、乙方必須按要求及現(xiàn)場施工規(guī)范標準施工。達到驗收標準，未到標準的及時采取補救措施和返工，費用由乙方負責。乙方必須按時完工。
2、甲方需按協(xié)議要求及時付款及配套輔助工作。如因甲方原因造成一切損失由甲方負責。
3、此協(xié)議簽訂后雙方均應認真履行，否則按合同法有關規(guī)定視為違約。
九、 此協(xié)議一式兩份，雙方簽字后生效，如有未盡事宜雙方另行簽訂補充協(xié)議。
十、1、輔助材料和安全設施由甲方提供。
2、工人保險費由乙方負責。
考古發(fā)掘現(xiàn)場(以下簡稱發(fā)掘現(xiàn)場)動態(tài)監(jiān)測系統(tǒng)由發(fā)掘現(xiàn)場動態(tài)環(huán)境監(jiān)測系統(tǒng)和發(fā)掘現(xiàn)場無線實時監(jiān)測平臺兩部分組成。
發(fā)掘現(xiàn)場無線實時監(jiān)測平臺發(fā)掘現(xiàn)場無線實時監(jiān)測平臺的作用是為發(fā)掘現(xiàn)場監(jiān)測子系統(tǒng)提供實時的數(shù)據(jù)支持,由發(fā)掘現(xiàn)場硬件平臺和發(fā)掘現(xiàn)場軟件平臺兩個部分組成。發(fā)掘現(xiàn)場無線實時監(jiān)測硬件平臺由傳感器節(jié)點、中繼節(jié)點和網(wǎng)關三個部分組成:布置在現(xiàn)場的數(shù)據(jù)采集節(jié)點負責采集實時環(huán)境數(shù)據(jù)(如大氣溫濕度、光照強度、降塵和有害氣體等),按照一定的路由規(guī)則將數(shù)據(jù)發(fā)送至通信范圍內(nèi)的父節(jié)點,然后通過中繼節(jié)點的相互中繼,將數(shù)據(jù)不斷轉(zhuǎn)發(fā)直至到達網(wǎng)關節(jié)點。網(wǎng)關節(jié)點通過遠程通信方式,如衛(wèi)星通信、Internet、GPRS等手段,將數(shù)據(jù)傳送至遠程客戶終端。其中各個數(shù)據(jù)采集節(jié)點和中繼節(jié)點根據(jù)RSSI(接收信號強度指示)和跳數(shù)來選擇合適的中繼節(jié)點作為父節(jié)點,并以此在數(shù)據(jù)采集節(jié)點和中繼節(jié)點間建立簇內(nèi)星狀網(wǎng)絡拓撲結(jié)構(gòu),中繼節(jié)點之間則根據(jù)RSSI值建立樹狀網(wǎng)絡拓撲結(jié)構(gòu)。每個傳感器節(jié)點和中繼節(jié)點在上電后自動加入網(wǎng)絡,并定期將采集到的數(shù)據(jù)沿最優(yōu)路由方向傳送至網(wǎng)關。發(fā)掘現(xiàn)場實時監(jiān)測軟件平臺則由中間件、數(shù)據(jù)庫和數(shù)據(jù)采集接口三個部分組成。數(shù)據(jù)采集接口將接收到的實時監(jiān)測數(shù)據(jù)存入數(shù)據(jù)庫中,中間件的作用則是將數(shù)據(jù)庫中保存的監(jiān)測數(shù)據(jù)取出,并提供給用戶和子系統(tǒng)。
發(fā)掘現(xiàn)場環(huán)境監(jiān)測系統(tǒng)由于監(jiān)測系統(tǒng)需要對發(fā)掘現(xiàn)場的內(nèi)外環(huán)境同時進行監(jiān)測,因此發(fā)掘現(xiàn)場監(jiān)測子系統(tǒng)由環(huán)境監(jiān)測子系統(tǒng)和氣象監(jiān)測子系統(tǒng)組成。環(huán)境系統(tǒng)檢測子系統(tǒng)主要是針對文物所處環(huán)境參數(shù),如大氣溫度、大氣相對濕度、土壤溫度、土壤水分含量、文物表面溫度、文物表面濕度、大氣二氧化碳濃度、有機揮發(fā)物總量等參數(shù)進行監(jiān)測。氣象監(jiān)測子系統(tǒng)主要是針對發(fā)掘現(xiàn)場所處小環(huán)境的氣象參數(shù),如光照度、紫外線強度、風速、風向、降雨量等參數(shù)的實時監(jiān)測。監(jiān)測系統(tǒng)的目的在于對文物所處環(huán)境的各種參數(shù)進行數(shù)據(jù)挖掘整理,精確掌握文物埋藏的環(huán)境參數(shù),實現(xiàn)對出土文物在第一時間的檢測分析以及文物出土環(huán)境參數(shù)的采集,建立環(huán)境參數(shù)歷史數(shù)據(jù)庫,為文物預防性保護提供技術支撐,并為文物保護措施的制訂提供科學依據(jù)。
案例研究
鳳棲原文物保存環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)分析鳳棲原張安世墓葬遺址屬于西漢宣帝時期的重臣、被封富平侯的大司馬將軍張安世。張安世在西漢的地位舉足輕重,其墓葬的出土文物進一步證實了這一點,出土的很多隨葬品都屬于西漢皇帝御賜物件。根據(jù)發(fā)掘現(xiàn)場實際狀況及需要,目前已部署七個監(jiān)測點,監(jiān)測時段大約在八個月左右,監(jiān)測點部署圖如下(圖4)。數(shù)據(jù)記錄及分析3月份期間,鳳棲原張安世墓葬遺址氣象站監(jiān)測數(shù)據(jù)存在較大波動(圖5)。其中3月19日-3月21日期間,環(huán)境溫度基本保持在4℃左右,環(huán)境濕度基本保持在100%,波動均不大,光照變化范圍也縮減至0-2000lx之間。結(jié)合當時的天氣變化,3月天氣剛剛由寒轉(zhuǎn)暖,氣候變化較頻繁,3月19日-3月21日是降雨天氣,持續(xù)陰天,光照度較低,導致空氣中水分蒸發(fā)較少。3月22日停止降水后,光照開始恢復,環(huán)境濕度逐漸下降,氣溫也逐漸回升(因水分揮發(fā)緩慢,恢復的較為遲緩)?？傮w來看,3月份氣象站的大氣溫度變化為0℃到23℃之間,大氣濕度在16%到75%之間,每天的照度變化最大范圍0lx到8500lx內(nèi),氣象站數(shù)據(jù)與環(huán)境數(shù)值較一致,溫度、濕度、光照度也保持合理的變化趨勢。環(huán)境變化正常,期間出現(xiàn)的特殊變化,多是天氣變化引起的。查看這一段時間82號監(jiān)測點的土壤溫度和含水量的變化,遺址坑內(nèi)的土壤溫度和土壤水分含量變化波動較大(圖6),其中3月19日-3月21日土壤水分含量逐漸升高(由4.34%上升至4.65%),土壤溫度也隨之逐漸降低(由10.5℃下降至5℃)。結(jié)合氣象站的監(jiān)測結(jié)果看,3月天氣變化頻繁,3月19日-3月21日為降雨天氣,室內(nèi)土壤雖然不直接受到降雨給監(jiān)測數(shù)據(jù)帶來的驟然變化,但由于受到外界土壤水分的滲透作用,土壤溫度和水分含量也隨之以相同的趨勢逐漸變化。3月22日停止降水后,土壤水分含量逐漸下降,土壤溫度也逐漸回升?？傮w來看,土壤溫度在5.2℃到13℃范圍之間、土壤含水在4.3%到4.65%范圍之間保持著較為穩(wěn)定的變化,并且二者保持相符的變化趨勢。期間出現(xiàn)的特殊變化,多是天氣變化引起的(可查看氣象站數(shù)據(jù)變化)。查看這一段時間90號監(jiān)測點的大氣溫濕度變化,3月期間遺址環(huán)境的大氣溫濕度波動較大(圖7)。其中3月19日-3月21日,大氣溫度由10℃驟降至1℃,大氣濕度由41%驟升至98%,變圖4監(jiān)測點部署圖化顯著。結(jié)合氣象站的監(jiān)測結(jié)果看,3月19日-3月21日為降雨天氣,大氣溫濕度受到直接影響帶來的突然變化。3月22日停止降水后,大氣溫度逐漸回升,大氣濕度也逐漸回落,監(jiān)測點數(shù)據(jù)準確反映了監(jiān)測區(qū)域的環(huán)境變化?？傮w來看,大氣環(huán)境溫度在1℃到22℃范圍內(nèi)、大氣環(huán)境濕度在20%-98%范圍內(nèi)保持著穩(wěn)定的變化,并且二者保持相符的變化趨勢。期間出現(xiàn)的特殊變化,多是天氣變化引起的(可查看氣象站數(shù)據(jù)變化)。查看這一段時間92號監(jiān)測點的大氣溫濕度變化,3月期間遺址環(huán)境的大氣溫濕度波動較大(圖8)。其中3月19日-3月21日,大氣溫度由10℃驟降至0℃,大氣濕度由50%驟升至100%,變化顯著。結(jié)合氣象站的監(jiān)測結(jié)果看,3月19日-3月21日為降雨天氣,大氣溫濕度受到直接影響導致突然變化。3月22日停止降水后,大氣溫度逐漸回升,大氣濕度也逐漸回落,監(jiān)測點數(shù)據(jù)準確反映了監(jiān)測區(qū)域的環(huán)境變化?？傮w來看,大氣環(huán)境溫度在0℃到22.5℃范圍內(nèi)、大氣環(huán)境濕度在20%-100%范圍內(nèi)保持著穩(wěn)定的變化,并且二者保持相符的變化趨勢。期間出現(xiàn)的特殊變化,多是天氣變化引起的(可查看氣象站數(shù)據(jù)變化)?？偨Y(jié)對比4個監(jiān)測點的數(shù)據(jù)變化,監(jiān)測點的傳感量數(shù)據(jù)變化和環(huán)境變化保持一致,并且與當時的天氣環(huán)境較一致,說明數(shù)據(jù)正確反映了監(jiān)測區(qū)域的環(huán)境變化。
