摘要:目的:利用AlphaLISA技術(shù),建立新型均相檢測(cè)方法,對(duì)金黃色葡萄球菌腸毒素E(SEE)進(jìn)行檢測(cè)。方法:采用2種SEE抗體建立AlphaLISA檢測(cè)方法,羊抗腸毒多克隆抗體同受體微球偶聯(lián),SEE小鼠單克隆抗體標(biāo)記生物素,并同偶聯(lián)了親和素的供體微球連接,3種組分與待測(cè)抗原形成雙抗體夾心結(jié)構(gòu),680nm的光激發(fā)供體微球產(chǎn)生能量,將周圍反應(yīng)體系中的氧分子轉(zhuǎn)變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài),并將能量傳遞給受體微球,產(chǎn)生520~620nm的熒光,熒光信號(hào)與抗原濃度正相關(guān)。對(duì)該方法的反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化,驗(yàn)證其重復(fù)性、敏感性和特異性,并采用該方法檢測(cè)菌液上清和食品模擬樣本。結(jié)果:所建立的AlphaLISA檢測(cè)方法重復(fù)性較好,批間變異系數(shù)和批內(nèi)變異系數(shù)皆小于10%;檢測(cè)SEE的靈敏度可以達(dá)到100pg/mL,并與其他幾種毒素均無(wú)交叉反應(yīng),具有較好的特異性。該方法也能夠準(zhǔn)確地對(duì)金黃色葡萄球菌菌液上清中的SEE進(jìn)行檢測(cè),對(duì)食品模擬樣本的檢測(cè)也有較好的靈敏度。結(jié)論:建立了檢測(cè)SEE的AlphaLISA方法。該方法均相免洗,操作便捷,用時(shí)短,靈敏度更高,可對(duì)菌液上清和不同食品模擬樣本中的SEE進(jìn)行檢測(cè)。
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