摘要：為建立豬附紅細(xì)胞體病的PCR-ELISA檢測方法,試驗(yàn)根據(jù)豬附紅細(xì)胞體ENO基因序列,設(shè)計(jì)合成1對分別標(biāo)記生物素(BIOT)和地高辛(DIG)的引物,進(jìn)行PCR-ELISA檢測。通過對包被液的種類和濃度、結(jié)合抗體的反應(yīng)條件、封閉條件、PCR產(chǎn)物的稀釋度及顯色時(shí)間等條件進(jìn)行優(yōu)化,確定陰性、陽性判定的閾值,并進(jìn)行特異性、敏感性及重復(fù)性驗(yàn)證。結(jié)果表明:該方法與豬鏈球菌、豬大腸桿菌、豬肺炎支原體、弓形蟲等均無交叉反應(yīng);敏感性比常規(guī)PCR高10倍,最低檢出量為1.77×10^6拷貝/μL;對40份豬血液樣品的,陽性檢出率為22.5%。該試驗(yàn)建立的方法具有特異、敏感、安全等優(yōu)點(diǎn),將為豬附紅細(xì)胞體病的臨床診斷提供更準(zhǔn)確、實(shí)用的檢測方法。
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