摘要:目的: 構(gòu)建pcDNA3.1-β-Trcp真核表達(dá)質(zhì)粒及鑒定,檢測上調(diào)β-Trcp對胃癌細(xì)胞AGS的β-catenin表達(dá)量和亞細(xì)胞定位的影響。方法: 應(yīng)用PCR方法釣取β-Trcp片段與pcDNA3.1載體連接,鑒定重組質(zhì)粒pcDNA3.1-β-Trcp。在胃癌細(xì)胞AGS中分別轉(zhuǎn)染pcDNA3.1和pcDNA3.1-β-Trcp,利用Real-time PCR和Western blot方法檢測β-Trcp表達(dá)情況,免疫熒光檢測胃癌細(xì)胞ACS中,β-catenin表達(dá)量和亞細(xì)胞定位的變化。結(jié)果: pcDNA3.1-β-Trcp重組質(zhì)粒構(gòu)建成功,并在胃癌細(xì)胞AGS中成功表達(dá)。轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-β-Trcp質(zhì)粒的胃癌細(xì)胞AGS中β-catenin整體表達(dá)量下調(diào),在細(xì)胞核內(nèi)的表達(dá)量下調(diào)尤為明顯。結(jié)論: pcDNA3.1-β-Trcp質(zhì)粒為進(jìn)一步研究β-Trcp在胃癌中的作用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。β-Trcp抑制胃癌細(xì)胞AGS的β-catenin表達(dá),核內(nèi)抑制尤為明顯。
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