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摘要：目的在大腸埃希菌中表達(dá)重組鱟血G因子,并檢測(cè)其酶活性。方法根據(jù)大腸埃希菌偏好性優(yōu)化G因子成熟肽編碼序列,將G因子α亞基及β亞基克隆至原核表達(dá)載體pET32a-sumo上,分別構(gòu)建pET32a-sumo/factorG-α及pET32a-sumo/factorG-β原核表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化E. coli BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá);產(chǎn)物經(jīng)Ni-NTA親和層析,SUMO蛋白酶切割融合伴侶,獲得重組目的蛋白factorG-α及factorG-β;將二者等摩爾質(zhì)量重組獲得復(fù)合物G,熒光底物Boc-Glu-(OBzl)-Gly-Arg-MCA檢測(cè)其酶活性。結(jié)果經(jīng)PCR及測(cè)序鑒定,重組質(zhì)粒pET32a-sumo/factorG-α及p ET32a-sumo/factorG-β構(gòu)建正確;表達(dá)蛋白均以包涵體的形式存在沉淀中,表達(dá)量占菌體總蛋白的30%及45%;純化的factorG-α及factorG-β蛋白相對(duì)分子質(zhì)量約為74 000和31 000,每1 L LB培養(yǎng)基酶切回收蛋白分別為0. 7和1. 7 mg。factorG-α及factorG-β蛋白與熒光底物幾乎不反應(yīng),而復(fù)合物G可與熒光底物反應(yīng)產(chǎn)生較高的熒光強(qiáng)度。結(jié)論成功表達(dá)了具有酶活性的鱟血G因子,為進(jìn)一步探討鱟血G因子的生物學(xué)功能及新型真菌感染檢測(cè)試劑盒開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。