摘要：目的:利用Cre-LoxP系統(tǒng)建立可調(diào)控的軟骨組織條件性敲除成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子9(fibroblast growth factor,FGF9)小鼠模型。方法:構(gòu)建針對(duì)小鼠Fgf9基因2號(hào)外顯子的重組載體,電穿孔轉(zhuǎn)染胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)。選擇藥物G418和Ganc,篩選陽性ES細(xì)胞并進(jìn)行PCR鑒定。利用顯微注射將ES細(xì)胞注入C57BL/6J小鼠囊胚,移入假孕小鼠子宮,獲得含Neo的flox雜合小鼠。該小鼠去Neo后,與ColⅡ-Cre轉(zhuǎn)基因小鼠雜交,并以他莫昔芬誘導(dǎo),其后代軟骨細(xì)胞內(nèi)flox純合、Cre陽性小鼠的flox區(qū)域被敲除。結(jié)果:Fgf9基因flox雜合子小鼠無明顯異常,可穩(wěn)定繁殖。該flox小鼠與ColⅡ-Cre轉(zhuǎn)基因小鼠交配后,成功建立條件性敲除軟骨組織中Fgf9基因小鼠模型。結(jié)論:利用Cre-LoxP系統(tǒng),可成功建立Fgf9基因條件性敲除小鼠模型,為后續(xù)研究FGF9在骨軟骨發(fā)育及骨關(guān)節(jié)穩(wěn)態(tài)維持中的功能奠定了基礎(chǔ)。
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