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摘要：為探究轉(zhuǎn)錄因子在海島棉纖維中的生物學(xué)功能,以海島棉8個(gè)時(shí)期的纖維為研究對象,利用SMART技術(shù)合成ds-cDNA,經(jīng)DSN進(jìn)行均一化處理,構(gòu)建以pGADT7為載體的海島棉纖維均一化酵母cDNA文庫,利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選與海島棉GbTCP5互作的蛋白。根據(jù)克隆得到的GbTCP5基因的CDS區(qū)設(shè)計(jì)含有NcoⅠ、EcoRI酶切位點(diǎn)的引物,構(gòu)建誘餌載體pGBKT7-GbTCP5。經(jīng)自激活和毒性檢測后共轉(zhuǎn)化酵母菌株Y2HGold,篩選與GbTCP5互作的蛋白。實(shí)時(shí)熒光定量PCR顯示,GbTCP5基因在纖維發(fā)育起始期和伸長期的表達(dá)量較高,且在花瓣和花萼中的表達(dá)量高于其他組織。文庫的質(zhì)量檢測顯示,構(gòu)建的均一化cDNA文庫庫容為9.15×107 cfu·mL-1,重組率為100%,插入片段大小在500~2 000 bp之間。誘餌載體pGBKT7-GbTCP5通過酵母雙雜交系統(tǒng)多次篩選、回轉(zhuǎn)驗(yàn)證,最終確定了4個(gè)互作的蛋白,分別是GbTCP20、GbTCP42、GbTCP45和GbAHP1蛋白。海島棉纖維均一化cDNA文庫的構(gòu)建和篩選,為進(jìn)一步研究海島棉TCP轉(zhuǎn)錄因子及其互作蛋白在纖維發(fā)育時(shí)期中的作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。