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摘要：目的克隆羊口瘡病毒QH02株ORF011基因并進(jìn)行序列分析及原核表達(dá)、鑒定。方法提取羊口瘡病毒QH02株的DNA,根據(jù)GenBank中(GU320351.1)的序列設(shè)計(jì)并合成引物,PCR擴(kuò)增ORF011基因。將測(cè)序正確的序列用生物信息學(xué)軟件對(duì)其基因及蛋白的結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè),并將基因構(gòu)建至pET-32a(+)原核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌BL21(DE3),挑取陽(yáng)性克隆測(cè)序正確后用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactoside, IPTG)誘導(dǎo)表達(dá),經(jīng)十二烷基硫酸鈉-十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)、Western-blot驗(yàn)證重組蛋白反應(yīng)原性。結(jié)果 PCR擴(kuò)增得到1 137 bp的ORF011基因片段,重組蛋白在大腸埃希菌中以包涵體的形式存在,重組蛋白相對(duì)分子質(zhì)量為60×10~3,且純度較高,Western-blot檢測(cè)結(jié)果表明目的蛋白具有較好的反應(yīng)原性。結(jié)論構(gòu)建的原核表達(dá)系統(tǒng)可以成功表達(dá)B2L蛋白,經(jīng)Western-blot驗(yàn)證具有良好的反應(yīng)原性,可作為羊口瘡防控產(chǎn)品研發(fā)的候選分子。