高陵張棟家族墓文物保存環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)分析2011年陜西考古研究院專家在高陵縣涇河工業(yè)園發(fā)現(xiàn)一處罕見的完整明代家族墓園。據(jù)墓志記載,墓主人張棟生前為秦藩王府知印。這一發(fā)現(xiàn)對研究明代墓葬制度、風俗文化具有重要作用。根據(jù)發(fā)掘現(xiàn)場實際狀況及需要,目前已部署十一個監(jiān)測點,監(jiān)測點部署圖如下(圖9)。說明:100號監(jiān)測點:自動氣象站--監(jiān)測外界環(huán)境。52、53、54、55號監(jiān)測點:大氣溫濕度傳感器--其中53號監(jiān)測點監(jiān)測墓室底部到地表中間部位的環(huán)境,其他監(jiān)測點監(jiān)測墓室中的環(huán)境。61、62、63、64、65號監(jiān)測點:土壤溫度、土壤水分含量傳感器--其中65號監(jiān)測點監(jiān)測墓室底部到地表中間部位的環(huán)境,其他監(jiān)測點監(jiān)測墓室中的環(huán)境。71號監(jiān)測點:二氧化碳傳感器--監(jiān)測墓室中二氧化碳含量。數(shù)據(jù)記錄及圖形分析查看這一段時間52號監(jiān)測點的大氣溫濕度變化,5月期間遺址環(huán)境的大氣溫濕度波動較大(圖10)。其中5月1日-5月3日期間,濕度維持在82%-93%之間,溫度在17.5℃-22.5℃之間,基本保持在高濕、低溫的水平,晝夜溫差和濕度差較小;5月11日-5月12日溫度濕度和光照度驟變,濕度由62%升至88%,溫度由25℃降至最低17℃。
結(jié)合氣象站的監(jiān)測結(jié)果看,5月為春季末尾,氣溫總體呈緩慢上升趨勢,并偶爾伴隨降雨。5月1日-5月3日、5月11日-5月12日是降雨天氣,濕度很大,氣溫較低。無降水期間,光照逐漸充裕,環(huán)境濕度逐漸下降,氣溫也逐漸回升并呈上升趨勢?？傮w來看,當月大氣環(huán)境溫度在16℃到35℃范圍內(nèi)、大氣環(huán)境濕度在20%到98%范圍內(nèi)保持著穩(wěn)定的變化,并且二者保持相符的
變化趨勢。監(jiān)測點數(shù)據(jù)準確反映了監(jiān)測區(qū)域的環(huán)境變化。期間出現(xiàn)的特殊變化,多是天氣變化引起的(可查看氣象站數(shù)據(jù)進行對比)。查看這一段時間71號監(jiān)測點的二氧化碳含量變化,5月期間遺址環(huán)境的二氧化碳含量波動較大(圖11)。以5月9日為分界,5月1-9日二氧化碳含量在200-450ppm之間波動較大且均值偏高,5月9-20日二氧化碳含量在200-330ppm之間波動較小且均值偏低。經(jīng)調(diào)查,5月1-9日,71號監(jiān)測點放置于M4考古發(fā)掘現(xiàn)場,現(xiàn)場白天有大量工作人員活動,白天由人體排放的二氧化碳使得空氣中二氧化碳濃度較高,夜晚則恢復至正常水平;5月9日之后,為防止因挖掘工作破壞監(jiān)測設備,工作人員將其挪至無人活動的M5內(nèi),并以不透氣薄膜覆蓋,給71號監(jiān)測設備營造出密閉的微環(huán)境,故而二氧化碳含量偏低且波動較小。其中5月1日-5月3日期間,二氧化碳含量在300-430ppm之間變化幅度相對較小,基本保持在高濕、低溫、高濃度二氧化碳的水平。經(jīng)分析,因期間有降雨,空氣流通不暢,故而空氣中二氧化碳含量一直保持在較高水平且波動較小。結(jié)合氣象站的監(jiān)測結(jié)果看,監(jiān)測點數(shù)據(jù)準確反映了監(jiān)測區(qū)域的環(huán)境變化,并且三者保持相符的變化趨勢。期間出現(xiàn)的特殊變化,多是天氣變化引起的(可查看氣象站數(shù)據(jù)變化進行對比)。查看這一段時間53號監(jiān)測點的大氣溫濕度變化,5月期間遺址環(huán)境的大氣溫濕度波動較大(圖12)。其中5月1日-5月3日期間,濕度維持在60%-100%之間,溫度在16-28℃之間,基本保持在高濕、低溫的水平,晝夜溫差和濕度差相對較小;5月11日-5月12日溫度濕度和光照度驟變,濕度由62%升至100%,溫度由25℃降至最低17℃,之后的3天內(nèi),濕度的最高值均能達到100%。結(jié)合氣象站的監(jiān)測結(jié)果看,5月為春季末尾,氣溫總體呈緩慢上升趨勢,并伴隨偶爾降雨。5月1日-5月3日、5月11日-5月12日是降雨天氣,濕度很大,氣溫較低。無降水期間,氣溫呈緩慢上升趨勢。 結(jié)合監(jiān)測點的布設位置(53號節(jié)點布設在墓底部和地表中間位置),且通風不暢導致濕度在降雨之后的3天內(nèi)并沒有立即回落,而是逐漸降低且較其他監(jiān)測點數(shù)據(jù)高?？傮w來看,監(jiān)測點數(shù)據(jù)準確反映了監(jiān)測區(qū)域的環(huán)境變化,環(huán)境變化正常。期間出現(xiàn)的特殊變化,多是天氣變化引起的(可查看氣象站數(shù)據(jù)變化)。查看這一段時間65號監(jiān)測點的土壤溫度和含水量的變化,坑內(nèi)的土壤溫度和土壤水分含量變化波動較大(圖13),5月1-11日土壤水分含量保持在20-43%之間,土壤溫度變化范圍維持在18-21℃之間;5月12日土壤水分含量由15%突升至42%,土壤溫度峰值也由29℃大幅降至23.5℃,之后逐漸恢復至平均水平。經(jīng)調(diào)查,5月1-11日監(jiān)測設備放置于墓室內(nèi),故而受外界降雨等影響較小且緩慢,5月12日之后設備被挪至墓室外環(huán)境,由于當日有降雨,室外濕度較大,所以監(jiān)測數(shù)據(jù)突增?？傮w來看,土壤溫度在19.5℃到29.5℃之間、土壤含水率在15%到43%之間保持著較為穩(wěn)定的變化,并且二者保持相符的變化趨勢。期間出現(xiàn)的特殊變化,多是天氣變化引起的(可查看氣象站數(shù)據(jù)變化)。5月份期間,高陵張棟家族墓遺址內(nèi)氣象站監(jiān)測數(shù)據(jù)存在較大波動(圖14)。其中5月1日-5月3日期間,濕度維持在82-100%之間,溫度在15-23℃之間,照度在0-5000lx之間,基本保持在高濕、低溫、弱光照的水平,晝夜溫差和濕度差較小;5月11日-5月12日溫度濕度和光照度驟變,濕度由60%升至100%,溫度由22℃降至最低12℃,光照度變化范圍也縮減至0-4200lx。結(jié)合當時的天氣變化,5月為春季末尾,氣溫總體呈緩慢上升趨勢,并偶爾伴隨降雨。5月1日-5月3日、5月11日-5月12日是降雨天氣,持續(xù)陰天,光照度較低,氣溫降低。無降水期間,光照逐漸充裕,環(huán)境濕度逐漸下降,氣溫也逐漸回升并呈上升趨勢?？傮w來看,氣象站的大氣溫度在12-32.5℃之間,大氣濕度在18%-100%之間,照度變化最大范圍為0-9000lx,氣象站數(shù)據(jù)與環(huán)境數(shù)值較一致,溫度、濕度、光照度也保持合理的變化趨勢。環(huán)境變化正常,期間出現(xiàn)的特殊變化,多是天氣變化引起的?？偨Y(jié)對比4個監(jiān)測點的數(shù)據(jù)變化,監(jiān)測點的傳感量數(shù)據(jù)變化和環(huán)境變化保持一致,并且與當時的氣候環(huán)境較一致,說明數(shù)據(jù)正確反映了監(jiān)測區(qū)域的環(huán)境變化。
