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摘要：為檢測(cè)H7N9禽流感病毒(AIV) DNA疫苗的免疫保護(hù)效力,本研究將H7N9禽流感疫苗株A/Chicken/Guangxi/SD098/2017 (H7N9)[CK/GX/SD098/17 (H7N9)]的HA基因密碼子優(yōu)化后,定向克隆至載體pCAGGS中構(gòu)建重組質(zhì)粒pCA-SD098。將pCA-SD098轉(zhuǎn)染至293T細(xì)胞后,采用間接免疫熒光(IFA)和western blot檢測(cè),結(jié)果顯示,HA蛋白可以在293T細(xì)胞中正確表達(dá)。分別利用15μg和20μg重組質(zhì)粒pCA-SD098免疫3周齡SPF雞,3周后以相同的劑量和方式加強(qiáng)免疫,加強(qiáng)免疫一周后通過鼻腔分別感染105EID50的同源高致病性AIV (HPAIV)CK/GX/SD098/17 (H7N9)和異源低致病性AIV (LPAIV) A/Chicken/Chongqing/SD057/2017 (H7N9)[CK/CQ/SD057/17 (H7N9)],攻毒10 d內(nèi)記錄免疫雞發(fā)病和死亡情況,檢測(cè)免疫雞HI抗體水平,并于攻毒后第3 d、第5 d和第7 d無菌采集所有雞的喉頭和泄殖腔拭子,采用紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)(HA)檢測(cè)病毒的滴度。結(jié)果顯示,重組質(zhì)粒pCA-SD098免疫后可以誘導(dǎo)SPF雞產(chǎn)生較高水平的HI抗體,15μg pCA-SD098劑量免疫雞后能夠完全抵御H7N9 HPAIV的致死性攻擊,20μg pCA-SD098劑量可以有效阻斷H7N9 LPAIV的感染。攻毒后,所有免疫雞無發(fā)病、無死亡、無排毒,本研究為質(zhì)粒pCA-SD098作為防控H7N9禽流感的候選DNA疫苗提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。