摘要：以鯉春病毒血癥病毒(Spring Virernia of Carp Virus,SVCV)shlj1分離株基因組RNA為模板,利用RT-PCR擴增獲得SVCV糖蛋白(Glycoprotein,G)部分基因序列(420 bp),克隆至pET-32a原核表達載體,構建重組質(zhì)粒pET-32a-G;將重組質(zhì)粒轉入大腸桿菌Rosetta表達菌株,利用SDS-聚丙烯酰氨凝膠電泳(SDS-PAGE)對截短G蛋白的表達及純化情況進行檢測;將純化的G蛋白免疫小鼠制備鼠抗血清,采用酶聯(lián)免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和細胞間接免疫熒光抗體試驗(Indirect fluorescent antibody test,IFAT)對抗血清進行鑒定。SDS-PAGE結果顯示該重組截短G蛋白與預期大小相符(約為35 kDa),以包涵體的形式表達;ELISA結果顯示,制備的鼠抗截短G蛋白血清效價為1∶80 000;IFAT結果顯示,抗血清能夠識別不同地區(qū)的SVCV分離株(黑龍江省3株,遼寧省2株),在FITC標記的羊抗鼠IgG作用下,呈特異性綠色熒光。結果表明,制備的截短SVCV G蛋白具有良好的免疫原性,利用其所制備的抗體能夠識別我國不同SVCV分離株病毒表面天然結構的糖蛋白。
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