(二)普通高中學校招生錄取。普通高中錄取實行“分數(shù)優(yōu)先、依據(jù)志愿、參考評價、擇優(yōu)錄取”的辦法，各縣區(qū)教育局要按照下達招生計劃基數(shù)，劃定本區(qū)域內(nèi)普通高中錄取的最低控制分數(shù)線，劃線依據(jù)由各縣區(qū)考慮綜合因素確定，制定具體的錄取辦法，并經(jīng)縣區(qū)人民政府同意，報市教育局審核備案，提前向社會公布，統(tǒng)一組織轄區(qū)內(nèi)普通高中錄取工作。各縣區(qū)對在錄取最低控制分數(shù)線以上、志愿滑檔的考生，采取“分數(shù)優(yōu)先、征集志愿”的原則和辦法，在轄區(qū)內(nèi)有空缺招生計劃的普通高中學校中給予調(diào)整錄取，確保完成招生計劃。
市實驗中學單考單招。市藝術中學依據(jù)考生中考分數(shù)和志愿，結(jié)合藝術專業(yè)測試成績自主招生，由市教育局劃定文化課最低控制錄取分數(shù)線。
平川中恒學校除參加平川區(qū)域內(nèi)70%計劃統(tǒng)招而外的30%計劃、靖遠育才高級中學、白銀育正學校、白銀新干線高級中學和白銀陽光高級中學，在縣區(qū)下達招生計劃內(nèi)，依據(jù)中考分數(shù)面向白銀市自主招生，由所在縣區(qū)教育局劃定最低控制錄取分數(shù)線。
省級示范性普通高中學校不得錄取綜合素質(zhì)評價達不到“4A”的考生;市級示范和一般普通高中學校不得錄取達不到4C的考生。
不同類型的特長生錄取，按照招生學校、報考人數(shù)、招生計劃，由縣區(qū)教育局劃定不同的文化課最低控制錄取分數(shù)線，在達到文化課最低控制分數(shù)線要求的術科合格考生中，按考生術科成績從高到低的順序擇優(yōu)錄取。國家一級、二級運動員、競技型特長生以及在國家、省、市級各類體育競技、藝術展演中獲得團體、個人前三名的運動員、藝術特長生可不受文化課成績的限制(但必須參加中考考試)，向所在縣區(qū)教育局和報考學校提交獲獎證書等有關證明材料，經(jīng)審查屬實，可直接錄取。
各縣區(qū)普通高中統(tǒng)一錄取結(jié)束后，分學校張榜公示錄取結(jié)果。凡被學校張榜公布錄取的普通高中學生，要在學校規(guī)定的報名注冊期限內(nèi)，按時到校報名注冊。無故不按時到校報名注冊的學生，視為自動放棄入學，由此造成的后果由學生及家長負責。市教育局將依據(jù)學校和縣區(qū)教育局最終審核確認的實際報名注冊在校學生辦理學籍注冊手續(xù)。低于本縣區(qū)普通高中錄取最低控制分數(shù)線和其他亂挖生源違規(guī)招收的學生，市教育局不予注冊學籍，產(chǎn)生的一切后果由違規(guī)學校和學生自行承擔，并追究相關人員的責任。
抵押住房保障的對象是購房者的利益。保險公司按信用保證保險條款在購房者連續(xù)三個月無法按貸款合同規(guī)定還本付息而代為還貸， 一段時期之后， 保險公司要向借款人追償代付的欠款和利息， 如購房人無力償還債務， 則保險公司有權(quán)處置抵押房產(chǎn)， 這時購房人將在遭受天災人禍之后， 面臨著房產(chǎn)被抵押拍賣及流離失所的悲慘境地， 而這時能夠避免這種悲劇發(fā)生的險種就是住房抵押貸款壽險， 該項保險保障購房者因疾病或意外事故導致身故或傷殘時， 其家庭其他成員可使用保險公司所提供的保證金繼續(xù)按月歸還貸款， 直至本息歸還完畢。
抵押住房保險涉及購房借款人、保險公司、貸款銀行和房產(chǎn)開發(fā)商等不同利益主體，有助于抵押住房保險的順利實施，有助于當事各方在實踐中依法維護自身的合法權(quán)益。
一、抵押住房保險涉及到貸款銀行、借款人、保險公司三方， 他們之間有如下法律關系
1、貸款銀行與借款人之間是借款關系， 法律關系的基礎是借貸合同。
借款人向貸款銀行申請個人住房貸款的， 貸款銀行審核同意后會與借款人簽訂個人住房貸款合同， 由于個人信用制度不健全， 銀行為了保證債權(quán)的實現(xiàn)， 還會要求簽訂房屋抵押合同， 而為了進一步確保抵押物的安全， 又要求借款人將抵押房屋投保財產(chǎn)保險。
2、借款人與保險公司之間是保險關系， 法律關系的基礎是保險合同。
如前所述， 借款人根據(jù)貸款銀行的要求， 向保險公司投保抵押住房保險， 兩者形成一個保險合同的關系。從客觀情況來看， 抵押住房保險合同與抵押貸款合同中對抵押房屋保險的要求息息相關， 但從法律的角度來看， 兩者是相對獨立的， 并非主合同與從合同的關系。
3、貸款銀行與保險公司之間是關系， 法律關系的基礎是保險兼業(yè)協(xié)議。
為簡化手續(xù)， 保險公司通常委托銀行抵押房屋保險業(yè)務，并支付一定比例的傭金， 由此雙方便產(chǎn)生了兼業(yè)關系。此外， 銀行作為保險合同的受益人， 又成了保險合同中的關系人， 享有一定的權(quán)利和義務。根據(jù)借款人與保險公司之間的約定， 貸款銀行作為保險合同的第一受益人， 可以在發(fā)生保險事故時向保險公司提出就保險賠款優(yōu)先受償?shù)囊蟆３艘酝猓?貸款銀行與保險公司之間并無直接的法律關系。
二、投保抵押住房保險是否為購房借款人的必須合同義務
想必對于貸款銀行要求購房借款人為抵押住房辦理保險，有些人對此不理解，認為這違反了《保險法》關于不得強制保險的規(guī)定，對銀行和保險公司提出異議。對此，有些銀行或保險公司簡單地解釋為，是執(zhí)行中國人民銀行《個人住房貸款管理辦法》的規(guī)定。
的確，中國人民銀行在《個人住房貸款管理辦法》1中規(guī)定了購房借款人抵押住房時應辦理保險，但中國人民銀行這一管理辦法在法律性質(zhì)上屬于部門行政規(guī)章，不屬于人大制定的法律或國務院制定的行政法規(guī)，不能滿足保險法規(guī)定的只有法律或行政法規(guī)才能規(guī)定強制保險的條件，因此這一解釋在法律上是不具有說服力的。
然而實際上，購房借款人辦理保險不是銀行單方強制行為，而是購房借款人與貸款銀行自愿訂立的貸款合同約定的借款人義務。
購房人在積蓄不足的情況下，希望提前購房消費，為實現(xiàn)這一目的，購房人選擇向銀行申請貸款。在購房人與銀行協(xié)商訂立貸款合同時，銀行為了保證自身債權(quán)的實現(xiàn)，即確保發(fā)放的貸款能安全收回，依據(jù)擔保法要求購房借款人提供擔保作為發(fā)放貸款的條件之一。擔保可以采取保證、質(zhì)押或抵押等不同方式。例如，由房屋置業(yè)擔保公司為購房借款人提供保證；或由購房借款人將定期存單、債券等有價證券質(zhì)押給銀行；或由購房借款人將購得的住房抵押給銀行等。具體采用何種擔保方式可由借款人根據(jù)自身情況與貸款銀行協(xié)商確定。在雙方選擇了以抵押方式提供擔保后，銀行作為抵押權(quán)人根據(jù)擔保法可以要求抵押人即購房借款人采取適當措施保全用于抵押的住房的價值，抵押住房保險便是一種有效可行的保全住房價值的方式。因此，雙方在貸款合同中就約定了由購房借款人投保抵押住房保險。投保抵押住房保險與返還本金、支付利息、提供抵押一樣，都是借款人的合同義務。借款人在享受從銀行獲得貸款權(quán)利的同時承擔相應義務是等價有償?shù)墓浇灰仔袨?，完全符合民事法律要求的公平自愿原則。抵押住房保險是使購房借款人、銀行、保險公司和房產(chǎn)商都能從中獲利的多贏機制，理應得到包括購房借款人在內(nèi)的各方歡迎和支持。
需要提醒的是，銀行可以要求購房借款人投保抵押住房保險，但不能規(guī)定購房借款人必須向其指定的保險公司投保，銀行指定保險公司投保剝奪了借款人的選擇權(quán)，限制了保險公司之間的公平競爭，違反法律關于反不正當競爭的規(guī)定，購房借款人有權(quán)拒絕。由于此類行為曾受到處罰， 目前由于這種原因引起的糾紛已不多見。
三、如果抵押住房在交付購房人之前發(fā)生保險事故的，保險公司是否應當賠償
保險公司何時開始承擔保險責任，由保險條款規(guī)定或保險公司與投保人即購房貸款人雙方約定。
