摘要：聚乙烯醇脫氫酶(PVADH)是降解聚乙烯醇(PVA)的關(guān)鍵酶,大腸桿菌或畢赤酵母生產(chǎn)PVADH需額外添加輔酶吡咯喹啉醌(PQQ)才具活性。為了降低添加PQQ的成本,在PQQ天然生產(chǎn)菌肺炎克雷伯桿菌(Klebsiella pneumoniae)中表達(dá)全酶PQQ-PVADH。首先通過外源基因密碼子優(yōu)化實(shí)現(xiàn)PVADH的高效表達(dá),PVADH酶活達(dá)到45U/mL;進(jìn)而通過輔酶再生提高PQQ產(chǎn)量,雙質(zhì)粒重組菌Kp(pvadh+pqq)的PVADH酶活達(dá)到68U/mL;最后經(jīng)發(fā)酵優(yōu)化,PVADH酶活達(dá)到81U/mL,為PQQ-PVADH的生產(chǎn)提供了另一種選擇方案。
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