摘要：異鼠李素是一種黃酮類化合物,廣泛存在于銀杏、沙棘、旱柳和枸杞等植物中,具有多種藥理作用。植物來(lái)源的O-甲基化酶能對(duì)槲皮素羥基進(jìn)行甲基化,因而構(gòu)建重組菌高效表達(dá)O-甲基化酶可應(yīng)用于催化槲皮素生成異鼠李素。筆者對(duì)大豆來(lái)源的O-甲基化酶SOMT-9編碼基因進(jìn)行了密碼子優(yōu)化,其密碼子適應(yīng)指數(shù)（CAI）從優(yōu)化前的0.59,提高為0.87。將優(yōu)化后的基因SysOMT-9插入表達(dá)載體pGEX-2T,構(gòu)建獲得重組質(zhì)粒pGEX-SysOMT。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）,通過(guò)改變誘導(dǎo)溫度及誘導(dǎo)劑濃度,實(shí)現(xiàn)了SOMT-9可溶性表達(dá)。在此基礎(chǔ)上對(duì)其轉(zhuǎn)化條件進(jìn)行了優(yōu)化,其最佳轉(zhuǎn)化條件為：起始菌量OD600為10,轉(zhuǎn)化溫度為30℃,誘導(dǎo)劑IPTG用量為0.01mmol/L,助溶劑DMSO質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%,1%甘油,40μmol/L的S-腺苷基甲硫氨酸和1mmol/L槲皮素。在此條件下,重組菌在12h內(nèi),可將127mg/L的槲皮素,轉(zhuǎn)化生成133mg/L異鼠李素,摩爾轉(zhuǎn)化率為42%,是優(yōu)化前的7.8倍。
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