摘要：為了建立快速檢測豬流行性腹瀉病毒(PEDV)的膠體金免疫層析方法(GICA),本研究用PEDV免疫BALB/c小鼠,制備雜交瘤細胞。分別采用間接ELISA和表面熒光吸附法(CSFIA)篩選,共得到33株能夠穩(wěn)定分泌抗PEDV單克隆抗體(MAb)的雜交瘤細胞株。通過制備小鼠腹水并純化后測得其中21株細胞分泌的MAb的ELISA效價在1∶1.6×104以上,且均僅與PEDV反應,不與TGEV和PRV反應,特異性較強。采用雙抗體夾心ELISA法篩選出能夠配對檢測PEDV的MAb有5株,以其中的4H7為檢測抗體、5A9為俘獲抗體初步建立了檢測PEDV的GICA。該GICA特異性試驗結果顯示,除了PEDV檢測結果為陽性外,該方法對偽狂犬病病毒、豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒和傳染性胃腸炎病毒的檢測結果均為陰性,特異性較強;該方法針對PEDV的最低檢測限為7.8×103TCID50/mL,敏感性較高;批內和批間重復性檢測樣品結果無明顯差異,具有較好的重復性;將該方法和RT-PCR方法同時檢測115份臨床樣品,該方法與RT-PCR陽性符合率為93%。本實驗制備的PEDV MAb,以及基于該AMbs初步建立的檢測PEDV的GICA為開發(fā)快速檢測PEDV的膠體金免疫層析試紙條奠定了基礎。
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