但有專業(yè)人士對保險生效日的規(guī)定存有異議，指出對于還貸保證保險，保險期限自貸款合同生效時開始是可以的，但對于財產(chǎn)損失保險，作同樣的規(guī)定就不合適了。因為從貸款合同生效銀行向房產(chǎn)商劃付貸款到房產(chǎn)商向購房人交付房屋或登記產(chǎn)權(quán)之間有一段間隔期間，如果是購買期房，這段期間會間隔得更長。在這期間由于未辦理產(chǎn)權(quán)登記，購房人對房屋不具有所有權(quán)，房產(chǎn)商未向購房人交付房屋前，購房人依合同法也無須承擔房屋毀損滅失的風險，因而購房人對房屋不具有法律上承認的利益，不符合保險法規(guī)定的投保人應對保險標的具有保險利益的要求，使得保險合同中的財產(chǎn)損失保險在此期間無效，即抵押住房在交付購房人之前發(fā)生保險事故的，保險公司不負責賠償。
這種觀點有一定的道理，但忽視了一個重要事實，即購房人在辦理貸款手續(xù)和保險手續(xù)之前，已與房產(chǎn)商訂立了房屋買賣合同，購房人在自付了首付款和通過銀行支付了約定房款后，依購房合同其對房產(chǎn)商就享有了債權(quán)，債權(quán)的內(nèi)容為房產(chǎn)商須按合同約定向購房人交付約定的房屋。如果抵押房屋在交付購房人之前發(fā)生毀損滅失，將直接造成對購房人債權(quán)的損害，所以在抵押住房交付購房人之前購房人對該房屋具有保險利益，購房人是否占有該房屋并不影響保險合同的效力。即使房產(chǎn)商還未交房，如抵押房屋發(fā)生保險事故造成損失時，購房借款人也可以請求保險公司賠償損失。
因此，抵押住房在交付購房人之前發(fā)生保險事故的，保險公司應當賠償。
總之，穩(wěn)定完善的抵押住房貸款保險體系在房地產(chǎn)保險的發(fā)展中具有不容忽視的作用。以美國為例，其實行的是非營利性的政府機構(gòu)和私營商業(yè)保險公司共同構(gòu)成的住房抵押貸款保險體系。這種政策性和商業(yè)性保險相結(jié)合，共同分擔風險的模式，使其有效地應對住房抵押貸款中可能存在的風險。
目前，住房抵押貸款保險體系在我國有一定的基石，如保險法和房地產(chǎn)法中相關的規(guī)定，但因為其突出的重要地位而所需求的專門的調(diào)制規(guī)范還沒有建立，因此一直沒有得到完善。我國政府應在完善政策法規(guī)加強監(jiān)督力度和設置政策性保險機構(gòu)等方面深入?yún)⑴c到房地產(chǎn)保險市場中?？梢曰诂F(xiàn)行部門規(guī)章及各地政府管理辦法中存在的缺陷，建立與完善房地產(chǎn)保險相關政策法規(guī)；可以為保障房地產(chǎn)保險市場的有序發(fā)展，保險監(jiān)管部門應加大監(jiān)管力度；可以探索設立政策性房地產(chǎn)保險機構(gòu)，房地產(chǎn)保險機構(gòu)的設置是否恰當合理，關系到我國房地產(chǎn)市場的持續(xù)正常發(fā)展。
【關鍵詞】 骨髓間充質(zhì)干細胞；軟骨細胞；共同培養(yǎng)技術；脫鈣骨基質(zhì)；關節(jié)軟骨修復
Fullthickness articular cartilage defect repairment by coculture of autogenic bone marrowderived mesenchymal stem cells with chondrocytes and implantation into allogenic demineralized bone matrix in rabbits
【Abstract】 AIM: To investigate the feasibility of articular cartilage defect repairment by coculture of autogenic bone marrowderived mesenchymal stem cells(BMSCs) with chondrocytetes and implantation into allogenic demineralized bone matrix(DBM)， evaluate the outcomes of repairment in order to provide a theoretical basis for optimizing cell resources for seeding. METHODS: Twopassaged BMSCs and chondrocytes were collected both at a concentration of 5×109/L and then cocultured at 2∶1. Articular cartilage defects in the knee joints of rabbits repaired by the cocultured cells seeded into allogenic DBM served as experimental group A， by simple DBM as control group B and by nothing as control group C. Repaired tissues were evaluated with macroscopic observation，histological scores and immunohistochemical staining at week 8 and 16 after transplantation. RESULTS: Chondrocytes cocultured became rich in extracellular matrix and proliferated promptly. The ratio of chondrocytes to BMSCs achieved above 1∶1 at 5-7 d after coculture.In the experimental group A repaired tissues represented hyaline，smooth and flat. Chondrocytes in the zones of integrating with peripheral native cartilages were more mature. In the control group B and C， repaired tissues were fibers.Histological scores indicated that experimental group A excelled group B and C， and the differences were statistically significant(P0.05). Immunohistochemical staining showed that cells in the zones of repaired tissues were larger in size， arranged columnnedly， rich in typeⅡcollagen matrix and integrated satisfactorily with native adjacent cartilages and subchondral bones in the experimental group A at week 16 postoperatively. CONCLUSION: Coculture of autogenic BMSCs with chondrocytes can promote the proliferation of chondrocytes and the production of chondral matrix. Cocultured cells for seeding can save a number of chondrocytes， shorten culture periods and reduce subculture times. Cocultured cells embedded into DBM can repair articular cartilage defects effectively.
