摘要:真菌與寄主互作過程中常分泌多種效應(yīng)蛋白,但植物病原真菌CAP超家族蛋白是否參與致病過程尚不明確?;谔O果黑腐皮殼菌Valsamali基因組CAP同源基因研究發(fā)現(xiàn)VmPR1c敲除后突變體致病性明顯下降,但VmPR1c蛋白在表達(dá)過程中被降解。本研究借助BLAST、NCBI CDD web server、SignalP 4.1、TMHMM 2.0等進(jìn)行序列分析,利用缺失突變法及在蛋白表達(dá)過程中加蛋白酶抑制劑分別對(duì)該蛋白的降解功能域和降解途徑進(jìn)行了探索。C端區(qū)段缺失突變結(jié)果顯示,突變涉及CAP結(jié)構(gòu)域中的α-helix結(jié)構(gòu)和CBM區(qū)域時(shí),Western blot條帶呈現(xiàn)明顯加深;涉及CTE區(qū)域及CAP結(jié)構(gòu)域中的半胱氨酸時(shí),Western blot條帶則呈現(xiàn)不同程度地減弱。替換VmPR1c的信號(hào)肽或突變其信號(hào)肽切割位點(diǎn)序列,Western blot條帶均有不同程度地加深。分別對(duì)CTE和NTE中的脯氨酸進(jìn)行點(diǎn)突變后,蛋白降解更加嚴(yán)重。在蛋白表達(dá)過程中加入蛋白酶體抑制劑MG132和溶酶體抑制劑chloroquine,與對(duì)照VmPR1c△SP-GFP相比,Western blot結(jié)果無明顯變化,表明VmPR1c蛋白序列C端區(qū)域中的CTE、信號(hào)肽及其切割位點(diǎn)序列以及CAP結(jié)構(gòu)域中的α-helix結(jié)構(gòu)介導(dǎo)其降解,其中CTE和NTE中的脯氨酸對(duì)該蛋白具保護(hù)作用。此外,VmPR1c的降解不通過蛋白酶體和溶酶體途徑。
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