摘要：為探究中國荷斯坦牛Toll樣受體1(TLR1)基因與中國荷斯坦牛乳房炎抗性的關(guān)聯(lián)性,以中國荷斯坦牛為試驗對象,構(gòu)建DNA混合池,采用PCR擴增和直接測序法對中國荷斯坦牛TLR1基因進行單核苷酸多態(tài)性(SNP)檢測,從而篩選出對中國荷斯坦牛免疫方面有顯著影響的SNPs位點,同時應(yīng)用在線軟件對中國荷斯坦牛TLR1基因編碼的蛋白質(zhì)進行功能預(yù)測。結(jié)果表明,中國荷斯坦牛TLR1基因編碼727個氨基酸,組成了一種不穩(wěn)定的水溶性蛋白,蛋白質(zhì)二、三級結(jié)構(gòu)均以α-螺旋為主;PCR擴增后,在擴增片段處共發(fā)現(xiàn)8個SNPs位點,分別為A61T-TLR1、C632A-TLR1、C1408T-TLR1、C1451T-TLR1、A1461G-TLR1、A1475C-TLR1、G1550A-TLR1、G1596A-TLR1,其中A61T-TLR1、C632A-TLR1、C1408T-TLR1、A1461G-TLR1、G1596A-TLR1屬錯義突變,分別由原來的賴氨酸(Lys)、苯丙氨酸(Phe)、丙氨酸(Ala)、異亮氨酸(Ile)、纈氨酸(Val)突變?yōu)榧琢虬彼?Met)、亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile),SNPs位點的等位基因頻率在突變前后均存在差異。DNA池結(jié)合直接測序技術(shù)檢測到TLR1基因8個SNPs位點,可作為中國荷斯坦牛乳房炎的遺傳標記進行深入研究;蛋白質(zhì)功能預(yù)測結(jié)果表明,有多種與免疫相關(guān)的因子幾率較高。本研究結(jié)果為中國荷斯坦牛在分子領(lǐng)域的抗病育種提供了理論依據(jù)。
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