摘要：目的探索血管平滑肌細胞泡沫化過程中活化態(tài)C激酶1受體蛋白(RACK1)、蛋白激酶C(PKC)通道蛋白的相關性,抑制PKC的作用后對動脈硬化的效果,為臨床上的進一步治療提供堅實的研究基礎和新的治療靶點。方法使用組織貼塊法從SD大鼠的主動脈中提取原代血管平滑肌細胞并進行鑒定;取第3~9代的原代平滑肌細胞分為對照組和不同濃度脂氧化實驗組(氧化型低密度脂蛋白ox-LDL處理組),采用高效液相色譜法(HPLC法)測定不同組細胞內(nèi)膽固醇含量;通過油紅O染色測定各組平滑肌細胞泡沫化程度;通過免疫印跡(Western blot)技術檢測各組細胞中PKC、磷酸化蛋白激酶C(Cp-PKC)、RACK1、應激活化蛋白激酶(JNK)、磷酸化應激活化蛋白激酶(p-JNK)表達量的變化;加入不同濃度的PKC抑制劑(Calphostin C)處理細胞后檢測抑制劑對PKC/RACK1通道及其下游相關蛋白的影響。用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析,多組間比較用單因素方差分析。結(jié)果與對照組相比,不同濃度ox-LDL刺激下平滑肌細胞內(nèi)總膽固醇(TC)和膽固醇酯(CE)含量均明顯增加,且隨著ox-LDL濃度的增加,TC和CE含量逐漸增加,泡沫細胞內(nèi)的脂滴含量也增加。Western blot檢測發(fā)現(xiàn),與對照組相比,實驗組中加入ox-LDL刺激后,PKC的活性增強,其活化型受體RACK1和p-JNK的表達量也升高。加入PKC的抑制劑Calphostin C后會抑制平滑肌細胞脂質(zhì)的蓄積,抑制泡沫細胞的形成,同樣也會降低p-PKC、RACK1的表達。結(jié)論ox-LDL可以促進平滑肌細胞的泡沫化變,其作用機制可能與PKC/RACK1的作用有相關性。抑制PKC的作用后細胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積降低,可以延緩動脈硬化的發(fā)生,為臨床上治療動脈硬化提供新的治療方案。
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