【Keywords】 bone marrowderived mesenchymal stem cells; chondrocytes; coculture techniques; demineralized bone matrix; articular cartilage repair
【摘要】 目的： 探討自體骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)與軟骨細胞共培養(yǎng)復合同種異體脫鈣骨基質(zhì)（DBM）修復關節(jié)軟骨缺損的可行性，評價修復效果，為優(yōu)化種子細胞源提供依據(jù). 方法： 取濃度為5×109/L的第二代BMSCs和軟骨細胞，按2∶1比例混勻共培養(yǎng)作為種子細胞. DBM與共培養(yǎng)細胞復合植入修復為實驗組（A組），單純材料DBM組（B組）和不處理組（C組）作為實驗對照組. 移植8和16 wk后經(jīng)大體觀察、組織學評分和免疫組化染色評價缺損修復. 結(jié)果： 共培養(yǎng)的軟骨細胞基質(zhì)合成豐富，細胞增殖快，共培養(yǎng)5～7 d兩種細胞比例達1∶1以上. A組缺損修復組織呈軟骨樣，表面光滑平坦，與周圍軟骨整合的軟骨細胞更為成熟. B組和C組的修復組織呈纖維組織. 組織學評分表明A組優(yōu)于B， C兩組，差異具有統(tǒng)計學意義（P0.05）. 免疫組化染色顯示A組修復組織的細胞為透明軟骨樣細胞，柱狀排列，Ⅱ型膠原染色陽性，與周圍軟骨及軟骨下骨整合良好. 結(jié)論： 自體BMSCs與軟骨細胞共培養(yǎng)，BMSCs能增強軟骨細胞的增殖，促進軟骨細胞基質(zhì)合成，縮短軟骨細胞培養(yǎng)時間和減少傳代次數(shù)，可節(jié)省大量的軟骨細胞，與DBM復合后能有效修復關節(jié)軟骨缺損.
【關鍵詞】 骨髓間充質(zhì)干細胞；軟骨細胞；共同培養(yǎng)技術；脫鈣骨基質(zhì)；關節(jié)軟骨修復
0引言
關節(jié)軟骨缺損自身不能有效修復，組織工程技術為解決這一難題提供了新的思路. 但由于軟骨細胞來源不足嚴重制約了其應用［1］. 以自體軟骨細胞作為種子細胞，取材部位受限，軟骨細胞培養(yǎng)增殖能力低，傳代培養(yǎng)容易引起老化和去分化［2］，而成體骨髓中骨髓間充質(zhì)干細胞（bone marrow mesenchymal stem cells， BMSCs）含量少，隨傳代次數(shù)的增多，成軟骨潛能明顯降低， Rubio等［3］研究證實BMSCs多次傳代培養(yǎng)有致瘤傾向. 我們應用自體BMSCs和軟骨細胞共培養(yǎng)復合同種異體脫鈣骨基質(zhì)（demineralized bone matrix， DBM）修復兔膝關節(jié)軟骨全層缺損，并對修復組織進行評價，為優(yōu)化種子細胞源提供實驗依據(jù).
1材料和方法
1.1材料DMEM培養(yǎng)基（美國Gibco公司）；胎牛血清（FBS）（杭州四季青生物公司）；CO2孵育箱（恒溫培養(yǎng)箱，日本Sony公司）；膠原酶（美國Sigma公司）；相差顯微鏡（日本BH2型Olympus顯微鏡）；Ⅱ型膠原免疫試劑盒（武漢博士德生物公司）；青紫蘭兔（衛(wèi)生部蘭州生物制品研究所提供）.
1.2方法
1.2.1BMSCs與軟骨細胞共培養(yǎng)取本研究所實驗室培養(yǎng)的第二代自體BMSCs，濃度為5×109/L的懸浮液1 mL和相同濃度的軟骨細胞懸液0.5 mL （2∶1）混勻，用含150 mL/L FBS的DMEM培養(yǎng)基在37℃飽和濕度條件下的CO2孵育箱中進行共培養(yǎng)，待細胞匯合至單層用2.5 g/L胰酶消化與同種異體DBM復合.
1.2.2同種異體DBM的制備處死同種青紫藍兔，取四肢骨干骺端及椎體松質(zhì)骨，剔除附著的肌肉及骨膜，-80℃冰柜中凍存72 h，參照文獻［4］的方法進行脫鈣后，再將骨塊置于乙醚和乙醇中脫脂各24 h，用無菌蒸餾水反復沖洗浸泡至中性，自然干燥后環(huán)氧乙烷消毒，4℃保存?zhèn)溆?
1.2.3動物模型與實驗分組3～6個月齡的青紫蘭兔54只，體質(zhì)量1.0～1.5 kg，雌雄不限. 取膝關節(jié)內(nèi)側(cè)弧形切口，向外翻開髕骨暴露膝關節(jié)，于股骨滑車關節(jié)面上用φ4 mm鉆頭鉆孔，深度約3～4 mm穿透軟骨下骨，有阻力感見新鮮血液溢出，造成全層關節(jié)軟骨缺損模型. 將動物隨機分為A， B， C三個處理組，每組18只. A組于軟骨缺損處植入共培養(yǎng)細胞DBM（細胞均為自體細胞）；B組單純植入DBM；C組不作任何植入.
1.2.4指標觀察相差顯微鏡下觀察共培養(yǎng)細胞的形態(tài)和增殖，并對共培養(yǎng)細胞爬片進行番紅0染色. 每組移植術后8和16 wk分別處死9只動物，取出膝關節(jié)對修復組織分別進行大體、組織學和免疫組織化學觀測. 參照文獻［5］的評分標準，對術后8和16 wk各組動物分別進行組織學評分
統(tǒng)計學處理： 應用SPSS10.0軟件包對所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理，各組間差異采用單因素方差分析，P＜0.05認為差異有統(tǒng)計學意義.
2結(jié)果
2.1共培養(yǎng)細胞形態(tài)學觀察共培養(yǎng)細胞24 h后逐漸貼壁，軟骨細胞呈橢圓形或三角形，大部分居混合細胞的中央，表面光滑，細胞體積變大，胞質(zhì)增多，細胞數(shù)量多增殖旺盛，細胞外基質(zhì)合成豐富被番紅0均勻染色;BMSCs細胞體積無明顯增大，散在于共培養(yǎng)細胞中，表面呈成纖維細胞樣染色陰性，所占比例逐漸降低. 共培養(yǎng)5～7 d，軟骨細胞與BMSCs比例達1∶1以上（圖1）.
圖1BMSCs和軟骨細胞共培養(yǎng)番紅0染色×200(藍色箭頭示軟骨細胞，紅色箭頭示BMSCs)（略）
2.2大體標本觀察術后所有動物切口愈合良好，關節(jié)液清亮，關節(jié)腔無粘連、滑膜增生、關節(jié)游離體及骨贅形成. A組： 術后8 wk缺損已由半透明、淡紅色組織填充，邊界模糊，表面光滑；16 wk與周圍軟骨色澤相近，表面平整（圖2）. B組： 術后8 wk缺損區(qū)修復組織為乳白色，表面不光整，部分仍呈空洞；16 wk為纖維性修復. C組：術后8 wk缺損區(qū)為纖維樣組織覆蓋，色澤暗灰；16 wk周圍軟骨呈蟲蝕樣改變.
2.3組織學觀察A組： 術后8 wk修復組織細胞較多，以圓形透明軟骨樣細胞為主，有軟骨陷窩，表層有梭形成纖維樣細胞，與周圍軟骨結(jié)合，基底部較多新生骨形成；16 wk修復組織為透明軟骨樣，厚度接近正常，與周圍軟骨結(jié)合好，深層軟骨鈣化，與底層骨結(jié)合緊密，基質(zhì)著色正常，未見DBM殘留（圖3）. B組： 術后8 wk缺損組織細胞較少，細胞層次排列差；16 wk修復組織菲薄，呈纖維樣，與周圍軟骨未結(jié)合，基底部有少量新生骨形成. C組： 術后8 wk缺損組織有薄層纖維組織覆蓋；16 wk缺損區(qū)纖維組織進一步增厚，與周圍軟骨未結(jié)合. 術后8和16 wk A組評分均優(yōu)于B， C組（P0.05）.
圖2共培養(yǎng)細胞DBM修復關節(jié)缺損的大體觀察(箭頭示修復部位)（略）
圖3共培養(yǎng)細胞DBM組修復關節(jié)缺損的組織學觀察甲苯胺蘭染色×200(箭頭示修復組織)（略）
2.4免疫組織化學術后16 wk時A組修復組織中細胞呈圓形或橢圓形，形體大柱狀排列，與周圍軟骨及軟骨下骨整合良好，細胞質(zhì)和細胞外間質(zhì)中Ⅱ型膠原染色陽性，出現(xiàn)棕黃色顆粒（圖4）；B組和C組修復組織未出現(xiàn)黃染的陽性區(qū)域.
