摘要：本研究旨在建立山丹高效原生質(zhì)體分離體系,為山丹種質(zhì)資源的有效利用提供科學依據(jù)。以山丹鱗莖胚性愈傷組織為材料,通過酶解法獲得山丹原生質(zhì)體,進一步采用3因素4水平L16(34)正交試驗,對原生質(zhì)體分離條件進行優(yōu)化研究。結(jié)果表明:(1)在預處理條件下(0.015 g/mL纖維素酶+0.005 g/mL果膠酶+0.65 mol/L甘露醇)得出最佳酶解時間為6 h,產(chǎn)量為3.47×10^6個/g。(2)對正交試驗結(jié)果進行極差分析,確定原生質(zhì)體產(chǎn)量主次因素為纖維素酶濃度>果膠酶濃度>甘露醇濃度,同時得到最佳酶組合為0.02 g/mL纖維素酶、0.008 g/mL果膠酶,最佳滲透壓濃度為0.6 mol/L甘露醇,原生質(zhì)體產(chǎn)量最高為3.47×10^6個/g,活性為60.32%。(3)在最佳酶組合處理下,采用暗處理可將原生質(zhì)體活性提高到76.15%;在15 min、1000 r/min時,原生質(zhì)體產(chǎn)量最高,為3.51×10^6個/g;在10 min、800 r/min時,原生質(zhì)體活性最高,為61.2%。試驗獲得了山丹原生質(zhì)體最佳分離條件,建立原生質(zhì)體分離體系,可為山丹種質(zhì)資源的有效利用提供參考。
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