摘要：利用慢病毒表達(dá)系統(tǒng)將TPL2(COT和MAP3K8)質(zhì)粒穩(wěn)定整合在乳倉鼠腎細(xì)胞(baby Hamster Syrian kidney)BHK21細(xì)胞基因組染色體上,建立穩(wěn)定表達(dá)TPL2的BHK21/TPL2細(xì)胞系。構(gòu)建TPL2質(zhì)粒,通過基因合成將TPL2基因和慢病毒載體Lv-PCDH連接,得到重組慢病毒載體Lv-TPL2。通過嘌呤霉素篩選得到的陽性細(xì)胞株BHK21/TPL2即為穩(wěn)定表達(dá)TPL2蛋白的BHK21細(xì)胞株。運(yùn)用間接免疫熒光、激光掃描共聚焦顯微技術(shù)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR和普通PCR等技術(shù)分別驗(yàn)證TPL2基因組整合、轉(zhuǎn)錄、反應(yīng)活性以及FMDV、SVV在BHK21/TPL2細(xì)胞株上的增殖效果。結(jié)果,TPL2基因被穩(wěn)定整合在BHK21細(xì)胞基因組染色體上,建立的細(xì)胞系連續(xù)傳代不丟失。接種病毒后致細(xì)胞病變嚴(yán)重,相對(duì)于正常的BHK21/PCDH細(xì)胞,整合有TPL2的BHK21細(xì)胞對(duì)FMDV、SVV的易感性顯著增強(qiáng)。上述結(jié)果為FMDV疫苗的研制和生產(chǎn)提供了更佳的功能細(xì)胞系。
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