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摘要：以秦嶺野生大葉鐵線蓮為試驗(yàn)材料,在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn),從而優(yōu)化大葉鐵線蓮ISSR-PCR反應(yīng)體系。結(jié)果顯示,在25μL反應(yīng)體系中,最佳體系為1.0μL模板DNA、2.0μL Mg^2+、2.0μL dNTPs、1.0μL引物以及0.2μL Taq DNA聚合酶和18.8μL ddH2O。最佳擴(kuò)增程序?yàn)?94℃預(yù)變性5 min;94℃變性50 s,47℃退火1 min,72℃延伸1 min,35個(gè)循環(huán);72℃延伸10 min,最后4℃保存。