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摘要：目的建立一種快速、簡便、敏感和特異的基于線粒體細胞色素C氧化酶I(cytochrome C oxidase subunit I,CoI)基因序列的細胞基質(zhì)檢測方法,用于細胞種屬鑒別和不同種屬間的細胞交叉污染分析。方法①提取非洲綠猴腎細胞(Vero細胞)、狗腎細胞(MDCK細胞)和牛腎細胞(MDBK細胞)基因組DNA,以PCR擴增相應(yīng)細胞的線粒體CoI基因保守區(qū)的基因條碼序列,將擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測其基因片段的大小,并與文獻報道的來源于ATCC相應(yīng)細胞系線粒體CoI基因保守區(qū)的基因條碼序列片段大小進行對比,以確定細胞的種屬類別;②用Vero細胞、MDCK細胞和MDBK細胞的線粒體CoI基因保守區(qū)的基因的特異性引物分別與相應(yīng)細胞和其他不同種屬的細胞的基因組DNA進行PCR擴增,檢測方法的特異性;用不同濃度的細胞基因組DNA與相應(yīng)細胞的線粒體CoI基因保守區(qū)的基因的特異性引物進行PCR擴增,檢測方法的靈敏度;③以不同種屬細胞的線粒體CoI基因保守區(qū)的基因的特異性引物分別與多種細胞混合液提取的細胞基因組DNA進行PCR擴增,檢測細胞間的交叉污染。結(jié)果 Vero細胞、MDCK細胞及MDBK細胞線粒體CoI基因保守序列中的基因條碼序列片段大小,與來源于ATCC相應(yīng)細胞系線粒體CoI基因保守序列中的基因條碼序列片段大小相符。該方法具備較好的特異性,檢測靈敏度為1.0 ng/μL,不同種屬間細胞的交叉污染可被檢出。結(jié)論該方法可有效地判斷細胞的種屬來源,亦可用于不同種屬間細胞交叉污染的分析。