摘要：目的優(yōu)化熒光素酶生物發(fā)光報告體系條件,提高基于熒光素酶生物發(fā)光活體成像技術在活體腫瘤研究中的檢測靈敏性和應用潛力。方法在一定數(shù)目穩(wěn)定表達熒光素酶的肝癌細胞(HepG2-Luc)基礎上(固定熒光素酶量)進行體外luciferin和ATP的最佳濃度優(yōu)化,以此優(yōu)化條件進行荷瘤裸鼠活體成像靈敏度檢測和發(fā)光強度分析。結(jié)果Luciferin的最佳濃度是1.25mg/ml,ATP緩沖液的最佳濃度是12.5μM。活體成像實驗顯示,未使用優(yōu)化體系時,將2×10^6肝癌細胞皮下注射后檢測到的光強度為484645,使用優(yōu)化體系進行檢測的發(fā)光強度為1483024;對荷瘤裸鼠進行檢測時,未使用優(yōu)化體系時的實驗鼠與對照鼠的信號強度比值為0.11,而優(yōu)化后的比值增加為0.67,說明以此配比優(yōu)化的熒光素酶報告系統(tǒng)能夠明顯提高裸鼠體內(nèi)腫瘤的檢出靈敏度,延長發(fā)光時間。結(jié)論應用我們建立的熒光素酶生物發(fā)光報告體系優(yōu)化方法可以顯著提高肝癌荷瘤裸鼠活體成像檢測的靈敏度。
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