圖4免疫組織化學染色檢測共培養(yǎng)細胞DBM組修復組織的Ⅱ型膠原DAB染色×100(箭頭示修復組織)（略）
3討論
關節(jié)軟骨組織代謝活性較低，創(chuàng)傷和手術等所致的軟骨損傷或缺損難以自我修復或以纖維組織填充替代，影響關節(jié)功能的恢復. 細胞生物學和生物材料技術的發(fā)展，應用組織工程技術修復軟骨缺損成為可能，但是至今尚無一種細胞能完全滿足軟骨組織工程對種子細胞的要求［6］. Tsuchiya等［7］用人BMSCs與牛軟骨細胞按不同比例混合進行共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)軟骨細胞的增殖速度和細胞外基質(zhì)的合成與BMSCs的比例呈正相關. 我們通過BMSCs與軟骨細胞體外共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，共培養(yǎng)的軟骨細胞比單獨培養(yǎng)的同代軟骨細胞體積大，增殖速度加快，有大量成熟的軟骨陷窩形成和基質(zhì)合成，說明BMSCs能促進軟骨細胞的增殖和表型維持，因此，共培養(yǎng)使軟骨細胞快速增殖，這就節(jié)省了軟骨細胞的用量，避免了為獲取足夠量的軟骨細胞反復傳代培養(yǎng)而引起的軟骨細胞老化和去分化［2］. 而BMSCs體積變化不明顯或輕度縮小，并且連續(xù)培養(yǎng)后兩種細胞的比例仍可保持在2∶1左右，說明軟骨細胞和BMSCs的增殖速度相接近，這與Tsuchiya等［7］的結(jié)果相似，這是否由軟骨細胞將BMSCs誘導成或?qū)⒎只癁檐浌羌毎⒑铣杉毎饣|(zhì)，尚需進行深入研究.
單獨BMSCs在非軟骨環(huán)境下并不能構(gòu)建出軟骨組織，而用20%以上的少量軟骨細胞與BMSCs共培養(yǎng)可構(gòu)建出成熟的工程化軟骨，并且在軟骨濕重、糖胺多糖含量和軟骨特異性基質(zhì)表達等方面都優(yōu)于相同數(shù)量的軟骨細胞構(gòu)建的軟骨，比用單獨軟骨細胞構(gòu)建軟骨組織可減少60%～80%的軟骨細胞量，為解決軟骨細胞來源不足提供了切實可行的途徑［8］. 研究表明BMSCs和軟骨細胞共培養(yǎng)期間TGFβ3， BMP2， IGF1和FGF2等生長因子表達增加5.4～11.6倍不等，增強的活性因子介導軟骨細胞旁分泌或自分泌，可能是促進軟骨細胞增殖和表型維持的主要因素之一，Goldberg等［9］應用含血清和TGFβ的培養(yǎng)基分別培養(yǎng)軟骨細胞進行比較，結(jié)果也顯示TGFβ能使去分化的軟骨細胞重新分化和表型的維持，但具體的信號傳導及其途徑尚不清楚［10-12］.
我們應用BMSCs和軟骨細胞共培養(yǎng)與DBM復合移植修復關節(jié)軟骨缺損，修復組織內(nèi)細胞形態(tài)類似于透明軟骨細胞，細胞周圍有軟骨陷窩形成，免疫組化結(jié)果顯示為Ⅱ型膠原纖維，證實了修復組織為透明樣軟骨. 共培養(yǎng)復合物中的BMSCs直接分化為骨細胞直接與周圍的軟骨下骨進行骨與骨的整合，比單獨培養(yǎng)的軟骨細胞與軟骨下骨結(jié)合更加牢固，但修復組織與周圍正常軟骨仍有差別，主要表現(xiàn)為細胞數(shù)量多且排列紊亂，術后16 wk細胞數(shù)量減少并出現(xiàn)了柱狀排列趨勢，更接近于正常軟骨組織，可能是術后不限制關節(jié)活動，修復組織在局部應力作用下發(fā)生改建所致［13］. B組軟骨缺損基底部也有新骨形成，是由于載體材料的存在使髓腔或松質(zhì)骨中的MSCs駐留在損傷區(qū)底部，進而分化成少量骨組織［14］.
我們應用的同種異體DBM是經(jīng)冷凍、脫脂、脫鈣、去蛋白處理得到的產(chǎn)物，抗原性消除或大大降低，且保留了誘導軟骨形成的生長因子和膠原等基質(zhì)，有利于細胞增殖和分化. DBM為多孔海綿樣結(jié)構(gòu)，可提供寬大空間容納大量的種子細胞，利于細胞黏附、細胞外基質(zhì)沉淀、營養(yǎng)和氧氣的進入以及代謝產(chǎn)物的排出. DBM植入缺損部位后第四周開始吸收，完全吸收需8～12 wk，而軟骨形成需6～8 wk，因此DBM吸收和軟骨形成幾乎同步. 根據(jù)修復部位的不同可調(diào)整脫鈣時間，或部分脫鈣和表面脫鈣，能適應不同部位的生物力學強度要求. 按修復缺損的形狀可剪成不同的形狀和大小，應用方便. 同種異體DBM制備方法相對簡便可大量獲取，低溫下可長期保存建立DBM骨庫備用. 因此，DBM是一種理想的軟骨組織工程支架材料［4，15］.
BMSCs和軟骨細胞共培養(yǎng)，兩種細胞相互促進增殖和分化，作為種子細胞可減少軟骨細胞增殖傳代次數(shù)并節(jié)省軟骨細胞數(shù)量，與DMB復合能有效修復關節(jié)軟骨缺損，為優(yōu)化種子細胞源提供了實驗依據(jù)，但是共培養(yǎng)的兩種細胞間相互作用的機制及其調(diào)節(jié)機制尚不清楚，并且本實驗的動物模型是在正常關節(jié)面上造成缺損區(qū)進行的修復，有別于臨床上常見的大面積不規(guī)則缺損，因此對這些問題需要進一步研究和改進.
【參考文獻】
［1］ 劉松波，胡蘊玉，徐虎，等. 柱形藻酸鈣載體復合細胞修復異體兔膝關節(jié)軟骨缺損［J］. 第四軍醫(yī)大學學報，2001，22 (11):1010-1013.
［2］ Marlovits S， Hombauer M， Truppe M， et al. Changes in the ratio of typeⅠand typeⅡcollagen expression during momolayer culture of human chondrocytes［J］. J Bone Joint Surg(Br)， 2004，86（5）:286-295.
［3］ Rubio D， GarciaCastro J， Martin MC， et al. Spontaneous human adult stem cell transformation［J］. Cancer Res， 2005，65（6）:3035-3039.
［4］ 李強，孫正義，王栓科，等. 骨髓間充質(zhì)干細胞復合脫鈣骨基質(zhì)修復兔膝關節(jié)全層軟骨缺損的實驗［J］. 第四軍醫(yī)大學學報，2004，25（15）:1375-1378.
［5］ Pineda S， Pollack A， Stevenson S， et al. A semiquantitative scale for histologic grading of articular cartilage repair［J］. Acta Anat (Basel)， 1992，143（3）:335-340.
［6］ Vats A， Tolley NS， Polak JM. The stem cell in orthopaedics surgery［J］. J Bone Joint Surg(Br)， 2004，86（2）:159-163.
［7］ Tsuchiya K， Chen G， Ushida T， et al. The effect of coculture of chondrocytes with mesenchymal stem cells on their cartilaginous phenotype in vitro［J］. Mater Sci Eng， 2004，24:391-396.
［8］ 周廣東，苗春雷，王曉云，等. 軟骨細胞與骨髓基質(zhì)細胞共培養(yǎng)體外軟骨形成的實驗研究［J］. 中華醫(yī)學雜志，2004，84（20）:1716-1720.
［9］ Goldberg AJ， Lee DA， Bader DL， et al. Autologous chondrocytes implantation: Culture in a TGFβcontaining medium enhances the reexpression of a chondrocytic phenotype in passaged human chondrocytes in pellet culture［J］. J Bone Joint Surg(Br)， 2005，87（1）:128-134.
［10］ Jakob M， Demarteau O， Schafer D， et al. Specific growth factors during the expansion and redifferentiation of adult human articular chondrocytes enhance chondrogenesis and cartilaginous tissue formation in vitro［J］. J Cell Biochem， 2001，81（4）:368-377.
［11］ Rosier RN， OKeefe RJ， Crabb ID， et al. Transforming growth factor beta: An autocrine regular of chondrocytes［J］. Connect Res， 1989，20(4):295-301.
