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摘要：旨在研究miR-125b-2對(duì)動(dòng)物精子發(fā)生和成熟的調(diào)節(jié)作用,挖掘與miR-125b-2有密切靶向關(guān)系的功能基因及信號(hào)通路。本研究利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù),構(gòu)建了miR-125b-2基因敲除小鼠模型。將3只野生型(WT)小鼠和3只miR-125b-2敲除型(KO)小鼠睪丸的總RNA樣分別制成樣品池,采用Illumina HiSeq TM 4000平臺(tái)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序(RNA-seq),將組裝得到的Unigene序列注釋到Nr和KEGG數(shù)據(jù)庫中注釋,并進(jìn)行睪丸差異表達(dá)基因(DEGs)聚類分析。結(jié)果顯示,在WT和KO組睪丸組織中共篩選出324個(gè)DEGs,其中被GO注釋的180個(gè)DEGs顯著富集到80個(gè)包括精子染色質(zhì)縮合在內(nèi)的生物學(xué)過程,22個(gè)含有線粒體內(nèi)膜預(yù)序列轉(zhuǎn)位酶復(fù)合物在內(nèi)的細(xì)胞組成以及41個(gè)包括核糖體結(jié)構(gòu)組成在內(nèi)的分子功能。同時(shí)KEGG分析顯示,所有被注釋的DEGs顯著富集到74條信號(hào)通路,其中排前3位極顯著的信號(hào)通路依次為:RNA轉(zhuǎn)運(yùn)、信使RNA監(jiān)視通路和合硒化合物新陳代謝。綜上表明,敲除miR-125b-2主要影響睪丸中與精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和線粒體功能相關(guān)基因的表達(dá),其中與精子發(fā)生相關(guān)的3個(gè)基因Papolb、Tssk 1和Slc 22a14表達(dá)均顯著上調(diào)。結(jié)果為進(jìn)一步研究miR-125b-2對(duì)精子生成的功能調(diào)節(jié)提供基礎(chǔ)。