摘要：為建立一種檢測犬圓環(huán)病毒的快速診斷方法,本試驗擬采用普通PCR方法擴(kuò)增犬圓環(huán)病毒Rep基因,將目的基因克隆到T-Vector pMD19 (Simple),以測序正確的重組質(zhì)粒作為模板,建立針對犬圓環(huán)病毒Rep基因的SYBR GreenⅠreal-time PCR檢測方法,并對該方法進(jìn)行敏感性、特異性和重復(fù)性試驗。結(jié)果顯示,Ct值與標(biāo)準(zhǔn)品在6.18×10^9~6.18×10^2copise/μL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,其相關(guān)性為0.998,斜率為-3.671。檢測下限為6.18×10^1copies/μL,且對豬圓環(huán)病毒2型、豬圓環(huán)病毒3型、犬瘟熱病毒、犬傳染性肝炎病毒、犬細(xì)小病毒、犬副流感病毒、犬腺病毒2型、狂犬病病毒等均無特異性擴(kuò)增,所有稀釋度標(biāo)準(zhǔn)品模板均在86.45℃出現(xiàn)特異性熔解峰。通過對臨床樣品進(jìn)行檢測,本方法對犬圓環(huán)病毒核酸的檢出率為9.72%(7/72)。結(jié)果表明,本試驗成功建立了針對犬圓環(huán)病毒Rep基因的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,可實現(xiàn)對犬圓環(huán)病毒快速、靈敏及準(zhǔn)確的診斷。
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