摘要：目的:構(gòu)建一種新的復(fù)制子為RSF的溫度調(diào)控型原核表達(dá)載體,以滿足多蛋白共表達(dá)時對不同復(fù)制子表達(dá)載體的需求。方法:利用Xho I和Xba I雙酶切pRSF-Duet-1獲得RSF復(fù)制子序列和卡那霉素抗性篩選基因KanR,從p BV220載體中PCR擴(kuò)增溫度調(diào)控型啟動子PL/R序列,將這兩段序列酶連轉(zhuǎn)化并經(jīng)卡那霉素篩選后得到新的原核表達(dá)載體pRSF-PL。將增強(qiáng)綠色熒光蛋白(EGFP)基因克隆到該載體中進(jìn)行EGFP表達(dá)檢測。結(jié)果:pRSF-PL載體含有預(yù)期的RSF復(fù)制子序列和PL/R啟動子。該載體在表達(dá)EGFP基因時,30℃和37℃條件下誘導(dǎo)的EGFP蛋白表達(dá)水平低,42℃條件下能實(shí)現(xiàn)EGFP蛋白的大量表達(dá)。結(jié)論:成功構(gòu)建了以RSF為復(fù)制子的溫度調(diào)控型高效原核表達(dá)載體pRSF-PL。
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