亚洲成色777777女色窝,777亚洲妇女,色吧亚洲日本,亚洲少妇视频

摘要：目的:構(gòu)建人早幼粒細(xì)胞HL60的cDNA文庫(kù),闡明文庫(kù)內(nèi)相關(guān)基因在急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)發(fā)生發(fā)展中的相關(guān)機(jī)制。方法:采用Trizol法提取HL60細(xì)胞總RNA,離心柱法分離純化樣本中的mRNA,逆轉(zhuǎn)錄PCR法合成cDNA第一鏈,酶促法直接合成cDNA第二鏈,膠回收目的長(zhǎng)度的cDN段后將其與pPR3-N載體連接,通過(guò)同源重組方法在酵母Y187菌株中構(gòu)建人早幼粒細(xì)胞cDNA文庫(kù)。將培養(yǎng)的菌液涂布于LB平板進(jìn)行庫(kù)容量鑒定,PCR法鑒定插入片段大小及分布。結(jié)果:提取到的HL60細(xì)胞RNA條帶清晰無(wú)降解且彌散度低,以純化后的細(xì)胞mRNA為模板成功合成cDNA,經(jīng)膠回收cDN段后順利將其與pPR3-N載體連接。將重組載體轉(zhuǎn)化至酵母菌株Y187,通過(guò)同源重組方法在菌株中成功構(gòu)建人早幼粒細(xì)胞cDNA文庫(kù)。在原始電轉(zhuǎn)化菌稀釋100倍后取10μL涂板,共長(zhǎng)約250個(gè)克隆子,庫(kù)容量為2.5×10^6CFU·mL^-1,轉(zhuǎn)化后原始菌液共計(jì)5mL,總庫(kù)容量為1.25×10^7CFU。文庫(kù)的插入片段電泳檢測(cè),平均插入片段大于1200bp,陽(yáng)性率為100%。結(jié)論:成功構(gòu)建人早幼粒細(xì)胞的cDNA文庫(kù),為白血病的發(fā)病機(jī)制及治療機(jī)制的研究奠定了基礎(chǔ)。