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摘要：目的:獲得抗血管內(nèi)皮生長因子165(VEGF165)單克隆抗體,并對(duì)其功能進(jìn)行初步驗(yàn)證。方法:利用噬菌體抗體庫展示技術(shù)篩選與VEGF165結(jié)合的噬菌體克隆并測(cè)序,以測(cè)序正確的陽性克隆質(zhì)粒為模板,PCR擴(kuò)增抗體的輕重鏈可變區(qū)基因,并克隆至哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體中,構(gòu)建全抗體表達(dá)載體;將全抗體表達(dá)載體轉(zhuǎn)染293E細(xì)胞,收取培養(yǎng)細(xì)胞上清,利用ProteinA親和純化抗體;通過結(jié)合ELISA、表面等離子共振檢測(cè)抗體的親和力,以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)為模型驗(yàn)證抗體功能。結(jié)果:經(jīng)過噬菌體抗體庫展示技術(shù)篩出1個(gè)與VEGF165特異性結(jié)合的抗體序列VG2;293E細(xì)胞表達(dá)了VG2全抗體蛋白,SDS-PAGE顯示VG2抗體純度較高;BIAcore檢測(cè)結(jié)果表明該抗體具有較高親和力(KD=0.56nmol/L),競(jìng)爭抑制ELISA結(jié)果表明VG2抗體能抑制VEGF與VEGF受體(VEGFR)的結(jié)合(IC50為1.470μg/mL),進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明VG2能夠抑制VEGF引起的HUVEC增殖。結(jié)論:制備了靶向VEGF165的全人源單克隆抗體VG2,該抗體具有較高的親和力,能阻斷VEGF165/VEGFR2的結(jié)合,并抑制HUVEC的增殖,可以作為潛在藥物應(yīng)用于腫瘤治療。