［12］ Sekiya I， Vuoristo JT， Larson BL， et al. In vitro cartilage formation by human adult stem cells from bone marrow stroma defines the sequence of cellular and molecular events during chondrogenesis［J］. Proc Natl Acad Sci USA， 2002，99（5）:4397-4402.
［13］ Shapiro F， Koide S， Glimcher MJ. Cell origin and differentitation in the repair of fullthickness defects of articular cartilage［J］. J Bone Joint Surg(Am)， 1993，75（5）:532-553.
［14］ Im GI， Kim DY， Shin JH， et al. Repair of cartilage defect in the rabbit with cultured mesenchymal stem cells from bone marrow［J］. J Bone Joint Surg(Br)， 2001，83（2）:289-294.
[關鍵詞]祁州漏蘆；H2O2；氧化應激；凋亡；HepG2
[Abstract]To study the inhibitory effect of Rhaponticum uniflorum on apoptosis induced by H2O2 in HepG2 cells Human HepG2 cells injury models were established by H2O2， then cell survival rate was assayed by MTT method； levels of LDH， ALT， and AST were detected by chemical colorimetric method；SOD activity was detected by xanthine oxidase method； GSH content was detected by dithiobisnitrobenzoic acid（DTNB）； MDA level was detected by thiobarbituric acid （TBA） method；and the relative activities of Caspase3， 8 and 9 were measured by Colorimetry The expression levels of Cleaved Caspase3（Casp3）， cytochrome（Cyto c）， NFκB， ERK， JNK， p38 MAPK， as well as the phospharylated proteins were determined with Western blotting method The results showed that R unifloru had no significant effect on cell viabilities of HepG2 cells at the concentrations of 25400 mg?L-1 However， H2O2decreased the cell viabilities， increased the cellular oxidative stress， and upregulated the protein expressions of Casp3， cytoplasmic Cyto c， pJNK and nuclear NFκB As compared with the model group，R unifloru could increase the cell viability， reduce LDH， ALT and AST leakage， reduce the MDA formation， increase the SOD and GSH levels，reduce the relative activities of Caspase3， 8 and 9， downregulated the protein expressions of Casp3 and cytoplasmic Cyto c， and downregulate the pJNK and nuclear NFκB levelsThe results indicated that R unifloru had the inhibitory effect on apoptosis induced by H2O2in HepG2 cells， and the mechanism maybe associated with inhibiting JNK activation and NFκB nuclear translocation
[Key words]Rhaponticum unifloru； H2O2； oxidative stress； apoptosis； HepG2
近年碭尾》⑸率的逐年上升已經(jīng)引起社會的關注，而活性氧引發(fā)的肝細胞氧化應激是多種肝病發(fā)生的重要機制之一，因此，探討如何有效緩解氧化應激損傷對肝病的防治具有重要意義[1]。祁州漏蘆是菊科植物Rhaponticum uniflorum （L） DC的干燥根，是一味常用中藥。廣泛分布于我國內(nèi)蒙古、東北、山東等地區(qū)，藥源豐富。它性味咸、苦、寒，能清熱解毒，消腫排毒，通乳汁；主治于乳汁不通、淋巴結(jié)結(jié)核、風濕性關節(jié)炎、痔瘡等[23]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，祁州漏蘆具有提高機體免疫、抗動脈硬化、抗脂質(zhì)過氧化、抗衰老、抗炎等作用[46]。課題組研究還發(fā)現(xiàn)，祁州漏蘆具有良好的保肝作用，能預防多種因素引起的肝損傷，如，可抑制四氯化碳、氨基半乳糖所致化學性肝損傷以及對乙酰氨基酚所致藥物性肝損傷等[79]。本實驗通過建立H2O2致HepG2細胞損傷模型，預防性給藥后觀察祁州漏蘆水提物對氧化損傷所致凋亡以及凋亡相關蛋白表達的變化，以便探討祁州漏蘆肝細胞損傷的保護作用機制，為祁州漏蘆的保肝作用研究提供參考。
1材料
11藥物與試劑將祁州漏蘆切碎后加水煎煮，濾液經(jīng)減壓蒸餾即得祁州漏蘆提取物（RU）干品，主要成分為多糖（81%）和甾酮（12%）[6]；用無血清培養(yǎng)液配成所需濃度，過濾除雜除菌備用。人HepG2肝癌細胞購自南京凱基生物有限公司。DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清購自Gibco公司；MTT購自SigmaAldrich公司； LDH，ALT，AST，MDA，GSH，SOD試劑盒購自南京建成科技有限公司；Caspase3，8，9檢測試劑盒、線粒體/細胞核制備試劑盒購自江蘇凱基生物技術股份有限公司；兔NFκB p65多克隆抗體、兔pNFκB p65多克隆抗體、小鼠ERK多克隆抗體、兔pERK多克隆抗體、兔JNK多克隆抗體、兔pJNK多克隆抗體、兔p38多克隆抗體、兔pp38 MAPK多克隆抗體購自Abcam公司；兔Cleaved Caspase3（Casp3）單克隆抗體、兔細胞色素c（Cyto c）單克隆抗體購自Cell Signaling公司。
12儀器二氧化碳培養(yǎng)箱（美國Shellab公司）；臺式高速冷凍離心機（德國Eppendorf公司）；酶標儀（深圳雷杜公司）；垂直版電泳儀及轉(zhuǎn)印槽（美國BioRad公司）；凝膠成像分析儀（美國UVP公司）。
2方法
21細胞培養(yǎng)及傳代細胞培養(yǎng)和傳代按常規(guī)方法進行，含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基，37 ℃，5%CO2的飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，取對數(shù)生長期細胞用025%胰蛋白酶溶液消化進行傳代[10]。
22RU試驗劑量的確定細胞接種于96孔板中培養(yǎng)12 h后，正常組換成無血清培養(yǎng)液；其余6組為藥物組，加RU溶液使其質(zhì)量濃度分別為25，50，100，200，400，800 mg?L-1。繼續(xù)培養(yǎng)24 h，吸出培養(yǎng)液，加入MTT溶液，MTT法檢測細胞存活率。另設空白孔（只加RU溶液）以排除藥物干擾[10]。以細胞存活率（100±5）%為標準確定RU安全濃度[1011]。細胞存活率=（實驗組-空白組）/（正常組-空白組）×100%。
