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LV-EGFP標(biāo)記兔角膜基質(zhì)細(xì)胞體外基質(zhì)層移植的實(shí)驗(yàn)觀察

摘要:目的:探討兔角膜基質(zhì)細(xì)胞(CSCs)體外移植兔角膜后的存活時(shí)間。方法:體外培養(yǎng)原代兔CSCs,并行細(xì)胞免疫組化鑒定,利用慢病毒載體(LV)攜帶標(biāo)記基因增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)轉(zhuǎn)染兔CSCs,倒置熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞生長狀態(tài)及熒光強(qiáng)度,體外動(dòng)物實(shí)驗(yàn),隨機(jī)分為2組,實(shí)驗(yàn)組行LV-EGFP標(biāo)記的兔CSCs細(xì)胞懸液角膜基質(zhì)注射,對照組等量生理鹽水角膜基質(zhì)注射,轉(zhuǎn)染后1wk,1mo取材冰凍切片觀察移植的CSCs熒光,石蠟切片行蘇木素-伊紅(HE)染色觀察組織形態(tài)。結(jié)果:LV-EGFP轉(zhuǎn)染兔CSCs在倒置熒光顯微鏡下24h后可見少量熒光,96h和110h熒光較強(qiáng),轉(zhuǎn)染后的CSCs與正常CSCs細(xì)胞形態(tài)無明顯差異;轉(zhuǎn)染后1wk,1mo實(shí)驗(yàn)組中角膜基質(zhì)層中可見綠色熒光,對照組中無綠色熒光;石蠟切片1wk實(shí)驗(yàn)組見明顯上皮細(xì)胞增生及角膜輕微水腫,少量炎癥細(xì)胞浸潤,轉(zhuǎn)染后1mo實(shí)驗(yàn)組上皮細(xì)胞增生減弱,未見角膜層水腫;對照組1wk,1mo均未見明顯異常。結(jié)論:LV-EGFP標(biāo)記的兔CSCs行體外角膜基質(zhì)移植,可在角膜中至少存活1mo,且與鄰近組織相容性較好。

關(guān)鍵詞:
  • 角膜基質(zhì)細(xì)胞  
  • 慢病毒  
  • 增強(qiáng)型綠色熒光蛋白  
  • 細(xì)胞移植  
作者:
張璐; 李妍; 李夢怡; 王爔烔; 李楠鈺; 孫子雯; 胡竹林
單位:
昆明醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院; 云南省第二人民醫(yī)院云南省眼科研究所; 云南省眼科疾病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 中國云南省昆明市650021
刊名:
國際眼科

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期刊名稱:國際眼科

國際眼科雜志緊跟學(xué)術(shù)前沿,緊貼讀者,國內(nèi)刊號為:61-1419/R。堅(jiān)持指導(dǎo)性與實(shí)用性相結(jié)合的原則,創(chuàng)辦于2000年,雜志在全國同類期刊中發(fā)行數(shù)量名列前茅。