摘要:【目的】分離、鑒定福建省某養(yǎng)殖場(chǎng)病死山羊的病原,明確山羊病死原因,為山羊偽結(jié)核棒狀桿菌病的防治提供科學(xué)依據(jù)。【方法】以無(wú)菌采集的病羊肺臟為材料,進(jìn)行細(xì)菌分離純化,鑒定分離菌株的形態(tài)特征及培養(yǎng)特性;提取菌株DNA,利用特異性引物和16S rRNA通用引物進(jìn)行PCR,16S rRNA擴(kuò)增片段送公司進(jìn)行克隆測(cè)序并對(duì)序列進(jìn)行分析;并進(jìn)行生化、藥敏和動(dòng)物攻毒試驗(yàn)?!窘Y(jié)果】該分離菌株在含10%脫纖維綿羊血的瓊脂培養(yǎng)基上,生長(zhǎng)成直徑1 mm左右、中央凸起、乳白色、邊緣不整齊、伴有β溶血環(huán)的菌落,在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)不良,在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)。16S rRNA測(cè)序結(jié)果經(jīng)NCBI在線軟件Blast后顯示與GenBank上的偽結(jié)核棒狀桿菌的同源性高達(dá)100%;山羊偽結(jié)核棒狀桿菌特異性PCR有目的擴(kuò)增條帶;生化試驗(yàn)結(jié)果與伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊(cè)中偽結(jié)核棒狀桿菌相符,表明分離菌為山羊偽結(jié)核棒狀桿菌,命名為FJ-PN。小鼠攻毒試驗(yàn)結(jié)果顯示,小鼠腹腔與皮下注射0.3 mL含量為4×10^5 CFU·mL^-1的分離菌,在40 h內(nèi)全部死亡;山羊攻毒試驗(yàn)結(jié)果顯示,山羊經(jīng)皮下注射2 mL、鼻腔接種1 mL含量為4×10^5 CFU·mL^-1的分離菌3 d后死亡。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示該菌對(duì)克拉霉素、環(huán)丙沙星、青霉素、四環(huán)素、左氟沙星、氧氟沙星、慶大霉素高度敏感,對(duì)紅霉素、氯霉素、氨芐西林、頭孢噻肟、頭孢西丁、利福平低度敏感,對(duì)鏈霉素、甲氧芐啶表現(xiàn)耐藥?!窘Y(jié)論】本研究分離到的1株細(xì)菌為山羊偽結(jié)核棒狀桿菌,具有較強(qiáng)的致病性,且對(duì)抗生素表現(xiàn)出一定的耐藥性,為該病的診斷和合理用藥提供了理論支持。
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