摘要:水稻白葉枯病菌(Xanthomonas oryzae pv. oryzae,Xoo)從自然孔口水孔或者傷口處侵入水稻葉片,在維管束中定殖、繁殖和擴展,引起典型的葉枯癥狀??梢暬@個動態(tài)的病程過程和快速定量水稻組織中細菌的群體是Xoo-水稻互作研究中亟待突破的技術(shù)難點。本研究在PXO99A菌株中表達gusA基因,將其置于lacZ啟動子、hrpX啟動子和不含有(T1)4終止子的hrpX啟動子下,構(gòu)建了3個示蹤菌株P(guān)XO99A AGUSRBS、PXO99GUSA X和PXO99GUSX-。水稻上毒性測定結(jié)果顯示,這3個示蹤菌株與野生型PXO99A展現(xiàn)相同的毒性。利用示蹤菌株,通過注射接種法,能夠觀察到Xoo在水稻維管束中定殖和擴展的動態(tài)變化;通過噴霧接種法,能夠觀察到Xoo從葉尖或者葉緣侵入水稻葉片引起發(fā)病的特性;發(fā)現(xiàn)PXO99GUSA X和PXO99A AGUSX-比PXO99GUSA RBS能夠更加靈敏地反映這些病程。同時發(fā)現(xiàn),PXO99GUSARBS的細菌數(shù)量與受其侵染的水稻組織的GUS活性顯著正相關(guān)。本研究也評價了利用GUS活性測定法精確和快速地定量水稻組織中細菌群體的可行性。以上結(jié)果表明這套GUS系統(tǒng)是非常有效的,能夠示蹤病原菌的侵染過程和監(jiān)測細菌在水稻組織中的群體數(shù)量,這將為Xoo-水稻互作研究提供有力的技術(shù)支持。
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