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摘要：目的探索并優(yōu)化肺炎鏈球菌莢膜教學(xué)標(biāo)本片的制作條件和染色過(guò)程,以期找到適合我校莢膜教學(xué)標(biāo)本片需求的制作和保存方法,提升微生物實(shí)驗(yàn)課堂的教學(xué)質(zhì)量。方法將肺炎鏈球菌傳代活化后制成懸液,以腹腔注射法(0.2 ml懸液)感染10只昆明小鼠并傳代培養(yǎng),提取發(fā)病待瀕死小鼠的腹腔液涂片,分別使用石炭酸復(fù)紅染色法和改良Hiss莢膜染色法對(duì)其進(jìn)行染色,從菌體形態(tài)、數(shù)量、莢膜大小、染色效果等方面綜合比較兩種染色方法的差異。最后將鏡檢合格的標(biāo)本用中性樹(shù)膠封固,貼上標(biāo)簽后保存?zhèn)溆?。?018年12月,抽查我校2017年12月使用改良Hiss莢膜染色法所染制的35片標(biāo)本片,評(píng)估標(biāo)本片的質(zhì)量。結(jié)果隨著傳代的進(jìn)行,受染小鼠體內(nèi)的肺炎鏈球菌增多,莢膜增大。傳代兩次即可見(jiàn)寬大的莢膜,且第二次傳代感染實(shí)驗(yàn)小鼠的發(fā)病時(shí)間明顯縮短,兩次感染發(fā)病時(shí)間分別為10~12 h和8~10 h。同傳統(tǒng)的石炭酸復(fù)紅染色法比較,改良Hiss莢膜染色法所染制的標(biāo)本,背景均勻,染料顆粒少,菌體呈現(xiàn)深紫色,同淡紫色背景對(duì)比明顯。同時(shí),抽查已保存1年的改良Hiss莢膜染色法所染制的標(biāo)本共35片,抽查結(jié)果表明,改良Hiss莢膜染色法制作、保存的標(biāo)本莢膜仍清晰可見(jiàn),無(wú)褪色和霉變現(xiàn)象,標(biāo)本片完好率達(dá)到100%。結(jié)論在實(shí)際教學(xué)中,小鼠體內(nèi)傳代兩次即可觀察到明顯的莢膜,改良Hiss莢膜染色法的染色效果優(yōu)于傳統(tǒng)的石炭酸復(fù)紅染色法,且封片保存的標(biāo)本可反復(fù)多次使用,能滿足我校教學(xué)需要。