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環(huán)糊精水解酶cds1-3底物通道氨基酸的定點(diǎn)突變研究

摘要:本研究對具有大分子水解能力的環(huán)糊精水解酶cds1-3的蛋白結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,選取底物通道相關(guān)氨基酸進(jìn)行定點(diǎn)突變。通過比較突變酶和野生酶的功能差異,定位決定cds1-3特殊功能的氨基酸。采用sybyl 1.2進(jìn)行蛋白質(zhì)底物結(jié)合分析,選取和多聚體形成、底物結(jié)合以及底物通道相關(guān)的氨基酸Glu66、Pro48、Phe289為突變位點(diǎn),反向PCR構(gòu)建pSE380/E66G、pSE380/P48H、pSE380/F289A表達(dá)質(zhì)粒并進(jìn)行表達(dá),獲得酶活突變體并與原始酶進(jìn)行底物特異性比較分析。其結(jié)果顯示,突變酶E66G降解大分子底物木薯淀粉和支鏈淀粉的相對酶活力分別提高26.96%和23.15%,而對小分子底物普魯蘭糖的水解能力下降13.14%。因此,cds1-3是一個能水解大分子底物的特殊環(huán)糊精水解酶,氨基酸Glu66是cds1-3水解大分子支鏈淀粉的關(guān)鍵氨基酸之一。

關(guān)鍵詞:
  • 環(huán)糊精水解酶  
  • 同源建模  
  • 底物通道  
  • 定點(diǎn)突變  
  • 蛋白結(jié)構(gòu)  
  • 氨基酸  
作者:
湯宏赤; 莫莉; 閉海; 林麗華; 郭媛; 龐浩
單位:
廣西科學(xué)院; 國家非糧生物質(zhì)能源工程技術(shù)研究中心; 非糧生物質(zhì)酶解國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 廣西生物煉制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 廣西生物科學(xué)與技術(shù)研究中心; 廣西南寧530007; 廣西大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院; 廣西南寧530004
刊名:
廣西科學(xué)

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期刊名稱:廣西科學(xué)

廣西科學(xué)雜志緊跟學(xué)術(shù)前沿,緊貼讀者,國內(nèi)刊號為:45-1206/G3。堅(jiān)持指導(dǎo)性與實(shí)用性相結(jié)合的原則,創(chuàng)辦于1994年,雜志在全國同類期刊中發(fā)行數(shù)量名列前茅。