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摘要：自2015年以來,國內(nèi)雞(Gallus domesticus)群因禽腺病毒4型(Fowl adenovirus serotype 4, FAdV-4)感染引起的包涵體肝炎、心包積液的病例呈逐年上升趨勢。為制備反應(yīng)原性良好的FAdV-4血清學(xué)診斷抗原,本研究根據(jù)密碼子優(yōu)化后的FAdV-4 Fiber2全基因合成序列進行了體外擴增,再將其克隆入p Cold表達載體,構(gòu)建原核表達載體pCold-Fiber2。pCold-Fiber2重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌(Escherichia coli) PGTf2感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)異丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalac toside, IPTG)誘導(dǎo)表達后純化Fiber2蛋白,用該蛋白免疫家兔(Oryctolagus cuniculus),成功制備了抗FAdV-4 Fiber2蛋白多克隆抗體。Western blot和間接免疫熒光試驗(indirected immunofluorescence assay, IFA)結(jié)果表明,抗FAdV-4 Fiber2蛋白多克隆抗體純化后可與Fiber2蛋白和FAdV-4發(fā)生特異性反應(yīng),證明Fiber2蛋白具有良好的免疫原性。建立的FAdV-4抗體間接ELISA檢測方法顯示該方法檢測靈敏性為96%,特異性為100%。本研究成功制備了具有良好Western blot和IFA反應(yīng)原性的多克隆抗體,建立了FAdV-4抗體間接ELISA檢測方法,該方法反應(yīng)特異性好、靈敏度高、操作簡單、反應(yīng)結(jié)果穩(wěn)定可靠,適用于雞群抗體水平的監(jiān)測、評估和發(fā)現(xiàn)早期隱性感染,為研制FAdV-4的血清學(xué)診斷技術(shù)和防控該病提供了基礎(chǔ)資料。