23細胞損傷模型的建立和細胞存活率的檢測細胞接種于96孔板，培養(yǎng)12 h細胞全部貼壁后，分為正常組、模型M及RU高、中、低劑量組（分別為RU 200，RU 100和RU 50組，質(zhì)量濃度分別為200，100，50 mg?L-1）。RU組加入相應的含藥培養(yǎng)液，孵育24 h；正常組和模型組加入無血清培養(yǎng)液繼續(xù)孵育24 h；除正常組外，其余組加入300 μmol?L-1 H2O2造模[12]。MTT法檢測細胞存活率。
24細胞培養(yǎng)液中LDH，ALT，AST釋放的檢測細胞分組、造模和給藥按23項方法。按試劑盒說明書檢測培養(yǎng)液中LDH，ALT，AST的活性。
25細胞MDA，GSH生成和SOD活性的檢測按23項方法將細胞在6孔板中分組、造模和給藥。細胞用025%的胰酶消化，收集細胞并裂解，離心取上清。按照試劑盒說明書檢測細胞MDA，GSH水平和SOD活性。
26細胞Caspase3，8，9的相對活性的測定裂解細胞，離心取上清，并按照試劑盒說明書測定細胞Caspase3，8，9的相對活性。
27細胞Casp3，Cyto c，NFκB，ERK，JNK，p38蛋白及其磷酸化蛋白水平的檢測收集和裂解細胞，并提取細胞總蛋白。每組以20 μg蛋白進行SDSPAGE電泳分離，轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。用脫脂奶粉封閉，加一抗孵育過夜，加HRP標記二抗孵育1 h，加ECL試劑顯色，采集圖像并進行灰度比值分析[67]。
28統(tǒng)計學處理數(shù)據(jù)以±s表示，采用SPSS 190統(tǒng)計軟件，采用單因素方差分析及t檢驗進行數(shù)據(jù)處理。
3結(jié)果
31RU對HepG2細胞生長的影響隨著RU濃度的升高，細胞存活率呈升高趨勢；質(zhì)量濃度介于50～400 mg?L-1時，HepG2細胞存活率為100%～105%，對細胞生長無顯著影響；當質(zhì)量濃度為800 mg?L-1時，細胞存活率為107%，與正常組比較差異顯著（P
32RU對細胞存活率以及LDH，ALT，AST釋放的影響正常組的HepG2細胞生長良好，培養(yǎng)液中3種酶活性不高，說明正常組細胞沒有受到損傷；H2O2損傷后HepG2細胞存活率僅為正常組的54%，與正常組比較顯著降低（P
33RU對細胞MDA，GSH水平和SOD活性的影響與正常組比較，模型組細胞SOD活性和GSH含量顯著降低（P
34RU對Caspase3，8，9相對活性的影響與正常組比較，模型組細胞Caspase3，8，9的相對活性顯著增高（P
35RU對細胞Casp3 p17和胞漿Cyto c蛋白水平的影響蛋白印跡結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組細胞Casp3 p17和胞漿Cyto c蛋白水平顯著增高何鑫等：祁州漏蘆通過下調(diào)JNK和NFκB抑制H2O2致肝細胞凋亡
36RU對細胞MAPK磷酸化的影響H2O2不影響3種MAPK總蛋白水平，對p38磷酸化水平也無顯著影響，但上調(diào)ERK和JNK磷酸化水平（P
37RU對細胞NFκB磷酸化和核轉(zhuǎn)位的影響
4討論
在肝損傷發(fā)生發(fā)展過程中，氧化應激是重要環(huán)節(jié)。因此，尋找對抗肝臟氧化應激的藥物，可作為治療肝損傷關鍵途徑之一[11]。祁州漏蘆為傳統(tǒng)中藥，其保肝作用研究已有一定積累[79]。本試驗以人HepG2肝癌細胞構(gòu)建H2O2誘導的氧化應激損傷模型，研究祁州漏蘆的抗肝細胞損傷作用，為闡明祁州漏蘆保肝機制提供參考。
當肝細胞受到H2O2誘導的氧化應激損傷時，細胞存活率和細胞毒性是反映細胞受損程度的重要指標。而LDH，ALT，AST作為肝細胞穩(wěn)定的胞內(nèi)酶，培養(yǎng)液中其活性升高是檢測肝細胞毒性的重要指標之一[1113]。本實驗結(jié)果顯示，祁州漏蘆干預可降低細胞毒性，提高細胞存活率，對H2O2誘導的肝細胞損傷具有保護作用。
在H2O2誘導的細胞損傷中，氧化應激是重要損傷機制。肝細胞受損后產(chǎn)生的過量活性氧自由基，攻擊生物膜，引發(fā)脂質(zhì)過氧化，使過氧化物水平增高，因此MDA可以反映組織細胞受自由基攻擊的嚴重程度[1113]。本實驗結(jié)果表明，祁州漏蘆干預可升高細胞SOD活性和GSH含量；降低細胞MDA生成，提示，祁州漏蘆可通過減輕H2O2誘導的肝細胞氧化應激而達到抑制肝細胞損傷。
氧化應激損傷同樣會誘導肝細胞發(fā)生凋亡。氧化應激損傷中產(chǎn)生的過量活性氧會損傷功肝細胞線粒體，使其釋放Cyto c，繼而活化Caspase家族，并最終導致細胞凋亡[14]。Caspase級聯(lián)反應是推動細胞凋亡程序的核心事件，其中Caspase9為內(nèi)源性的線粒體凋亡途徑的關鍵酶，Caspase8為外源性的死亡受體途徑的關鍵酶，二者分別在細胞凋亡的2條主要途徑中起作用，而Caspase3則為凋亡的執(zhí)行者，是2條凋亡通路的共同環(huán)節(jié)，因此是凋亡發(fā)生的標志酶[1314]。本研究顯示，H2O2上調(diào)Casp3和胞漿Cyto c蛋白表達，增高肝細胞Caspase3，8，9相對活性，而祁州漏蘆干預可下調(diào)Casp3和胞漿Cyto c蛋白表達，降低肝細胞Caspase3，8，9相對活性。提示，祁州漏蘆抑制H2O2誘導的肝細胞凋亡，至少與Cyto c釋放引起的線粒體途徑相關，死亡受體途徑的參與還需進一步探討。
氧化應激還可通過多個通路增強MAPK磷酸化而導致細胞凋亡或乃闌因的激活或改變[15]。MAPK通路是細胞外信號到細胞內(nèi)的主要信號通路，ERK普遍認為是“細胞生存”通路，JNK通路則形成調(diào)控細胞增殖和凋亡的一個復雜網(wǎng)絡，存在協(xié)同和拮抗的現(xiàn)象，p38調(diào)控炎癥反應，調(diào)節(jié)NFκB活化[16]。NFκB是一種具有多向轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用的蛋白因子，其與肝細胞損傷的關系一直是肝臟疾病研究中的熱點[17]。研究證實，活性氧可以直接激活NFκB轉(zhuǎn)移入細胞核，誘導靶基因的轉(zhuǎn)錄，促進各種炎癥介質(zhì)釋放而導致肝細胞炎癥，誘發(fā)肝細胞凋亡[17]。本研究結(jié)果顯示，H2O2上調(diào)ERK，JNK和NFκB磷酸化以及NFκB核轉(zhuǎn)位水平，而祁州漏蘆干預可下調(diào)JNK磷酸化和NFκB核轉(zhuǎn)位水平，對ERK和NFκB磷酸化水平無顯著影響。提示，祁州漏蘆可能是通過抗JNK激活和NFκB核轉(zhuǎn)位作用而抑制肝細胞凋亡的。祁州漏蘆抗細胞凋亡作用中NFκB和JNK之間的關聯(lián)、以及線粒體凋亡通路之間的關系需進一步研究。
綜上所述，祁州漏蘆對H2O2所致HepG2細胞凋亡具有抑制作用，其作用可能與其抗JNK激活和NFκB核轉(zhuǎn)位作用有關。
[參考文獻]
[1]韓延忠，周永峰，桑秀秀，等 氧化苦參堿對H2O2誘導L02細胞損傷的抑制作用及其機制的研究[J] 中國中藥雜志，2016， 41（7）：1302
[2]全國中草藥匯編編寫組 全國中草藥匯編. 下冊[M] 2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：919
[3]金愛花 漏蘆對小鼠H22肝癌皮下移植瘤的抑制作用及機制研究[D] 延吉：延邊大學，2011
[4]鄒莉波，于慶海，蔡虹 祁州漏蘆抗氧化作用的實驗研究[J]. 沈陽藥學院學報，1992， 9（1）： 73
[5]張學武，李天洙，孫權(quán) 漏蘆提取物抗炎、鎮(zhèn)痛、耐缺氧及抗疲勞作用的研究[J] 四川中醫(yī)，2005， 23（7）： 45
[6]李勇，金明，全吉淑 漏蘆水提取物抗脂質(zhì)過氧化活性分析[J] 中國公共衛(wèi)生，2011， 27（10）： 1338
[7]宋昊，趙文璽，王玉嬌，等 祁州漏蘆對四氯化碳所致肝臟氧化應激和DNA損傷的影響[J] 中國藥學雜志，2013， 48（22）：1915
[8]宋昊，朱Z，金梅花，等 祁州漏蘆不同溶劑提取物對急性肝損傷模型小鼠的保護作用[J] 中國藥房，2014， 25（3）：205
[9]金明，高峰，金梅花，等 祁州漏蘆對D氨基半乳糖所致小鼠急性肝損傷的保護作用[J] 食品研究與開發(fā)，2016， 37（2）：1
[10]劉春彥 漏蘆對H2O2誘導的HepG2細胞損傷的保護作用[D] 延吉：延邊大學，2012
[11]韓林，李健，林欣，等 黃芪甲苷對Chang Liver細胞酒精性和非酒精性氧化損傷的保護作用[J] 中國中藥雜志，2014， 39（22）：4430
[12]金明，王玉嬌，金梅花，等 兩種細胞建立肝細胞氧化損傷模型比較[J] 中國公共衛(wèi)生，2015， 31（3）：324
[13]賀蘭芝，孟雅坤，韓延忠，等 木犀草素對對乙酰氨基酚誘導的L02肝細胞損傷的保護作用[J] 中國中藥雜志，2016， 41（22）：4234
[14]董曦，孫桂波，羅云，等 異鼠李素對H2O2引起的H9C2細胞氧化應激損傷的保護作用研究[J] 中國藥理學通報，2015， 31（6）：853
[15]吳娜，蔡光明，何群 氧化應激與肝臟損傷[J] 世界華人消化雜志，2008， 16（29）：3310