摘要：目的構(gòu)建載內(nèi)皮抑素（Es）重組表達(dá)質(zhì)粒的殼聚糖納米基因載體并評(píng)價(jià)其抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖的活性。方法選用真核表達(dá)質(zhì)粒pVAX1為重組載體，采用PCR及雙酶切法制備能夠表達(dá)TatPTD—Es融合蛋白的真核表達(dá)栽體pVAXI／TatPTD—Es；離子交聯(lián)法制備殼聚糖載基因納米粒，瓊脂糖凝膠電泳篩選處方，檢測納米粒的形態(tài)、Zeta電位及粒徑；采用最佳處方比例制備載重組質(zhì)粒納米載體，轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC，采用ELISA法測定分泌型TatFFD—Es蛋白的表達(dá)量，CCK-8法測定對(duì)HUVEC的抑制作用，以上兩個(gè)實(shí)驗(yàn)均以Lipofecta．min^TM2000為陽性對(duì)照。結(jié)果pVAX1／TatPTD—Es的真核表達(dá)載體構(gòu)建成功，殼聚糖納米粒Zeta電位（14．3±1．6）mV，粒徑（145±12）nm，納米粒轉(zhuǎn)染HUVEC后細(xì)胞上清中TatPTD—Es的濃度為（182．5±16．3）ng／mL，殼聚糖基因載體轉(zhuǎn)柒HUVEC后對(duì)細(xì)胞有明顯的抑制作用，72h的抑制率達(dá)（53．4±5．4）％（Z=-2．611，P=0．008）。結(jié)論構(gòu)建的殼聚糖納米基因載體能夠成功轉(zhuǎn)染HUVEC并能明顯地抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖。
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